日本血吸虫DNA疫苗的优化策略

血吸虫病严重危害人类及家畜健康,发展疫苗是防治血吸虫感染的有效措施。传统疫苗的发展因成本高、免疫原性低及安全隐患而受到限制。发展DNA疫苗成为近年的研究重点。为提高DNA疫苗的免疫保护力,候选抗原的筛选、CpG序列的优化、基因佐剂的选用、多价疫苗的构建等被认为是日本血吸虫DNA疫苗的优化策略。     

血吸虫疫苗研究进展

血吸虫疫苗研究进展许家喜（北京大学化学与分子工程学院,北京１００８７１）关键词血吸虫疫苗血吸虫病的防治在当今世界上仍是一个有待解决的严重问题,迄今已发现１９种血吸虫能侵犯人体,其中对人类健康有威胁的有曼氏、日本、埃及、湄公与间插５种血吸虫。据世界卫生...     

日本血吸虫三价DNA疫苗pVIVO2 SjFABP/Sj26.SjGAPDH的构建及其免疫保护作用评价

目的:构建含有日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白(SjFABP),3-磷酸甘油醛脱氢酶(SjGAPDH),26kDa谷胱甘肽S转移酶(Sj26)的三价DNA疫苗,并通过药理实验评价其抗血吸虫感染的免疫保护作用。 方法:  以血吸虫成虫RNA为模板制备cDNA第一链,RT-PCR扩增得到抗原基因片段,再通过重组PCR技术,将Sj26和SjGAPDH融合为Sj26.SjGAPDH基因。将SjFABP和Sj26.SjGAPDH分别克隆入pVIVO2的mcs1和mcs2,获得重组质粒pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH。瞬时转染MCF-7细胞,通过逆转录PCR（RT-PCR）检测抗原基因在mRNA水平的表达,通过间接荧光免疫（IIF）检测抗原基因在小鼠体内抗原水平表达,验证了DNA疫苗的有效性;并免疫小鼠后进行免疫保护性初步试验。结果:  经过酶切、测序及体内外表达验证,该三价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj26.SjGAPDH构建成功;该三价DNA疫苗在小鼠抗血吸虫感染中诱发减虫率和减卵率达到58.6%和59.8%。结论:  该三价DNA疫苗组具有比单价和双价DNA疫苗组更加良好的免疫保护作用,为日本血吸虫DNA疫苗的研制奠定了基础。     

两种血吸虫病DNA疫苗的候选抗原基因研究

目的：以日本血吸虫基因SjFABP和SjGST原核表达产物检测二价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP-SjGST在体内诱发的特异性抗体。方法：克隆日本血吸虫抗原基因SjFABP和sjGST,构建重组原核表达载体pET30a-SjFABP、pET30a-SjGST及真核表达载体pVIVO2-SjFABP-SjGST;将pET30a-SjFABP和pET30a-sjGST进行原核表达,并将表达产物用镍亲和柱分离纯化;采用Western印迹对日本血吸虫DNA疫苗pVIVO2-SjFABP-SjGST免疫4周后的BALB／c小鼠血清进行特异性抗体检测。结果：克隆了日本血吸虫抗原基因SjFABP（399bp）和町GST（657bp）,并构建了pET30a-SjFABP、pET30a-SjGST及pVIVO2-SjFABP-SjGST重组质粒;经Western印迹检测,pET30a-SjFABP及pET30a-SjGST原核表达的抗原蛋白均能够与经日本血吸虫二价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP-SjGST免疫的小鼠的血清产生特异性免疫反应。结论：日本血吸虫町尉即和町GST基因的原核表达系统成功建立;原核表达的抗原蛋白具有免疫原性;以原核表达产物可检测日本血吸虫DNA疫苗pVIVO2-SiFABP-SiGST在体内诱发的特异性抗体。     

一例日本血吸虫患者在离开疫区43年后仍见活卵的报告

一例日本血吸虫患者在离开疫区４３年后仍见活卵的报告武苏平（天津医学院寄生虫学教研室３０００７０）关键词日本血吸虫，存活时间，患者，ＣＯＰＴ，ＣＨＲ血吸虫在人体能存活多久？既是一个生物学问题，也是一个血吸虫病诊治工作中的实际参加此项工作的还有本室朱静和...     

日本血吸虫中国大陆株基因多态性研究

对日本血吸虫中国大陆株湖南、湖北、江西、安徽、四川、云南隔离群以及一个实验室传代品系从基因水平进行了多态性研究。首先,在用ＰＣＲ－ＳＳＷＣＰ技术分析了２８Ｓ ｒＤＮＡ－Ｄ２高变区基础上,测定了该区安徽和云南隔离群的ＤＮＡ序列;其次,用ＰＣＲ获得了含有ＩＴＳ的ｒＤＮＡ片段,并对其进行了酶切点重复序列的多态性分析;最后,用ＲＡＰＤ技术分析了全基因组ＤＮＡ的多态性。结果表明,安徽与云南隔离群的２８Ｓ ｒ     

核酸疫苗初免-蛋白疫苗加强的免疫策略提高日本血吸虫核酸疫苗免疫效果

为研制抗血吸虫疫苗提供实验依据,探讨了抗血吸虫SjGST-32核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应及免疫应答特征。将日本血吸虫DNA疫苗VR1012-SjGST-32与重组蛋白疫苗rSjGST-32分别在第0、2和4周免疫小鼠,在第6周攻击感染日本血吸虫尾蚴,攻击感染45 d后剖杀小鼠,计算减虫率、检卵率以及检测肝脏病理变化,观察免疫保护效果;检测小鼠血清中特异性IgG抗体滴度,T细胞增殖反应和抗原特异性CD4+IFN-γ+、CD4+IL-4+和CD4+IL-10+的数量,探讨免疫应答特征。结果显示,DNA初免-蛋白加强的联合免疫组的保护作用优于单独免疫组,显著提高了减虫率(42.3%)和减卵率(59.6%),并且能够显著减轻血吸虫虫卵对肝脏的病理损害;进一步发现,DNA疫苗和蛋白疫苗联合应用增强了机体T淋巴细胞增殖反应、抗体IgG滴度以及抗原特异性CD4+IFN-γ+的产生。这些研究为新型血吸虫疫苗的优化设计和合理应用提供了依据。     

抗肿瘤DNA疫苗的研究进展

抗肿瘤DNA疫苗是一种全新的肿瘤疫苗,在肿瘤防治中发挥着越来越重要的作用。大量研究表明,多种类型的抗肿瘤DNA疫苗都具有一定程度的抗肿瘤效应,有着良好的应用前景。目前,构建新型高效的抗肿瘤DNA疫苗已经成为肿瘤研究的热点。     

曼氏血吸虫发育过程中的基因组DNA变异

曼氏血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｍａｎｓｏｎｉ）和日本血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）成虫和曼氏血吸虫尾蚴基因组ＤＡＮ经限制性内切酶ＢａｍＨＩ消化后,分别与＾３２ｐ－ｄＣＴＰ标记的来源于核糖体ＤＮＡ的ＰＳＭＨＣＲ５、ＰＳＭＨＣＲ４ＰＳＭ８８９探针杂交,曼我血吸虫尾蚴和成虫在ＰＳＭＨＣＲ４杂交带型的１．６－２．８ｋｂ之间,存在有明显不同的次杂带;而ＰＳＭＨＣＲ５和ＰＳＭ８８９的杂交带型,无明显差异     

日本血吸虫细胞培养方法初探

日本血吸虫细胞培养方法初探董惠芬,蒋明森,李瑛,杨明义,周述龙（湖北医科大学寄生虫学教研室,武汉４３００７１）关键词日本血吸虫,细胞培养,培养方法ＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＩＥＳＯＮＴＨＥＣＵＬＴＵＲＡＬＭＥＴＨＯＤＳＯＦＣＥＬＬＳＦＲＯＭＳＣＨ...     

裸露DNA指出了疫苗的道路

<正>3年前,一个新崛起的圣地亚哥生物技术公司-Vical的研究人员,当他们参观宾夕法尼亚西点Merck研究实验室时介绍了一些惊人的资料,致使当时在场的个别人怀疑是否看见了“冷融合的生物对等物”。由Philip Felgner率领的Vical队揭示了活体小鼠肌肉如果注射裸露的基因会制造出外源蛋白。按照生物技术的信条那是不可想像的。精心设计的基因工程技术需要将外源DNA植入细胞之中。但是这里它却沿正确航道开始生产蛋白。如果此发现属实,将对疫苗的发展产生巨大的影响,因为它依靠     

DNA疫苗在寄生虫病疫苗研制中的前景

疫苗是人类与传染病斗争的最有效武器.纵观疫苗的发展过程,人们将巴斯德及后来许多学者开创的减毒和灭活疫苗称为第一次疫苗革命,将由微生物的天然及纯化组分或由基因重组产物而生产的疫苗称为第二次疫苗革命,本世纪90年代兴起的核酸疫苗技术则被誉为第三次疫苗革命[1].     

DNA疫苗研究现状和展望

自１９９２年第一次报道ＤＮＡ疫苗技术以来,在短短３－４年的时间内这一技术得到飞速发展,在ＮＤＡ疫苗的作用机理,如何增强ＤＮＡ免疫效果以及ＤＮＡ疫苗的优势和问题等方面做子大量卓有成效的探索,尽管现在人产对ＤＮＡ疫苗抗原提呈作用机理还不清楚,也还没有完全也解ＤＮＡ疫苗安全性问题,但是对ＤＮＡ疫苗的免疫防御,免疫治疗和免疫调节作用已有了较为清晰的认识,本文拟对此作一简要概述。     

乙肝DNA疫苗的研究进展

核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗,目前研究以DNA疫苗为主。乙肝DNA疫苗不仅能诱导机体细胞介导的体液免疫反应,而且还能诱导机体细胞介导的特异性细胞免疫反应,CTL活性增强,在乙型肝炎预防和治疗中具有广阔的应用前景。本文就近几年有关乙肝DNA疫苗的进展作了综述。     

DNA疫苗免疫佐剂的研究进展

DNA疫苗是最近几年从基因治疗研究领域发展起来的一种新型疫苗,它能诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫应答,能够抗病毒,细菌和寄生虫的感染,对自身免疫性疾病和过敏性疾病有一定的疗效作用。但与传统的灭活疫苗相比,其免疫效价还比较低,最近的研究表明：联合使用DNA疫苗和疫苗佐剂如细胞因子,协同刺激分子等有助于提高DNA疫苗的免疫效价,这一发现有利于研制更有效的DNA疫苗,本文就通过使用免疫佐剂提高DNA免疫效价的最新进展做一综述。     

日本血吸虫(中国大陆株)谷胱甘肽转移酶编码区基因的体外扩增、克隆及在原核细胞的高效表达

为表达、获取日本血吸早谷胱甘肽转移酶（ＳｊＧＳＴ）基因工程重组蛋白,以日本血吸虫（中国大陆株）ｃＤＮＡ为模板,设计、合成特定寡核苷酸引物,ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＧＳＴ编码基因序列,将扩增产物连接ｐＧＥＭ－Ｔ克隆载体,再亚克隆到真、原核表达质粒ｐＢＫ－ＣＭＶ中,转染大肠杆菌ＸＬ１－ｂｌｕｅ,经ＩＰＴＧ诱导后用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表达效果。结果 ＲＴ－ＰＣＲ法特异性扩增出日本血吸虫ＧＳＴ编码区基因片段,其     

DNA疫苗机制研究进展

DNA疫苗可全面激活机体的免疫反应,具有安全,热稳定性,价廉等优点,尤其是激活的CTL活性将使之在慢性感染性疾病以及肿瘤治疗领域具有广阔应用前景,但DNA疫苗诱发机体产生免疫反应的机制尚有许多问题有待于搞清,现就DNA疫苗机制及研究进展进行综述。     

DNA疫苗研究进展

DNA疫苗是20世纪90年代初出现的一种新型疫苗,近年来发展迅速,在预防和治疗病毒性疾病及肿瘤等方面效果显著。同传统的疫苗相比,DNA疫苗具有免疫效果好、生产成本低、临床应用方便等优点,但同样存在安全性的担忧。对DNA疫苗的发展及其作用机制、优势进行了综述,并对DNA疫苗的安全性提出了自己的观点与看法,可供DNA疫苗的研究者参考。