天花粉蛋白引起敏感细胞膜上G蛋白激活的初步研究

天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)是一种单链核糖体失活蛋白,具引产、抗肿瘤、抗HIV等多种生物学功能。天花粉蛋白专一性杀伤敏感细胞的机制一直未被研究清楚。本文首次以生物分子相互作用分析(BIA)证明在天花粉蛋白敏感的细胞膜上存在着能与天花粉蛋白专一结合的组分。我们进一步利用[~(35)S]GTPγS结合实验发现天花粉蛋白能够激活敏感细胞膜上的G蛋白,而对不敏感细胞没有相应的G蛋白激活。这些结果表明了在敏感细胞膜上天花粉蛋白特异受体的存在。     

天花粉蛋白引产原理的探讨

天花粉粗提物是从葫芦科植物栝楼的根提取出的中期引产药物,其纯化的引产有效成分为分子量约18,000的碱性蛋白质,称为“天花粉蛋白”。经鉴定对中期妊娠有很好的引产效果。同时,对宫外孕、葡萄胎、恶性葡萄胎有独特的疗效,对绒毛膜上皮癌也有一定的疗效, 根据对天花粉蛋白的原初作用部位,胎盘和离体培养的人滋养层细胞的形态和功能损伤,以及抑制前列腺素合成对天花粉蛋白引产的影响等方面的研究结果,互相印证,初步阐明了天花粉蛋白引产作用原理:(1)天花粉蛋白直接作用于胎盘的滋养层细胞,并有一定的细胞专一性:(2)天花粉蛋白能选择地使胎盘绒毛合体滋养层细胞变性坏死,解体的细胞碎片留在血窦中,引起凝血,造成循环障碍和进一步的大量组织坏死,胎盘绒毛坏死是原发的,循环障碍是继发的:(3)胎盘绒毛的损伤反映在功能方面,HCG和甾体激素迅速下降到先兆流产的临界水平以下。由于胎盘形态和功能严重损伤的结果,破坏了母体和胎儿之间的内分泌关系和代谢物的交换,并假定可能通过尚未弄清楚的机制,引起前列腺素合成的增加,发动宫缩而导致流产。总之,天花粉蛋白是从中草药发掘出来的一个植物蛋白性的中期引产和抗增生性滋养层细胞疾病的药物。天花粉蛋白引产作用原理的初步阐明,在实践上为提高和扩大天花粉蛋白的     

天花粉蛋白放射免疫测定法

天花粉蛋白(Trichosanthin)是一种使用简便而有效的中期妊娠引产药物。鉴于目前临床上一般采用肌肉注射天花粉蛋白粗提物引产,剂量5—10毫克,估计由肌肉转移至血循环的天花粉蛋白量,每毫升血液中至多也只有毫微克水平。因此,为了准确地了解天花粉蛋白在血循环中量上的动态变化,探讨天花粉蛋白的代谢规律,进一步深入研究天花粉蛋白在细胞水平和分子水平的作用原理,以及改进临床用药途径和降低有效剂量,建立天花粉蛋白的超微量分析技术就显得更加迫切和重要。     

注射用天花粉对早孕兔子宫收缩的作用

天花粉针剂中期引产的成功,是中西医结合、整理和提高祖国医药学遗产的一项重要成果。据报道,天花粉蛋白的引产原理,主要作用于胎盘绒毛的合体滋养层细胞。由于药物引起滋养层细胞的变性和坏死,破坏其功能,从而导致胎儿死亡,以达到引产目的。但是关于天花粉蛋白使滋养层细胞损伤,如何引起宫缩发动的问题,尚缺乏针对性研究。目前,天花粉针剂在临床上用于早孕流产,出现了可喜的苗头;以天花粉针剂和15甲基前列腺素 F_(2α)联合用药终止早孕,更取得显著进展。开展天花粉蛋白对妊娠     

天花粉蛋白对合体滋养层细胞功能损伤的动态分析

引言天花粉蛋白对胎盘滋养层的作用有一定的细胞专一性(上海实验生物研究所第二研究室,1976;熊用周等,1976;王应天,1978),直接损伤合体滋养层细胞是天花粉蛋白导致中期孕妇引产的一个关键环节(上海实验生物研究所第二研究室,1976)。已经了解,测定血清中绒毛膜促性腺激素(HCG)和胎盘促乳素(HPL)可     

荧光标记抗体追踪天花粉蛋白引产作用部位的研究

目前,天花粉粗提物作为中期引产药物,虽然在临床已广泛使用,但是对天花粉蛋白中期引产的原理还不甚了解。根据临床引产下来的胎盘病理观察,发现滋养层细胞广泛坏死,绒毛间隙有大量的纤维蛋白沉着。天花粉粗提物对宫外孕、葡萄胎、恶性葡萄胎和     

无花粉蛋白在体内定位的放射自显影研究

天花粉蛋白是从中草药发掘出来的一个植物蛋白性的中期引产和抗增生性滋养层细胞疾病的药物。在临床应用中已累积了大量经验。关于作用机理的研究也进行了各方面的工作(上海实验生物研究所第二研究室,1976)。在小白鼠以间接荧光标记抗体法,追踪了给药后不同时间,“纯制天花粉”抗原分布的动态。结果证明,天花粉蛋白的原     

天花粉蛋白在真核细胞核糖体28S RNA上的作用位点

天花粉蛋白(trichosanthin)是一种核糖体失活蛋白。在临床上用于妊娠引产,近来发现它还具有抗艾滋病毒(HIV)的功能。我们在前文中报告,从经过天花粉蛋白处理的大鼠肝核糖体抽得的rRNA,再用苯胺作用,经     

以抗病毒作用为指标测定天花粉蛋白生物活性的微量方法

天花粉蛋白是从祖国医药宝库中发掘的引产药物。近年来,研究者证明,天花粉蛋白在组织培养上可抑制人免疫缺损症病病毒(HIV)和其它病毒的复制。 天花粉蛋白生物活性的测定,一般用小白鼠等怀孕动物测定引产活性,也有人用兔网织红细胞裂解液体外转译体系,测定其抑制蛋白合成的能力。前者天花粉蛋白用量大,后者用量虽小,但实验较繁琐而且需同位素标记的氨基酸和必要的设备。     

天花粉蛋白对体外培养人胎盘绒毛滋养层细胞影响的研究

随着天花粉粗提物中期引产和治疗滋养层细胞疾病在临床上推广应用,深入研究其作用原理,具有重要的实际意义。临床实践和动物实验(上海市天花粉科研协作组,1996),为研究引产原理积累了许多有价值的资料。在小鼠中荧光标记抗体的追踪实验证     

小鼠抗天花粉蛋白IgE单克隆抗体的制备、分离和鉴定(英文)

天花粉蛋白是中药天花粉的有效引产成份,在应用中它偶尔也引起过敏反应。我们用杂交瘤技术建立了一株分泌抗天花粉蛋白特异性IgE单克隆抗体的杂交瘤细胞系。在实验中,二次免疫的C57 BL/6 J小鼠的肠系膜淋巴结细胞和脾细胞分别被用来同NSI骨髓瘤细胞进行融合。虽然在融合前动物血清IgE抗体效价仅为40～160 PCA滴度,但用肠系膜淋巴结细胞进行的4次融合都产生了IgE杂交瘤。阳性率为1.0-6.7%。对比之下,用脾细胞进行的另外两次融合却没有观察到IgE杂交瘤产生,统计结果说明差异显著(P<0.05)。该IgE单克隆抗体可以在体内和体外诱发大鼠肥大细胞脱颗粒。56℃热处理2小时能使该抗体诱导PCA反应的能力完全丧失,然而却不影响其结合抗原的能力。对该单克隆抗体的特异性的鉴定表明,它可以特异性地识别精制天花粉蛋白和结晶天花粉蛋白上的抗原决定簇。     

天花粉蛋白及其与抗体的复合物对蛋白质合成的抑制作用(简报)(英文)

天花粉蛋白在无细胞系统中显示强烈的抑制蛋白质生物合成的能力,其活性与经巯基试剂还原开裂的蓖麻毒蛋白相当。天花粉蛋白对BEL-7402人肝癌细胞的毒性甚低,但当它通过二硫键与抗肝癌单抗Hepama-1偶联后,其毒性增强五十倍。张学军和王家槐不久前发现天花粉蛋白与蓖麻毒蛋白A链的一级结构有很大的相似性~[5]。我们的实验结果与他们的发现互相印证。天花粉蛋白与抗体偶联后,可能通过抗体与细胞表面抗原的结合而内化,从而增强了它的细胞毒性。考虑到天花粉蛋白与其他植物单链致核糖体失活蛋白(RIPs)有不少特性十分相似,我们推断天花粉蛋白是RIP家族中的一员。天花粉蛋白与抗体偶联过程中,双功能试剂SPDP的修饰使天花粉蛋白的活性降低一个数量级,似乎意味着天花粉蛋白上的某些氨基可能对其活性至关紧要。发展新的偶联方法的工作正在进行。如能在双功能试剂修饰后保留其大部分活性,天花粉蛋白作为免疫毒素的“弹头”药物可能颇具潜力。     

天花粉蛋白在孕鼠体内的酶标定位

天花粉蛋白(TCS)是一种高效的引产剂,也能用于治疗宫外孕及其他滋胚层细胞增生性疾病。药物有相当的专一作用,损伤胎盘而其他组织不受严重影响。从孕猴注射药物后胎盘在短期内所出现的显微的和超微的形态变化来看,破坏绒毛的合体滋胚层细胞是作用机制的关键。中     

天花粉蛋白对体外培养不同种类细胞的作用

本文进行了天花粉蛋白对离体培养的葡萄胎细胞、早孕蜕膜细胞、人胎儿肾皮质部细胞、HeLa细胞和鼻咽癌上皮细胞的损伤作用的比较研究。为了探索天花粉蛋白选择损伤细胞是否存在专一结合细胞的可能性,又以不敏感的蜕膜细胞为材料,应用辣根过氧化物酶标记技术进行了天花粉蛋白与细胞结合和进入细胞内定位的实验。此外,并以肝癌细胞为材料研究了对细胞增殖率的影响。结果表明葡萄胎合体滋胚层细胞和胎盘合体滋胚层细胞一样都是最敏感的细胞,经1微克天花粉蛋白处理即出现形态上损伤,至50微克则大多数细胞呈现不可逆的退化损伤,而其它类型的细胞则表现出有相当大的抗性。过氧化物酶标记追踪天花粉蛋白在细胞内分布的结果表明天花粉蛋白与蜕膜细胞有一定的亲和力,提示天花粉蛋白似乎不存在严格的细胞结合专一性;而天花粉蛋白在细胞内的分布一般仅限于细胞质,这一现象似乎提示细胞质区可能就是天花粉蛋白直接作用的靶的范围。细胞增殖率的实验结果表明50微克以上的药物剂量对肝癌细胞增殖率有一定的抑制作用,剂量增加抑制作用也增加。但是,经过一定的修复期以后,细胞增殖率又可得到完全恢复,反映了对细胞生长抑制的可逆作用。上述实验结果进一步加强了天花粉蛋白对滋胚层细胞具有一定细胞损伤专一性的结论。本文并对细胞损伤专一性问题进行了讨论。     

天花粉蛋白引产和内源前列腺素的关系的初步研究

天花粉蛋白中期引产的实验研究,证明胚盘的形态和功能损伤是引产过程的原初的和关键的变化(上海实验生物研究所第二研究室,1976)。然而,还必须注意到,只有当这些变化导致发动宫缩等一系列分娩活动时,才能将胎儿和胎盘排出,完成流产。因此,胎     

分泌抗天花粉蛋白单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤细胞系(简报)

天花粉蛋白经我国化学、生物学和医学工作者近年来的共同努力,用于中期引产的成功率已达百分之九十八,用作抗早孕的成功率也已达百分之九十二以上。(沈阳市计划生育科学研究所刘国武等,未发表资料)。为使用高度专一的单克隆抗体,进一步分离纯化天花粉蛋白的有效成分,以开展天花粉蛋白的生物活性与抗原结构关系的研究,最近我们采用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了二株稳定     

天花粉蛋白引起猕猴滋胚层细胞损伤的超微观察

前言天花粉蛋白已成为终止中期妊娠和治疗宫外孕及滋胚层细胞增生性疾病的重要药物(上海市天花粉科研协作组,1976)。通过病理检查和作用机制的探索,提出天花粉蛋白具有损伤胎盘绒毛滋胚层细胞的专一作用(上海实验生物研究所第二研究室,1976;王应天等,19769 熊用周等,1976),分化程度高的合体滋胚层细胞敏感,分化程度低的细胞滋胚层细胞不敏感。天花粉蛋白对滋胚层细胞的损伤作用是原发性的,而凝血是继发性的,可能是     

天花粉蛋白诱发人体免疫抑制中单核细胞和T细胞的相互作用

本文研究天花粉蛋白诱发人体免疫抑制过程中,单核细胞的功能及其与T 细胞的相互作用。结果表明:单核细胞能介导天花粉蛋白诱发的免疫抑制;纯化的T 细胞则不能单独介导。但是T 细胞在单核细胞存在的情况下能获得介导免疫抑制的能力。抗原加工阻断剂Antipain能减弱单核细胞介导天花粉蛋白诱发免疫抑制的能力。证实天花粉蛋白的免疫负调节作用依赖单核细胞的抗原提呈功能。     

MITF在葡萄膜黑色素瘤细胞中的功能研究

该研究首先通过qRT-PCR和Western blot发现,MITF在人葡萄膜黑色素瘤细胞中的RNA水平及蛋白水平都显著高于葡萄膜黑色素细胞中的水平。通过RNA干扰技术下调葡萄膜黑色素瘤细胞中的MITF的表达,采用MTS实验、细胞平板克隆实验发现,MITF下调后葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖能力被显著抑制。利用流式细胞术及Hoechst染色、Caspase 3/7活性检测发现其细胞周期受到阻滞,且凋亡水平增加。通过RTCA xCELLigence DP检测系统定量检测发现,si-MITF能抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的迁移及侵袭能力。Western blot检测发现,MITF下调后葡萄膜黑色素瘤细胞中细胞周期相关蛋白p-Rb(retinoblastoma)、CDK2(cyclin-dependent kinase 2)、CDK6、细胞周期蛋白D2(Cyclin D2)以及CyclinE2的表达水平下调,与增殖及迁移侵袭密切相关的FAK(focal adhesion kinase)及ERK(extracellular signal-regulated protein kinases)蛋白的磷酸化水平降低。该研究表明,在葡萄膜黑色素瘤细胞中下调MITF的表达后,细胞内部分周期相关蛋白、细胞增殖及迁移侵袭相关蛋白的表达均有下调,导致细胞发生G_1期阻滞,使细胞的增殖、迁移及侵袭能力受到抑制,同时也促使细胞发生凋亡。     

花粉蛋白诱导胞内钙离子信号波动的研究

钙离子是细胞生命活动中的一个重要的调节因子,在细胞对外界刺激产生反应以及细胞死亡过程中,它扮演着重要的角色。天花粉蛋白是一种抗肿瘤药物,对绒毛膜上皮癌细胞的杀伤力特别强。通过对绒毛膜上皮癌细胞内钙离子进行ｆｌｕｏ－３／ＡＭ荧光染色发现,天花粉蛋白的加入能诱导绒毛膜上皮癌细胞内钙离子浓度的增加。经天花粉蛋白作用２４小时后,被天花粉蛋白损伤的绒毛膜上皮癌细胞内钙离子的浓度比正常细胞要高得多。在开花粉蛋