利用IVF废弃胚胎为核移植受体构建人体细胞克隆胚胎

目的：探讨利用IVF废弃胚胎构建人体细胞克隆胚胎的发育潜能及其在人治疗性克隆应用的可能性。方法：收集2008年7-12月在广州医学院第三附属医院进行体外受精-胚胎移植周期中的多精受精胚胎和MII期体外受精失败卵母细胞,运用显微操作技术构建人体细胞克隆胚胎,观察胚胎发育情况。结果：多精受精胚胎为核移植受体的克隆胚胎能够发育到8-细胞期,受精失败MII期卵母细胞为核移植受体的克隆胚胎能够激活,但不能够卵裂。两种IVF废弃的胚胎构建的人体细胞克隆胚胎在去核成功率,注核成功率上无显著差异（P＆gt;0.05）,但卵裂率和8细胞率上具有显著差异（P＆lt;0.05）。结论：多精受精胚胎比MII期体外受精失败卵母细胞更适合作为人核移植受体细胞。     

动物胚胎发育讲座（一）：动物胚胎早期发育概况

动物胚胎发育讲座（一）──动物胚胎早期发育概况张天荫（山东大学生物学系济南２５０１００）１生殖细胞与受精生殖细胞的发生在后生动物大致相似,都要经过增殖期、生长期和成熟期。增殖期乃是精（卵）原细胞经过多次有丝分裂使数量不断增加;生长期是部分精（卵）原细...     

小鼠生精细胞增殖与凋亡的年龄变化

为研究雄性小鼠睾丸在发生,发育过程生精细胞增殖与凋亡的年龄变化,本研究采用了免疫细胞化学,凋亡细胞原位检测,电镜及体视学图象分析等方法,对胚胎15天到生后10月后发育阶段生精细胞的超微结构,PCNA表达,凋亡情况进行了较深入地研究,结果：（1）精原细胞PCNA反应在胚胎15天为阳性,从胚胎18天到生后5天,降为弱阳性,而阳性的精原细胞在生后7天重新出现,一直到生后6月,仍可见部分精原细胞呈阳性反应;（2）生后3天,可见凋亡的精原细胞染色质浓缩,核膜出现明显的核周隙,核碎裂,凋亡细胞数从生后1天到生后第3周有增加的趋势,于生后第3周出现峰值,之后降低,之后降低,结论：（1）PCNA阳性细胞而密度到生后第2周出现峰值,而凋亡细胞数于生后3周出现峰值,生精细胞凋亡的高峰要滞后其增殖峰1周左右,而且与其所处生精周期的特定阶段有关;（2）精原细胞在胚胎发育过程中向曲细精管周边迁移,其排列由无序到有序;（3）在生后各发育 ,精原细胞始终保持DNA复制的能力。     

禽类胚胎生殖细胞的研究

胚胎干细胞有2种来源：一种来自于早期胚胎囊胚期内细胞团（inner cell mass,ICM）的胚胎干细胞（embryonic stem cells,ES细胞）,另一种是来自胚胎生殖腺原始生殖细胞（primordial germ cells,PGCs）的胚胎生殖细胞（embryonic germ cells,EG细胞）。PGCs是生殖母细胞的前体细胞,是精子或卵子的祖先细胞。自Matsui等证实了PGCs同样可以作为胚胎干细胞的原材料之后,现已在人、小鼠、猪和鸡等多种动物的PGCs进行了分离培养并获得了EG细胞。现从形态特征和迁移、分离培养及鉴定方面对禽类EG细胞的研究进展作一综述。     

《Molecular Plant》文章中文摘要

拟南芥配子体发育相关的减数分裂和有丝分裂细胞周期突变体（综述）;基于S-核酸酶的自交不亲合的生化模型（综述）;GEX3,在拟南芥雄配子体和卯细胞中表达,对于珠孔花粉管定向生长非常重要同时在胚胎早期发育中起作用;绒毡层降解阻滞对水稻花粉发育过程中的脂肪代谢和基因调控很关键;拟南芥双受精涉及阻断卯细胞的多精受精而非中央细胞……     

无血清培养鹌鹑胚胎骨骼肌细胞的光镜与电镜观察

用无血清、无胚胎抽提液培养液（Ｅａｇｌｅ’ｓ，ＭＥＭ）培养孵育８ｄ的鹌鹑胚胎骨骼肌细胞，接种后圆形的生肌细胞可发育、分化形成线状的肌管，历时４—６ｄ。对培养７２ｈ肌细胞苏木精－伊红染色光镜照相和电镜观察证明肌细胞在本实验条件下能分化形成肌细胞特有的横纹结构和肌丝结构。     

食蟹猴和恒河猴卵母细胞及早期胚胎玻璃化冻存

为了节省经费和使转基因模型动物品种资源得到妥善保存,该研究利用自制的梯度浓度冷冻液和解冻液结合玻璃化方式分别冷冻和解冻了非人灵长类动物的183个卵母细胞（GV期、MI期和MII期）、114个卵裂期胚胎（2-细胞期、4-细胞期和8-细胞期）及25个桑椹期胚胎。其中食蟹猴卵母细胞67个,卵裂期胚胎45个,桑椹期胚胎11个;恒河猴卵母细胞116个,卵裂期胚胎69个,桑椹期胚胎14个。复苏后存活率分别为56/67（83.58%）、36/45（80.00%）、9/11（81.82%）、102/116（87.93%）、55/69（79.71%）和11/14（78.57%）。结果表明,快速玻璃化冷冻法简便且胚胎存活率高,是一种较好的冷冻食蟹猴和恒河猴卵母细胞及胚胎的方法。     

哺乳动物滋养层细胞在胚胎植入中的作用

胚胎植入是哺乳动物生殖的关键环节,是一个非常复杂的过程.在胚胎植入过程中,多种着床相关因子、激素在母体-胚胎之间进行多重作用,引发复杂的生理作用,从而完成胚胎着床.在母体-胚胎界面上,胎源性滋养层细胞与母体子宫内膜细胞在信号联系（妊娠识别）和组织紧密连接（胚胎植入）过程中起着决定性作用,尤其是胚源性滋养层细胞,在胚胎植入过程中起主导作用.本文通过对滋养层细胞在胚胎植入中的作用的阐述,为进一步阐明胚胎植入的分子机制提供思路.     

小鼠精原干细胞与胚胎干细胞样细胞

近年来,通过培养小鼠精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)获得了胚胎干细胞样细胞(,embryonic stem cell-like cells,ES样细胞).这些研究表明小鼠精原干细胞不仅具备特异分化为精子的干细胞潜能,而且具备胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)分化为三胚层的多向分化潜能.因此.这将有助于研究干细胞的分化调控机制,并且这些研究成果延伸至人类精原干细胞,也将为再生医学获取特殊的胚胎干细胞样细胞或特异分化的精子细胞开辟了蹊径.     

胚胎植入与肿瘤浸润转移的相似性

胚胎植入依赖于胚胎滋养层细胞对子宫内膜的侵入,其过程与肿瘤细胞的浸润转移极为相似;（１）它们具有相似的基质侵入行为,并用同种蛋白水解酶降解类似的细胞外基质结构;（２）生长因子对这两种细胞可能具有相似的调节作用;（３）胚胎滋养层细胞和肿瘤细胞的免疫学特性类似,并可能具有共同的免疫逃脱机制,胚胎植入和肿瘤浸润的相似性提示,学科间的交叉,渗透和相互借鉴对生物学基础理论的研究具有重要意义。     

小鼠早期胚胎内细胞凋亡的一个量化模型

凋亡是早期胚胎（八细胞阶段后,特别是桑椹胚至囊胚期）进入非线性发育期的最重要诱因和调节因素．本文利用双光子激光扫描显微术,获得小鼠植入前胚胎的三维荧光图像;然后建立量化模型,经过一定图像处理,统计了凋亡小体在胚胎内的三维空间分布,并为探索凋亡的动力学机制做出一些尝试．研究发现,胚胎内细胞凋亡现象绝大部分（70％）发生在滋养外胚层,且胚胎质心与几何中心的偏离在32细胞期前后出现台阶式跃迁,这和囊胚腔的出现导致胚胎细胞分布对称性破缺的理论预测一致．     

应用乙二醇冷冻小鼠胚胎：优化和简化程序的探索

提高解冻胚胎的发育能力和简化冷冻解冻程序是胚胎冷冻研究的两大永恒的主题。尽管乙二醇（EG）广泛用于家畜胚胎冷冻,但很少用于冷冻小鼠和人胚胎。为数很少的以EG慢冻小鼠或人胚胎的研究均采用较为复杂的人胚冷冻程序,未见简化程序和用EG冷冻小鼠桑椹胚的报道。采用简单的牛胚胎冷冻程序研究了发育时期、EG浓度、平衡方法、添加蔗糖以及解冻后脱除EG等对小鼠胚胎冻后发育能力的影响。结果显示：（1）致密晚期桑椹胚冻后体外培养囊胚发育率（81.92%±2.24%）和孵出率（68.56％±2.43%）显著（P＜0.05)高于4-细胞、8-细胞胚胎和致密早期桑椹胚胎;（2）1.8mol/L EG冷冻小鼠致密晚期桑椹胚的囊胚发育和孵出率显著高于其它浓度;（3）在EG中平衡10min的冻后囊胚发育显著好于平衡5、20或30min;（4）两步平衡冷冻胚胎的囊胚发育率和孵出率显著高于一步平衡;（5）用EG冷冻小鼠胚胎无需添加蔗糖;（6）解冻后可不脱除EG;（7）冻后发育的早期囊胚和囊胚细胞数明显少于体内发育胚胎。因此,用EG冷冻小鼠胚胎的最佳方案为：致密晚期桑椹胚用1.8mol/L EG不添加蔗糖、两步平衡15min、以简单的牛胚胎冷冻程序冷冻解冻、解冻后不脱除EG直接培养或移植。     

胚胎干细胞向造血细胞分化研究

胚胎干（embryonic stem,ES）细胞是来源于囊胚的内细胞团（inner cell mass,ICM）,具有发育的全能性或多能性,能嵌合到早期胚胎,在体内可以参与各种组织发育甚至包括生殖细胞;在体外分化培养条件下,可以顺序分化出各种组织细胞,与体内完整胚胎发育过程相符合,而且可以通过调节ES细胞某些基因的表达而调节其分化。因此,ES细胞是研究哺乳动物早期胚胎发育、细胞分化及其关键基因鉴定的理想模型。另外,胚胎生殖脊（embryonic germ,EG）细胞系也具有同样的生物学特性,它是由早期胚胎的原始生殖脊（primordial germ,PG）细胞建株而来。最近研究显示：ES细胞在体外不但可以分化为所有造血细胞系,而且还可以分化为具有长期增殖能力的造血干细胞。作者就胚胎干细胞向造血细胞和造血干细胞分化及其诱导因子和调控基因的表达作一综述。     

胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞研究进展郑瑞珍（中国科学院发育生物学研究所北京１０００８０）一、前言胚胎干细胞（ＥｍｂｒｙｏｎｉｃＳｔｅｍｃｅｌｌ,ＥＳ）是从早期胚胎的内细胞团分离来的,能在体外培养的一种高度未分化的细胞,在某种意义上也可以说它是一种具有发育全能性的细胞。英国的Ｅｖａｎｓ和Ｋａｕｆｍａｎ最早于１９８１年［１］用延缓着床的胚泡首次建立了小鼠胚胎干细胞。     

两种冷冻保护剂对小鼠2-细胞胚冷冻效果的比较

乙二醇（ETG）和1,2-丙二醇（PROH）具有高细胞渗透性和低毒性特点,常被用于人及多种哺乳动物早期胚胎冷冻保存。为了比较ETG和PROH对小鼠2-细胞胚的冷冻保护效果,本试验分别采用这两种冷冻保护剂,对小鼠2-细胞胚进行冷冻保存,并采用冻后体外培养和囊胚移植进行冷冻效果检测。结果表明,PROH组胚胎解冻后胚胎存活率与ETG组无显著差异,但PROH组4-细胞胚发育率和囊胚发育率显著高于ETG组（82．7％vs．64．6％,61．2％vs．29．1％,P〈0．01）。囊胚移植结果表明,2-细胞胚胎冻存后能够发育为正常的后代,PROH组和ETG组的囊胚移植后妊娠产仔率无统计学差异（P〉0．05）,但均显著低于对照组（P〈0．05）。为了分析两组胚胎冻存后损伤情况,埘解冻后的胚胎细胞微丝进行检测,结果显示ETG组微丝受损的胚胎数高于PROH组。本研究结果证明采用PROH作为冷冻保护剂冷冻保存小鼠2-细胞胚的冻存效果优于ETG[动物学报54（6）：1098—1105,2008]。     

云杉属树种的体细胞胚胎发生

综述了云杉属树种体细胞胚胎发生的研究现状,其中包括：（1）影响云杉属树种体细胞胚胎发生及其植株再生的因素;（2）云杉属树种体细胞胚胎发生的形态学和细胞组织学研究。并展望了云杉属树种体细胞胚胎发生的应用前景及研究方向。     

云杉属树种的体细胞胚胎发生

综述了云杉属树种体细胞胚胎发生的研究现状,其中包括：（１）影响云杉属树种体细胞胚胎发生及其植株再生的因素;（２）云杉属树种体细胞胚胎发生的形态学和细胞组织学研究。并展望了云杉属树种体细胞胚胎发生的应用前景及研究方向。     

小鼠原生殖细胞体外培养及其应用研究

原生殖细胞（ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌｇｅｒｍｃｅｌｌ,ＰＧＣ）是胚胎生殖谱系最原始形式的细胞,在体胚胎迁移期ＰＧＣ增殖极为旺盛。体外培养的小鼠迁移期ＰＧＣ在饲养层细胞和三种生长因子（干细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及白血病抑制因子）的共同作用下,可发展为长期增殖并维持不分化状态的胚胎性干细胞,即胚胎生殖细胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｇｅｒｍｃｅｌｌ,ＥＧ）,具全能性发育潜能。ＥＧ建系成功对于研究生殖细胞发育以及寻找新的转基因动物操作的有效载体具有重要价值。     

白榆生活精细胞分离和保存的研究

研究了白榆（ＵｌｍｕｓｐｕｍｉｌａＬ．）精细胞分离和生活力保存的方法。将吸湿后的白榆花粉撒播于蔗糖琼脂培养基上萌发。采用低渗法从花粉管中分离出精细胞。通过蔗糖密度梯度离心纯化和收集精细胞。收集后的精细胞密度为２．０×１０６个／ｍＬ,比较了牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和聚乙烯吡咯酮（ＰＶＰ）两种保护剂对生活精细胞分离和保存的影响。在加入ＢＳＡ的蔗糖溶液中,精细胞的生活力在室温条件下可保存５４ｈ以上,而在０～４℃条件下则可保存１２ｄ以上。ＰＶＰ不利于生活精细胞的分离和保存。     

癌基因EJ－ras在小鼠胚胎干细胞（ES－5）中的表达及其对ES－5细胞一些特征的影响

转基因动物在研究基因的功能、医药、畜牧业等方面有重要的应用。利用胚胎干细胞（ＥＳ）制作转基因动物,比传统的显微注射法有无可比拟的优点。但是,目前、只在小鼠中建立起了ＥＳ细胞系,在其它哺乳动物（包括家畜）中尚未建成。近来,人们开始探索：改变胚胎细胞的遗传物质（如：把外源基因导入胚胎细胞）是否有利于获得ＥＳ细胞系．在各种外源基因中,癌基因是值得尝试的基因。因为：（１）ＥＳ细胞的建系是使胚胎的ＩＣＭ细胞永生化的过程;（２）在体外利用癌基因转染可使许多原代培养细胞永生化;（３）ＥＳ细胞高表达一些原癌基因。我们用癌基因ＥＪ－ｒａｓ转染小鼠ＥＳ细胞,观察其对ＥＳ－５细胞一些特性（增殖、嵌合能力）的影响,以便选择合适的癌基因用于家畜ＥＳ细胞的建系。ＥＳ－５细胞通常培养在丝裂霉素处理的小鼠胚胎成纤维细胞（ＭＥＦ）上（Ｆｉｇ．Ａ）。转染用ＥＳ－５细胞培养在无饲养层细胞的、含有大鼠肝细胞（ＢＲＬ）的条件培养液ＤＭＥＭ中。ＥＪ－ｒａｓ基因克隆在真核表达载体ＰＳＶ２ｎｅｏ的ＢａｍＨＩ位点上、使用磷酸钙法转染ＥＳ－５细胞,Ｇ－４１８法筛选阳性克隆,得到的抗性克隆仍以集落形式生长（Ｆｉｇ．Ｂ）,选取５个较好的克隆（ＥＳ－ｒａｓ１,２,