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1.
精胺对牛肝tRNA^lle氨基酰化的刺激作用 总被引:3,自引:0,他引:3
本实验用纯化的牛肝异亮氨酸tRNA(tRNA^Ile)和异亮氨酰tRNA合成酶,研究了精胺对Ile-tRNA复合物形成及IleRS活性的作用。结果表明:精胺能特异地促使牛肝tRNA^Ile氨基酰化反应;对IleRS活性无影响;能明显地增加形成Ile-tRNA复合物反应的Vmax和tRNA^Ile的Km值。 相似文献
2.
构建了3种来源于水稻、人和啤酒酵母的线粒体tRNA^Trp基因。实验表明这些线粒体tRNA^Trp的体外转录产物具有被枯草杆菌色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)氨酰化的能力,但是不能被鼠肝来源的氨酰tRNA合成酶粗酶所催化。动力学资源常数测定表明枯草杆菌TrpRS对线粒体tRNA^Trp的亲和力为野生型tRNA^Trp的一半,而在催化效率上,水稻和啤酒酵母线粒体tRNA^Trp的色氨酰化能力比野 相似文献
3.
大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶变种ArgRS381KA的基本性质 总被引:1,自引:1,他引:0
本文研究了Ly381变为Ala的精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)变种ArgRS381KA的最适pH和稳态动力学性质;比较了此酶与天然酶ArgRS的荧光光谱性质和热稳定性。实验结果表明ArgRS381KA的氨酰化活力和ATP ̄PPi交换活力的最适pH分别为8.0和7.0,与天然酶相同;ArgRS381KA的氨酰化活力对精氨酸、ATP和tRNA^Arg的Km分别为12μmol/L、0.3mmol/ 相似文献
4.
由于精胺(spermine)能特异地刺激哺乳动物tRNA~(Ile)的氨基酰化,本文用纯化的牛肝tRNA~(Ile)观察了精胺和Mg(2+)对tRNA~(Ile)CD光谱的影响。结果显示:Mg(2+)可使牛肝tRNA~(Ile)CD光谱峰向短波方向偏移2nm,波峰为263nm,峰值被增大约10%,ΔθMg(2+)=2.3×103deg·cm2/dmol;而精胺使牛肝tRNA~(Ile)CD光谱峰减少40%,Δθspermine=1×10(-4)deg·cm2/dmol;精胺和Mg(2+)对肝tRNA~(Ile)-IleRS复合物或IleRS的CD光谱基本无影响。表明Mg(2+)和精胺可影响牛肝tRNA~(Ile)的构象。实验同时以酵母tRNA(Phe)和E·colitRNA~(Ile)作为对照。 相似文献
5.
采用高表达大肠杆菌tRNALeu菌株提取、纯化了亮氨酸等受体转移核糖核酸tRNALeu1和tRNALeu2.利用稳态动力学手段研究了tRNALeu1及脱镁tRNALeu1在不同稀土离子作用下与纯化亮氨酰-tRNA合成酶的氨酰化作用.tRNALeu1与亮氨酰-tRNA合成酶的结合及催化效率均受参与稀土离子的影响,表观Km值有较明显的变化.结果表明,亮氨酰-tRNA合成酶催化的tRNALeu1氨酰化反应所需Mg2+能够被稀土离子取代,但亲合性能不同. 相似文献
6.
编码大肠杆菌(E.coli)精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)的基因(argS)和编码亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)的基因(LeuS)分别插入pUC18后,各自在E.coli TG1转化子中的表达有很大的差异(高表达倍数分别为1000和35倍)。为了调查造成其表达差异的原因,用argS的5'上游非编码区取代leuS的5'上游非编码区,构建了融合基因parg-leuS;将它插入质粒pUC18 相似文献
7.
本文研究了Lys381变为Ala的精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)变种ArgRS381KA的最适pH和稳态动力学性质;比较了此酶与天然酶ArgRS的荧光光谱性质和热稳定性。实验结果表明ArgRS381KA的氨酰化活力和ATP ̄PPi交换活力的最适pH分别为8.0和7.0,与天然酶相同;ArgRS381KA的氨酰化活力对精氨酸、ATP和tRNAArg的Km分别为12μmol/L、0.3mmol/L和1.1μmol/L,Vmax为16000U/mg,kcat为16s-1;ATP ̄PPi交换活力对精氨酸、ATP和PPi的Km分别为92.9μmol/L、0.85mmol/L和80.1μmol/L,Vmax为28000~30000U/mg,kcat为32s-1.ArgRS381KA的荧光激发光谱和发射光谱与ArgRS基本相同。热失活速度比天然酶慢。 相似文献
8.
用苯酚法,DEAE-SephadexA_(25)柱层析分离并纯化了河西走廊分布的不同生境芦苇的tRNA。用tR-NA结合 ̄3H-Leu、 ̄3H-Gly及 ̄3H-Ala的氨酰化活性研究了四种生境芦苇的tRNA氨酰化特性。结果表明,三种 ̄3H-氨基酸的tRNA氨酰化活性在不同生境之间及同一生境芦苇的不同发育时期表现出极大差别;tRNA含量也存在类似的变化,表现在沙生芦苇与沼泽芦苇5-9月份含量均增高,盐化草甸-沙丘过渡带芦苇中tRNA含量均较其它生境芦苇低,而盐化草甸芦苇中以7月份含量最高;蛋白水解酶活性除沙生芦苇9月份降低外,其余三种生境芦苇均呈增高趋势;蛋白质含量在盐化草甸芦苇中与总氨酰化活性变化相一致,而过渡带芦苇与蛋白水解酶活性变化类似,沙生芦苇5月份表现为水解占优势后期则主要与合成有关,沼泽芦苇7、9月份却与水解相关。产生这些结果的原因之一是芦苇代谢对各自生境适应的差异性。 相似文献
9.
利用T7RNA聚合酶/启动子表达系统在大肠杆菌JM109(DE3)中表达化学合成的大鼠肝tRNA^Ile基因,经酚抽提,DEAE-52离子交换柱层极及PLC层析,分离纯化大鼠肝tRNA^Ile,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Noprthern-blot鉴定表明,大鼠肝tRNA^Ile基因成功地获得表达,氨酰化活性检测表明,纯化后,每1A260(40μg)的tRNA^Ile可负载约650pmol的Ile 相似文献
10.
用聚合酶链反应(PCR)以大肠杆菌JM83基因组DNA为模板,扩增了精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)基因。将该基因重组到载体pUC18上转化到大肠杆菌TG1中,得到在转化子中ArgRS的高表达。粗抽液中ArgRS的氨酰化活力,TG1和TG1转化子分别为1.65U/mg和210U/mg,后者为前者的127倍。DNA顺序测定表明,与从大肠杆菌JA200中克隆到的ArgRS基因相比913位碱基为A而不为C,这种变化使ArgRS的305位氨基酸残基由Gln变为Lys,但这种改变不影响酶的活力。 相似文献