单倍体水稻体细胞组织的植株再生及其激素调节

本文报道激素对调节单倍体幼穗组织去分化与分化的方向以及器官形成的影响。发现在试验浓度内(2毫克/升),2,4-D诱导组织去分化,NAA诱导根的大量形成,KT抑制愈伤组织形成和器官分化。KT2毫克/升 NAA2毫克/升使外植体不经过愈伤组织阶段就直接分化大量的苗。当KT/NAA=2:2时,直接分化苗的频率较高,达76％,不同浓度的2,4-D试验表明,2,4-D2毫克/升或4毫克/升时,愈伤组织诱导率高达94％以上。固体和液体继代培养中,低浓度的2,4-D(0.5—0.1毫克/升)加0.1毫克/升的KT,对愈伤组织保持旺盛的生长和后来的分化有良好的作用。发现单倍体体细胞组织再生的植株,白苗很少。讨论了单倍体体细胞愈伤组织无性系用于诱发突变和体细胞遗传研究的可能性。对于愈伤组织的再分化,不仅需要细胞分裂素,而且诱导培养基中生长素浓度的影响也是显著的。     

佛手瓜简化培养基诱导小麦花粉植株的研究

我们研究了佛手瓜简化培养基(表1)诱导小麦花粉植株;以马铃薯简化培养基(简称“薯“)作为诱导愈伤组织的对照培养基和MS 吲哚乙酸0.5毫克/升 激动素2毫克/升(简称MS)作为愈伤组织分化的对照培养基。 愈伤组织的诱导结果是“薯”和“瓜 激素”两种培养基的诱导频率因不同材料而异(表2,表3)。多数的材料是“薯”的诱导频率较高,但这两种培养基诱导的愈伤组织转移至MS分化培养基时,前者分化白苗率较高,后者分化绿苗率较高。值得注意的是“瓜”培养基诱导的愈伤组组频率高于“瓜 激素”(表3)。 愈伤组织的分化是“瓜(分)”对愈伤组织的分化频率仅为MS的二分之一;同时前者比后者分化绿苗率也较低(表4)。然而,“瓜(分) Fe”与MS对愈伤组织的分化频率几乎相等,绿苗分化率前者高于后者(表5)。     

川芎的组织培养及植株再生

植物名称:川芎(Ligusticum wallichii Franch)材料类别:长有1—2片真叶的幼嫩茎段和叶片培养条件:基本培养基采用MS。诱导愈伤组织培养基为MS,每升补加2,4-D2.0毫克,6BA0.4毫克;诱导芽分化培养基为MS,每升补加6BA0.4毫克、IAA0.5毫克;诱导根分化培养基为1/2MS,每升补加6BA0.2毫克,IAA1.0毫克。培养温度     

油菜游离细胞培养及易再生的体细胞无性系的建立

以芥菜型油菜(Brcssica juncea)下胚轴来源的愈伤组织为材料,进行悬浮细胞振荡培养,得到游离的单细胞。这些细胞作浅层液体静置培养,可获得高频率的愈伤组织。在附加有水解乳蛋白200毫克/升、BA 2—3毫克/升及GA,0.1—1毫克/升的MS培养基上,这些愈伤组织分化了芽。分化的芽在无激素或附加有0.01—0.1毫克/升IAA或NAA的MS培养基上长出根,从而发育成完整植株。当对游离细胞获得的再生植株的茎切段愈伤组织,再经上述程序进行细胞培养时,发现愈伤组织诱导率及愈伤组织分化频率均远远高于原供体,从而建立了B.juncea易再生的体细胞无性系。     

水稻花粉植株的诱导及其后代观察

研究了水稻(Oryza sativa)花药的离体培养及其花粉植株后代的表现,得到如下结果: 1.用加有2,4-D 1—5毫克/升的Blaydes培养基培养水稻花药,诱导出水稻花粉愈伤组织。采用花粉处于单核期的花药进行培养比较合适。 2.诱导愈伤组织成苗,以二次诱导法效果较好。即将愈伤组织种植在低浓度激素的培养基上(IAA 0.05—0.5毫克/升,激动素1—2毫克/升),在此培养基上分化快,芽点多,但芽不易伸长;芽点出现后再移到激素浓度较高的培养基上(IAA 2毫克/升,激动素4毫克/升),很快出现幼苗。 3.水稻花粉植株二代,田间表现和室内分析结果表明基本整齐一致,没有分离。杂种F_1花粉植株后代在许多性状上超过双亲,有选种价值。说明水稻花药培养用于育种是可能的。     

黄花菜组织培养研究简报

植物名称:黄花菜(Hemerocallis fullva)。材料类别:心叶。培养条件:诱导愈伤组织培养基(培养基-1):N_6+2,4-D2毫克/升+6BA_1毫克/升;分化培养基(培养基-2):N_6+2,4-D0.25毫克/升+6BA2毫克/升+肌醇100毫克/升。将芽及愈伤组织转移至N_6+2,4-D0.1毫克/升+IAA_1毫克/升+6BA0.2毫克/升+肌醇     

从小黑麦未授粉的幼嫩子房培养出小植株

通过未授粉子房的离体培养技术,在Ms无机盐十甘氨酸(7.7毫克/升)十天门冬素(1480毫克/升)十烟酸(0.15毫克/升) VB_1(0.25毫克/升)十VB_6(0.25毫克/升)十泛酸钙(0.25毫克/升) 2%蔗糖的固体培养基上,由小黑麦1号未授粉的幼嫩子房中诱导出愈伤组织,诱导率为53.4—66.8%。将愈伤组织转移到N_6 2.4-D(0.5毫克/升) 动力精(2毫克/升) 2%蔗糖 1%琼脂的培养基上,或在愈伤组织转移到N_6 2.4-D(2毫克/升) 6-BA(2毫克/升) 2%蔗糖 1%琼脂培养基前后,分别注入2毫升的N_6 IAA(1毫克/升) 6-BA(2毫克/升) 2%蔗糖的培养液,均可由愈伤组织分化出小植株,但幼苗移栽时多数未成活,仅一株抽穗开花,然而不育。本文还讨论了外源激素对植株分化的作用问题。     

紫云英叶片及叶肉原生质体的培养

本工作研究了豆科植物紫云英的叶片及叶肉原生质体的培养。叶片培养实验表明,诱导愈伤组织的最适培养基为MS加1.0-2.0毫克/升2,4-D和0.25毫克/升KT;诱导根分化需加1.0—5.0毫克/升NAA和0.5毫克/升BA;而苗分化则以0—0.5毫克/升IAA和0.5毫克/升BA为好。高浓度的NAA有利于根分化而抑制茎芽形成;高浓度的IAA对根和芽分化都有抑制作用。叶肉原生质体分离和培养试验表明,紫云英叶肉原生质体的释放及其培养活力受叶龄、植株生理状态和酶浓度的影响。叶肉原生质体在改良的KM8P培养基中能分裂。用改良KM8细胞培养基定期稀释,可使分裂持续进行而得到细胞团。BA和2,4-D为诱导紫云英叶肉原生质体分裂所必需。其最佳组合激素为BA 0.21毫克/升和2,4-D 1.13毫克/升。葡萄糖作为渗透压稳定剂时,其浓度明显影响原生质体的存活率。弱光条件下培养比黑暗培养有利于叶肉原生质体分裂。由叶肉原生质体形成的愈伤组织能形成瘤状结构和根。     

番木瓜的愈伤组织和苗端再生植株

用两种离体培养方法以再生番木瓜植株。一种是从愈伤组织再生;另一种是从单个苗端的外植体产生多个植株。番木瓜的愈伤组织是从幼苗茎的切段诱导的,茎段培养在含有1毫克/升 NAA(萘乙酸)和0.1毫克/升 KT(激动素)的培养基中。当愈伤组织转移到含有低浓度生长素(0—0.5毫克/升IAA(吲哚乙酸)和较高浓度的 KT(1-2毫克/升)的培养基时,再生了苗     

植物激素对驳骨丹茎愈伤组织生长和器官再生的作用

在驳骨丹离体茎切段培养中,用MS基本培养基,分别附加2毫克/升BA和0.2毫克/升NAA诱导愈伤组织,附加1毫克/升BA诱导芽分化;以2/1MS基本培养基分别附加0.5毫克/升NAA、IBA、IAA和2,4-D进行诱导发根试验,除2,4-D无效外,均能生根形成再生植株。根据上述试验结果,设计不同浓度的BA和NAA组合,进行愈伤组织继代培养,讨论这两种激素对愈伤组织生长和器官再生的调节作用。主要结果为:1.低浓度的BA和NAA组合比较有利促进愈伤组织的生长,且以中等浓度的BA和低浓度NAA的效果最佳;2.单独附加BA,其浓度在0.25—4.0毫克/升范围内,都能促进芽分化,而完全抑制了根的发生。当单加NAA,在0.5—6.0毫克/升的浓度范围内,能促进根的形成,而随其浓度的升高抑制芽的分化;3.细胞分裂素与生长素的比值>0.5时,有利芽分化而抑制根的发生,当比值<0.6时,有利根形成而抑制或减弱细胞分裂素促进芽分化的作用。在这里讨论了生长素和细胞分裂素之间对报、芽形成的拮抗作用。     

甜菊(Stevia rebaudiana Bertoni)的组组培养

用本所栽培的甜菊的幼嫩茎叶,或由种子形成的无菌幼苗作为材料。诱发愈伤组织培养基为MS培养基(2,4-D0.8～1.0;KT或6-BA0.2～0.5;或KT及6-BA各加0.2毫克/升)和kT培养基(KT1.0;2,4-D1～3;NAA0.2毫克/升)。10天左右,渐形成生长旺盛的、淡黄或淡绿色的愈伤组织(图1,2),诱导率60％以上。愈伤组织可长期继代培养而不失其旺盛的生长能力。分化培养基成     

诱导玉米花粉植株的初步研究

玉米花药培养试验表明,以培养基MS为基础,补加2,4-D2.0毫克/升和激动素1.0—2.0毫克/升,将蔗糖浓度作适当提高,即从6％提高到12—24％范围,诱导花粉愈伤组织的频率可从0.52％提高到1.03—1.09％。夏季7—8月形成的愈伤组织没有分化出绿芽,只分     

小麦(Triticum vulgare)花粉植株的诱导及其形态发生过程的研究

采用离体培养小麦(Triticum vulgare)花药的方法成功地诱导小麦花粉形成了单倍体植株。在附加2—20毫克/升的2,4-D 和各种有机附加物的 MS 培养基上,属于27个杂种或品种的21094个花药中有103个花药产生了愈伤组织,这些愈伤组织均着生在裂开的药室内,显微观察证明它们是由花粉经过多次细胞分裂形成的。花粉愈伤组织转移到含有0.2—2毫克/升的萘乙酸和0.2—2毫克/升的激动素或含有0.5毫克/升的吲(口朶)乙酸和15%椰乳的 MS培养基上培养5天以后,即陆续分化出幼苗。此外还发现接种在含有20%椰乳或吲(口朶)乙酸及激动素各2毫克/升的 MS 培养基上的花药直接从药室内产生出幼苗。已检查的6株幼苗的根尖细胞的染色体数均为21,表明它们是单倍体。单倍体植株能够抽穗而不结实。     

擦树茎尖培养

1.植物名称擦树(Sassafras tzumu Hcmsl) 2.材料类别幼苗茎尖 3.培养条件茎尖在(1)1/2MS+NAA,毫克/升+IBA1毫克/升的培养基上诱导愈伤组织,然后转移带愈伤组织的茎尖培养体至(2)     

亚麻(Linum usitatissimum)花粉植株的诱导及其后代的初步观察

采用B_5培养基,添加激动素2毫克/升、吲哚乙酸8毫克/升、水解乳蛋白1000毫克/升、酵母核糖核酸300毫克/升,成功地诱导出亚麻花粉植株。细胞学观察证明,染色体数为2n=16,证明是单倍体。微量元素对根的形成起着重要作用。诱导花粉愈伤组织的蔗糖浓度以4％为宜;诱导愈伤组织分化的蔗糖浓度以2％较好。同一组合的花粉植株当代表现出多样性;花粉二代植株同一株系内表现整齐一致。     

诱导玉米花粉植株的初步研究

玉米花药培养试验表明，以培养基M，为基础，补加2, 4-D2.0毫克／升和激动素1.0一2.0毫克／升，将蔗糖浓度作适当提高，即从‘％ 提高到12-24%范围，诱导花粉愈伤组织的频率可从0.52%提高到1. 03-1.09 % o夏季7-8月形成的愈伤组织没有分化出绿芽，只分化根。秋季9-11月形成的愈伤组织转入以ms为基本培养基，补加NAA 0.2-2。毫克／升和激动素0.5--2.0毫克／升灼分化培养基中，诱导出了绿芽、叶和根，并发育为绿色小植株。细胞学观察证明所获得的植株来源于花粉细胞。     

小麦花粉无性系的建立及其胚状体的发生

本文报道的小麦花粉无性系,已继代培养了两年零一个月共27代,目前仍具有分化能力。继代分化固体培养基以:MS附加NAA0.6毫升/升+KT0.2毫克/升为最好。较好的恢复再生培养基为MS液体培养基附加2.4-D 0.6毫克/升+NAA0.2毫克/升+6-BA 2毫克/升+CH500毫克/升予处理三天后转入附加2.4—D0.6毫克/升+KT 2毫克/升+CH 500毫克/升的MS固体培养基,培养十八天后,丧失分化能力已达八个月之久的愈伤组织又恢复了再生能力,分化出植株。通过愈伤组织的细胞学观察,小麦花粉愈伤组织无性系,分化成小植株的途径有二:一是由特化的胚性细胞经多次分裂后发育成胚状体长成小植株;二是由特化的表层细胞经多次分裂后发育成芽苗。胚性细胞发生于愈伤组织的表皮层和表皮附近的细胞层,有的也可在内层已衰老的细胞中产生。胚状体与芽的区别特征是:胚状体具有两极性,两极间有维管组织相连接;芽具有单极性,芽端的维管组织与愈伤组织内维管组织相连接。     

芥菜型油菜原生质体再生成植株的研究

芥菜型油菜子叶和下胚轴原生质体在含0.5毫克/升NAA、0.5毫克/升2,4-D和1毫克/升BA的Nitsch培养基中发育成愈伤组织。“黄辣芥”子叶原生质体来源的愈伤组织在无生长素而含有3毫克/升BA或2毫克/升KIN的MS固体培养基上分化了芽;即使是低水平的生长素(0.05毫克/升NAA)也不利于芽的分化。当芽长到2—3厘米高时,将其从愈伤组织上切下,转移到不含细胞分裂素而有0.01—0.05毫克/升IAA的MS培养基上,很快长出根,从而得到完整的再生植株。     

在分化条件下水稻花粉愈伤组织超微结构的变化

对分别生长在含有2,4-D2毫克/升的诱导培养基上和生长在不含2,4-D 而含有激动素0.5毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升的分化培养基上的水稻花粉愈伤组织进行了透射电子显微镜的对比观察。发现当愈伤组织由诱导培养基上转移到分化培养基上之后,细胞发生了一定的超微结构上的变化。处于旺盛分裂状态有可能分化成芽原基的某些愈伤组织表层细胞中的线粒体、质体、核糖核蛋白体的数量增多了。愈伤组织内部薄壁细胞的液泡化程度变小,类脂体、淀粉粒等贮藏物质大大减少或完全消失。愈伤组织中除了有导管分子的分化外还发生了筛管分子的分化。细胞的类型增多了,出现了一些电子密度极高的细胞。虽然愈伤组织转移到分化培养基上之后所发生的上述变化是明确的,但我们认为这不一定是细胞分化的特异标志。为了进一步揭露细胞分化的实质,需要在细胞化学和分子生物学方面进行更多的工作。     

驳骨丹器官培养诱导植株

植物名称:驳骨丹Buddleia asiatica Lour. 材料类别:3～4年生苗木春梢的茎段。培养条件:外植体在MS+BA_2毫克/升+NAA0.2毫克/升培养基上诱发愈伤组织,愈伤组织转移到MS+BA1毫克/升培养基上诱导出芽,待芽伸长,再转入1/2MS+IBA0.5毫克/升诱导发根,25±2℃恒温,每天9～10小时光照,光强1500勒克斯。