复合生物杀菌剂F6-11的安全性毒理学研究

目的：为研究复合生物杀菌剂F6．11毒性,采用动物实验法进行毒理学评价。方法：对复合生物杀菌剂F6-11进行小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、亚急性毒性试验、家兔多次完整皮肤刺激试验、急性眼刺激试验、豚鼠皮肤变态反应试验、鱼类延长毒性14天试验。结果：复合生物杀菌剂F6—11对小鼠急性毒性LD50〉5000mg／kg．bw,属于实际无毒级物质;小鼠微核试验该杀菌剂各剂量组与阴性对照组比较,微核率无显著性差异（P〉0．05）;亚急性毒性试验动物血常规、生化指标及各脏器均未发现异常;对家兔多次完整皮肤及眼刺激反应积分均为0,均属无刺激性;对豚鼠皮肤变态反应试验组动物与阴性对照组无可见不同．试验组动物皮肤致敏反应积分为0,无致敏作用;鱼类延长毒性14天试验无异常。结论：毒理学研究表明,复合生物杀菌剂F6．11具有良好的使用安全性。     

布鲁氏菌变态反应原的研究——2.新制菌素的敏感性和化学成分

我们用牛、羊、猪三个种的布鲁氏菌弱毒菌种,分别制出牛、羊、猪及三个种混合的4种菌素,发现猪种菌素致敏性较强,又用猪种菌作短期(4和7天)间歇振荡培养和长期(14和28天)静止培养,制出另外4种菌素。生化检测这8种菌素的总氮量和蛋白量相近。还观察到用牛、羊、猪三个种布鲁氏菌分别致敏豚鼠,皮肤试验结果未见有明显差别。     

布鲁氏菌变态反应原的研究Ⅴ.犬种菌的变态反应原性

我们按照规程要求制备了犬种菌素。它在致敏豚鼠和人体中证明了:它虽为粗糙型菌种,但仍具有变态反应原性;用死菌液10亿/0.1ml给致敏动物作皮试,亦出现良好的变态反应。24小时反应强度为15.8—18.4mm;48小时为6.8—10.8mm。犬种菌液热处理后,其上清液经硫酸铵透析,取其粗提蛋白作为变态反应原,用50μg/0.1ml给致敏动物作皮试,经犬种菌免疫的动物出现弱变态反应(24小时均在10mm以下),经活菌苗致敏的动物出现较强的变态反应(24小时为13—14mm,48小时为10.5—11mm)。犬种     

布鲁氏菌抗独特型抗体的研究

在建立布鲁氏菌单克隆抗体细胞株的基础上,筛选具有保护作用的单抗A7免疫家免制备抗独特型抗体(简称二抗)。经阻断试验和竞争抑制试验证实,该二抗具有抗原“内影象”。将其提纯后配制成甘油佐剂苗免疫豚鼠和小白鼠．检测结果表明：免疫豚鼠和小白鼠产生了布鲁氏菌凝集抗体;免疫小鼠的循环T ANAE-细胞百分数明显高于对照组;免疫豚鼠在免疫后4个月时强毒菌株攻击有79．2％获得保护。因此认为,该二抗不仅具有抗原的。内影象”结构,而且具有良好的免疫原性,可供作疫苗用。     

组胺在哮喘豚鼠气道重塑中的作用

本研究旨在探讨组胺在哮喘豚鼠气道重塑中的作用。将50只健康雄性豚鼠随机分为5组。正常对照组：雾化吸入蒸馏水8周;哮喘模型组：致敏后雾化吸入卯白蛋白（ovalbumin,OVA）8周;哮喘模型延续组：致敏后雾化吸入OVA14周;组胺组：致敏后雾化吸入OVA14周,最后6周同时加用组胺：组胺受体拈抗剂组：致敏后雾化吸入OVA14周,最后6周同时加用组胺受体拈抗剂。检测血清组胺、Na^＋、Cl^-浓度、动脉血氧分压（PaO2）、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）、pH、实际碳酸氢盐（actual bicarbonate,AB）、标准碳酸氧盐（standard bicarbonate,SB）以及气道壁粘膜层、基底膜层和平滑肌层厚度。所得结果如下：（1）哮喘模型组血清组胺浓度、气道擘厚度明显高于正常对照组（P〈0．01）;哮喘模型延续组明显高于哮喘模型组（P〈0.01）;组胺组明显高于哮喘模型延续组（P〈0．01）：组胺受体拮抗剂组低于哮喘模型延续组（P〈0．05,0．01）。（2）哮喘模型组PaO．小于正常对照组（P〈0．01）;哮喘模型延续组PaO2、pH、AB、SB小于哮喘模型组（P〈0．01）,而PaCO2大于哮喘模型组（P〈0．01）;组胺组PaO2、pH、AB、SB小于哮喘模型延续组（P〈0．01）,而PaCO2大于哮喘模型延续组（P〈0．01）;组胺受体拮抗剂组PaO2、pH、AB、SB高于哮喘模型延续组（P〈0．01）,而PaCO2低于哮喘模型延续组（P〈0．01）;血清Na^＋、Cl^-浓度各组间差异不明显。以上结果提示：（1）组胺在哮喘气道重塑中起介导作用。（2）应用组胺受体拈抗剂对防治哮喘气道重塑有一定作用。（3）PaO2、pH与气管、肺门支气管、肺外周小气道气道擘厚度呈负相关（P〈0．01）,而PaCO2、阴离子间隙（anion gap,AG）值与上述气道壁厚度呈止相关（P〈0．01）。     

根霉的研究V．根霉麸麯的扩大培养和浓淀粉液的糖化

本文研究前报[1]选出的根霉的扩大培养和麸麴浸液对浓淀粉液的糖化作用。盘扩大培养时,水分越多糖化力越强,一般配比为麸皮：水一1：1．5。最适培养时间因菌而异,通常在25—28℃温室培养36—48小时,使菌旺盛生长至成熟,糖化力已达高率,即可升温干燥。60％或30％马铃薯淀粉的液化,朵用细菌淀粉液化酶,30％或15％浓淀粉液的糖化用根霉麸麯浸液,其转化卒达96．7％—99．1％,纸谱鉴定在后期为纯葡萄糖。根据几方面性能的比较,这3株根霉各有特点。在最适的条件下,Rhizopusjaponicus AS 3.849的糖化速度最快,转化率最高,产品也最纯,但此菌培养条件要求严格。Rh. Tonkinensis AS 3.1175在温度较低、湿度较小时,比其它菌生长略快。Rh. Chinensis AS 3．2746虽然糖化力较前二者略低,但孢子特多,生长迅速,容易制麯,因而宜于工业应用。     

布鲁氏菌变态反应原的研究III．无外源蛋白菌素的试制和检测

用无外源蛋白的液体合成培养基制备布氏菌素,猪种和羊种布氏菌均能生长,但牛种菌不长。液体培养基中糖含量以1．0％—2.5％为好;间歇搅拌培养优于静_卜培养,其菌液浓度比静止培养高2一11倍;培养时间14天与25天的结果相近;猪种菌较羊种菌易于繁殖;对致敏豚鼠的皮肤试验,与现用的成品菌素相近或稍次,能引起明显的变态反应。     

YNS益肤面霜对豚鼠皮肤变态反应及肠道菌群的影响

目的 建立豚鼠皮肤变态反应模型，并使用YNS益肤面霜对皮肤变态反应模型进行干预，探讨这种面霜对改善及修复受损皮肤的作用及其对豚鼠肠道菌群的影响。方法 豚鼠24只，随机分成4组：对照组、阳性组、化妆品组和治疗组，每组6只。致敏接触后进行激发反应。提取4组豚鼠粪便标本DNA，使用16S rRNA高通量测序检测肠道菌群构成。结果 治疗组豚鼠皮肤致敏率为16.7%。益肤面霜治疗对肠道菌群alpha多样性影响不大，但有降低厚壁菌门（Firmicutes）与拟杆菌门（Bacteroidetes）比值（F/B）及粪球菌属（Coprococcus）相对丰度的趋势，有利于皮肤变态反应豚鼠肠道菌群组成的恢复。结论YNS益肤面霜对皮肤具有改善及修复作用，并对豚鼠肠道菌群具有一定影响。     

豚鼠模型中结核菌素纯蛋白衍生物量效关系比较研究

目的在不同分枝杆菌致敏豚鼠模型中研究结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative of tuberculin,TB-PPD)的量效关系。方法将受试豚鼠随机分成6组:结核分枝杆菌H37Rv活菌致敏组、结核分枝杆菌临床株CMCC 94757、94754、94766致敏组、卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin vaccine,BCG)致敏组和灭活结核分枝杆菌H37Rv致敏组。各组豚鼠分别于左侧大腿腹股沟皮下注射相应致敏原,5~6周后,所有豚鼠于脊柱两侧皮内注射20 IU/m L TB-PPD和50 IU/m L TB-PPD各0.1 m L;于注射后24 h、48 h观察和记录局部硬结的纵径与横径,计算平均值。结果所有组别豚鼠接受两种规格TB-PPD皮试后,无论是24 h还是48 h,局部硬结反应直径均大于10 mm,全部阳性,阳转率均为100%。5 IU TB-PPD皮试反应强度高于2 IU TB-PPD,存在明显的剂量效应关系。其中,24 h结果显示:2 IU TB-PPD和5 IU TB-PPD在H37Rv活菌致敏组、94766致敏组、灭活H37Rv致敏组皮试反应大小差异无统计学意义(t=2.291、P=0.071;t=2.722、P=0.053;t=1.76、P=0.153),其余3组5 IU TB-PPD皮试反应强度高于2 IU TB-PPD,差异均有统计学意义(t=4.098、P=0.015;t=4.811、P=0.009;t=3.068、P=0.037)。48 h硬结反应和24 h、48 h平均硬结反应结果均显示:在各致敏组豚鼠模型中5 IU TB-PPD皮试反应强度均高于2 IU TB-PPD,皮试反应大小均有统计学差异(t=3.471、P=0.018;t=3.371、P=0.020;t=6.216、P=0.003;t=5.244、P=0.006;t=3.959、P=0.017;t=4.674、P=0.010;t=4.824、P=0.008;t=3.794、P=0.019;t=3.857、P=0.018;t=2.86、P=0.046;t=3.539、P=0.024;t=3.365、P=0.028)。结论各组豚鼠致敏模型中5 IU TB-PPD的效价均明显高于2 IU TB-PPD,存在较为明显的量效关系。各种感染状态下,虽然高剂量制品可诱导更强的迟发型超敏(delayed type hypersensitivity,DTH)反应,但低剂量制品也不影响其阳性检出率。     

成团泛菌低分子脂多糖的急性毒性、刺激性、致敏性及遗传毒性评估

本研究对成团泛菌低分子脂多糖(Pantoea agglomerans lipopolysaccharide,LPSp)的安全性进行初步评估.本研究采用一次限量法,用昆明种小鼠进行LPSp急性经口毒性试验,了解LPSp的急性毒性;采用新西兰兔分别进行LPSp急性和多次皮肤刺激性试验以及急性眼刺激性试验,了解LPSp的皮肤和粘膜刺激性;采用豚鼠进行LPSp皮肤变态反应试验,了解LPSp的致敏性;应用平板掺入法进行鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验和小鼠骨髓细胞微核试验考察LPSp的遗传危害.急性毒性试验结果显示,LPSp对小鼠经口一次灌胃的LD50大于5 000 mg/kg体重,属实际无毒级别;LPSp急性和多次皮肤刺激性试验以及急性眼刺激性试验结果显示,皮肤刺激和眼刺激积分均为0分,LPSp对皮肤无刺激性、对眼睛无急性刺激性;在皮肤变态反应试验中,LPSp在各观察时间点的皮肤变态反应积分均为0分,其致敏率均为0%,说明LPSp对豚鼠无致敏性; LPSp的鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验结果呈阴性(P>0.05);LPSp的小鼠骨髓细胞微核试验结果亦呈阴性,LPSp 各剂量组的微核发生率与阴性对照组未见统计学差异(P>0.05),而与阳性对照组有明显差异(P<0.01).本研究结果表明,在本实验剂量范围内,LPSp对小鼠经口毒性极低,属实际无毒级别,对家兔皮肤和眼睛无明显刺激性,对豚鼠无致敏性,对所试菌株和小鼠体细胞无诱变性和致突变性.     

微量间接血凝试验用于斑疹伤寒诊断

用鼠肺培养的普氏立克次体提取的ESS(Erythrocytes Seasltizlng Substance)可溶性抗原致敏6种经醛固鞣化的红血球,结果证明人“O”型、绵羊、家兔红血球较敏感;在37℃或4℃条件下用2．5％戊二醛、1：20,000鞣酸各处理15分钟所致敏的血球抗原血凝滴度高;以2．5％浓度醛固鞣化血球加入等量ESS可溶性抗原致敏为宜。此法制备的血球抗原可冻干保存。血凝反应比补体结合、外斐氏试验敏感性高,特异性强,没有非特异性交叉反应。可用微量塑料板法,便于基层流行病学及临床早期诊断用,亦可用作间接血凝抑制试验检查抗原。     

蜂胶提取物的安全性试验研究

目的 探讨蜂胶的乙醇提取物（EEP）的安全性。方法 用0.5％的EEP对家兔进行皮肤急性毒性试验、皮肤刺激试验以及对豚鼠的过敏试验。结果 EEP低剂量、高剂量皮肤破损组和对照组皮肤破损组各有一只家免,在24 h观察到皮肤破损处微红,48 h消失,其余各实验兔的皮肤、毛发、眼、粘膜、呼吸、中枢神经系统均无任何中毒表现;按照皮肤刺激反应强度,评价标准,完整皮肤组平均分为0,判为无刺激性;破损皮肤组平均分值为033＜0.50,亦判为无刺激性;A组空白对照组和B组EEP组动物均无红斑和水肿反应,判为无致敏性。结论 蜂胶提取物EEP在对实验动物体外寄生虫净化中安全、无毒、无刺激。     

植物细胞离析酶的制备和应用

用 Aspergillus sp．A-19菌经固体发酵研制成一种新的植物细胞离析酶(SeparatasezA—P)。其离析单细胞的酶活力平均为70 767u／g,有效作用的pH在3．0—7．0,温度为20—45℃。发酵培养基配方是麸皮：桔皮粉：(NH₄)₂SO₄(w／w)为100:100:O．63,料水比为1 :2．0,培养适宜条件为25℃、60小时。     

解脂假丝酵母8-2利用液体石蜡发酵生产工业用柠檬酸

果园土壤筛选出一株能利用液体石蜡生成柠檬酸的酵母菌,经鉴定为解脂假丝酵母(Candida lipolytica) 8—2。在该菌所产生总酸中约50％为柠檬酸。摇瓶及500升发酵罐试验证明,8—2菌在含10—12％液体石蜡、0.25—0.5％玉米浆及6％CaCO,作中和剂的培养基中,一般能生成7％以上的柠檬酸,最高可达10．72％。此种工艺可生产工业用柠檬酸。     

食品用米曲霉α-淀粉酶的制备

米曲霉(Aspergillus oryzae)突变株6-193麦麸固体培养物酶的浸出,采用自来水或pH4.6—5.0的缓冲液在室温至50℃之间浸泡1—2小时较好。用截流分子量10000的中空纤维超滤柱过滤即得高活力的浓缩酶液,制成食品用酶制剂,收率90%。制备粉剂时,酒精沉淀总收率为55.2%,丙酮沉淀总收率高达94.1%,冷冻干燥总收率达87.6%。     

测定谷氨酸的微生物传感器的研究

本文研究了测定谷氨酸的微生物传感器。用琼脂固定化的大肠杆菌(Escherichia coli As 1．505)和二氧化碳电极制成膜状传感器,用聚丙烯酰胺固定化的大肠杆菌和二氧化碳电极制成柱状传感器。结果表明,膜状传感器在25℃测定谷氨酸的范围为60－1200mg／I,响应时间为1020min,柱状传感器在30℃测定谷氨酸的范围为60－800mg／1,响应时间为5—7 min。两种传感器测定误差为2—3％以下,20天内使用60多次,不见其活力下降。     

高活性纤维素酶菌株778-1的筛选鉴定与产酶条件的研究

我们从湖南省隆回县河岸土中分离筛选到产生高活性纤维素酶的野生菌株778-1,其酶活性比优良的木霉野生菌株高一倍[1,2],并对秸杆类天然纤维素有较强的降解作用。此菌株按《青霉鉴定手册》[3]鉴定属于散枝亚组微紫青霉系(P．Janthinellum series)鱼肝油青霉(P．Piscarium wcstling)和微紫青霉(P. janthinellum biourge)的中间类型。最适培养基成分为：苞米秸粉(1号)10g,营养盐溶液(NaNO,1.5％,(NH4)：SO4 0．8％,KH2PO4 0．2％,MgSO47H2O 0．05％)30ml。pH5-5—6．0,25—30℃培养96小时。在此条件下该酶分解滤纸、CMC、棉花的活性分别为200—220 mg／g.h、4000一4200mg／g．H 580--650mg／g．H。在上述 培养基中加入0．2—0．6g豆饼粉酶活性可以进一步提高。     

韭菜根际荧光假单胞菌株的分离和初步研究

从韭菜（Alliumtuberosum）根内分离出荧光假单胞菌PseudomondsfluorescentDEI。用筛选出的具有利福平抗性的自发突变株P．F．NKDE2通过拌种和拌培养土回接韭菜,结果表明：P．F．NKDE2能定殖于韭菜根表、根内和根固土中．播种前用P．F．NKDE2拌种,对韭菜生长有明显的促生效果;与对照相比,幼苗的单株根重、主根长、单株叶重及子叶长度四项指标均有显著差异。     

立克次体脂肪酸图谱及其相似性判别

用气相色谱-质谱法分析了7株立克次体浓盐乙醚纯化物的脂肪酸成分,即R．ProwazekiE株、R. conorii Simkoo株、R.rickettsii R株、R sibirica Barbash株和246株、R．Si—nkiangensis Jinghe。株以及R.heilugkiangensis 54株。所得脂肪酸色谱图中有近50个色谱峰,初步确认有以下1 6种： C11:10、2OH—C10:1、C12:0、2OH—C12:0、C13:0、C14:0、C15:0、3OH-C14:0,C16:1、C16:0、C17:0、C18:1、C18:1、C18:0、C19:0和C22:0。其中主要成分是直链饱和脂肪酸C16:0、C18:0及C14:0与不饱和脂肪酸C18:1、C18:2及C16:1。实验菌株脂肪酸图谱经改进的Kulik—Vincent相似系数法处理后,精河株和246株的相似系数为9 7.09%,54株和其他菌株的相似系数在81．6--94．6％之间。     

海枣曲霉β-木糖苷酶的提纯和性质

从海枣曲霉(Aspergillus phoenicis)麦麸培养物抽提液中。通过聚乙二醇6000-磷酸钾缓冲液双水相分离．相继用SephadexG-100凝胶过滤、DEAE—Sephadex A-50离子交换柱层析、羟基磷灰石吸附层析、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、SE—Sephadex C-50离子交换层析以及Sephadex G-50柱层析等提纯步骤,提纯到凝胶电泳均一的β-木糖苷酶。该酶的最适pH为3．5,最适温度为65 C．在pH3．5—6．5之间稳定,酶保温30分钟时的半失活温度(t1-2)为68C。酶的分子量勾95 000,等电点为4．4。Hg2-和Ag+对该酶有强烈的抑制作用。在所测定的底物中．Β-术糖苷酶仅对β-木精苷(pNP-β-Xyl)有强水解作用。其Km值为0．63mmol／L．Vmax为410 umol·min 1．Mg-1。D-木糖为β-木糖苷酶的竞争性抑制剂,其K．值为7．5mmol／L。