花生总DNA的快速提取与纯化研究

优化了花生总DNA的提取条件。用3.50ml细胞提取液,2.50ml饱和KCl溶液,0．25倍样液体积的酚／氯仿／异戊醇(21：28：1)溶液,0.30倍样液体积的氯仿／异戊醇溶液,0.60倍体积的异丙醇,可从1．0g花生芽中提得4．0mg纯DNA。用该法提取总DNA的产率高,时间短,DNA的纯度高。     

稗草DNA的快速提取研究

优化了稗草DNA的提取条件,水浴时间为60min,无水乙醇用量为0.60ml,细胞提取液用量为6．0ml,饱和NaAc溶液用量为1.0ml,酚／氯仿／异戊醇溶液、氯仿／异戊醇溶液和异丙醇与样液体积比别为0．60、1．0和0．60。从稗草种子提取时,产率为430μg／g。琼脂糖凝胶电泳证实,所提稗草DNA无断裂降解。     

绿豆核DNA的快速提取方法研究

为缩短提取核DNA的时间,提高DNA的得率,对绿豆核DNA的提取条件进行了优化,用4.00ml细胞提取液,2.50ml饱和KCl溶液,0.30倍样液体积的酚/氯仿/异戊醇（21：28：1）溶液,0.30倍样液体积的氯仿/异戊醇溶液,0.90倍体积的异丙醇,可从1.0g绿豆芽中提得4.0mg纯DNA。     

两栖动物酒精标本DNA模板的快速提取

本文以中国角蟾属4个种的蝌蚪酒精固定标本为材料,取尾部肌肉组织0．1g,滤纸吸干组织块表面的酒精,在研钵中用剪刀剪碎,液氮研磨成粉(必要时可加少量石英砂),转入1．5ml离心管,加入1．0ml提取缓冲液(0．5％SDS,10mmol/L Tris-HCl,100mmol/L EDTA,pH8.0),37℃温浴h,5000r/min离心10min,取上清转入另一1.5ml离心管,氯仿/异戊醇(24：1)抽提两次,上清液加2倍体积预冷(-20℃)的无水乙醇沉淀DNA,12000r/min离心3min,无菌条件下风干后,50μl TE溶解,4℃保存备用。以通用引物PCR扩增12S rRNA和16S rRNA基因部分片段并测序。本文不采用蛋白酶K提取酒精保存标本的DNA模板,全部流程只需3个小时,可同时提取数十个乃至数百个标本,并且所提取的DNA模板适合短片段PCR扩增。     

泥胡菜中芦丁含量分析

建立高效液相色谱法测定泥胡菜中芦丁的方法,优化芦丁的提取工艺。使用Diamonsil（TM）C18柱,流动相：乙腈-0．4％磷酸溶液（20：80）,检测波长：255nm,流速：1ml／min,柱温：30℃。样品用50％乙醇超声提取30min提取率最高为0．166％;芦丁在0．1～2．0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9994）,平均加样回收率99．3％（RSD=0．8％,n=5）。该方法准确、快速、重现性好,可作为控制泥胡菜质量的有效测定方法。     

益母草（Leonurus artemisia）灭螺效果研究

本实验研充分别采用益母草的根、茎、叶的0．10、0．25、0．50、2．00、1．00g／L和水苏碱的0．20、0．40、0．60、0．80、1．00g/L 5个不同浓度梯度的处理液处理钉螺,设清水和0．001g／L浓度的氯硝柳胺溶液为对照。结果表明：（1）益母草各部分的水浸液均有很好的灭螺效果。用不同浓度的处理液浸杀钉螺,在不同时间的处理下,钉螺死亡率存在差异,其钉螺死亡率是随处理浓度的增加和时间的延长呈上升趋势,0．5g／L以上的益母草根、茎、叶、化水浸液和浓度达0．60g／L以上的水苏碱处理液均可达到100％的明显毒杀钉螺致死效果,与通常使用浓度0．0001g／L氯硝柳胺溶液的灭螺效果相当,不过益母苹根、茎、叶水浸液的毒效较氯硝柳胺略慢,用0．0001g／L氯硝柳胺溶液处理钉螺2—3d可达100％的死亡率,而用0．5g／L以上的益母草根、茎、叶水浸液水溶液处理需要3—5d才能达到同样的效果;灭螺效果顺序依次为：叶〉茎〉根。（2）钉螺趋避性研究表明水苏碱和益母草根、茎和叶的处理液对钉螺具有明显的驱逐作用,而盐酸益母草碱几乎没有作用。由此获得化感作用植物益母草灭螺的化学生态学证据。为研制新的具中国特色的植物成份灭螺剂打下了基础。并为合成仿生灭螺剂以及最终构建生态工程中强化感作用植物群落灭螺提供理论依据。     

盐析法提取烟粉虱基因组DNA

所提供的提取烟粉虱基因组DNA的新方法-盐析法,同氯仿-异戊醇抽提法相比,无需利用研磨棒,提取基因组DNA所用时间更短并且有效地避免了氯仿-异戊醇对实验人员的身体伤害.经检测,利用盐析法可以有效的提取B型烟粉虱的卵、伪蛹和成虫、Q型、ZHJ-1型与ZHJ-2型烟粉虱成虫的基因组DNA,并且适用于RAPD、COI、SSR分子标记的PCR扩增.     

福尔马林保存的动物标本基因组DNA的提取方法

从在福尔马林长期保存的动物标本中提取基因组DNA用于分子生物学研究一直是一个未得到彻底解决的难题。本文提出了一种从浸泡在福尔马林的大仓鼠肝脏和日本鳗鲡肌肉标本中提取基因组DNA的新方法。取浸泡于福尔马林中的大仓鼠肝脏或日本鳗2鲡肌肉适量,用PBS溶液冲洗,放在灭菌的吸水纸上将其揩干,于超净工作台内用无菌剪刀将材料剪成50mg的小块,放入PBS液浸泡12－24h;然后转入70％的乙醇中处理12－24h。依次换入下列梯度酒精中处理：80％乙醇,2h,重复一次;90％乙醇,2h,重复一次;95％乙醇,2h,重复一次;100％乙醇,1h,重复一次。然后将材料放入1／2倍的PBS液中浸泡12h。其间更换一次溶液。提取方法参考Sambroock等人（1989）,加蛋白K瓣量按标准量（100μg/mlL),在50－56℃温浴3－6h处理过程中,不断轻摇混匀,视消化效果可以重复加入标准量的1／2倍蛋白酶K进行消化,直至将材料完全消化为止;酚氯仿抽提最后一次的上清液移入透析袋中透析;沉淀DNA时,在－20℃下20min效果为宜。该方法主要特点在于对标本进行预处理,在保证不使DNA进一步了解的前提下,首先去除标本中所含的福尔马林溶液的成分,然后利用改进的酚氯仿抽提法提取该类标本的基因组DNA,再进一步用透析法纯化DNA。研究结果表明,采用该方法提取和纯化被试标本基因组DNA能较好地应用于RAPD,微卫星位点的PCR扩增、Suthern和斑点杂交。     

乙醇保存的动物标本基因组DNA提取方法的比较

为提高从乙醇长期保存的动物标本中提取大分子DNA的质量,用5种不同方法对动物组织进行预处理实验,然后采用SDS／蛋白酶K裂解,酚一氯仿抽提和乙醇沉淀提取总DNA,通过0．8％琼脂糖凝胶对模板进行电泳和PCR产物作鉴定,经比较,用0．9％NaCL法、PBS法和混合液法进行预处理,消除乙醇对Taq酶的影响以及蛋白质和核酸交联问题,为提取动物基因组DNA的3种更理想方法。     

油菜蜂花粉总黄酮几种提取方法的研究

本文分析比较了油菜蜂花粉总黄酮的4种提取方法的差异。并且采用正交实验,分别研究和确定了超声提取法及加热回流提取法的最佳工艺条件。结果表明,加热回流提取的最适条件为：温度80℃下用65％乙醇回流提取4次,每次2h,料液比为1：12。测得含量为35．18mg／g;超声提取的最适条件为：温度40℃下用1：12的料液比,超声提取25min,超声功率100W,测得含量为31．27mg／g;冷浸提取的含量为32．33mg／g;索氏提取的含量为38．06mg／g。