扩展青霉碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达

将编码扩展青霉碱性脂肪酶 (PEL)的cDNA克隆到酵母整合型质粒pPIC3.5K ,电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115 ,通过橄榄油 MM平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDS PAGE分析、橄榄油检验板鉴定 ,表明扩展青霉碱性脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中获得了高效表达。表达蛋白分泌至培养基中 ,分子量约 2 8kD ,与扩展青霉碱性脂肪酶大小一致 ,占分泌蛋白的 95 %。橄榄油检验板检验表明该表达蛋白可分解橄榄油 ,通过优化该表达菌的发酵条件 ,以橄榄油为底物进行酶活测定 ,其发酵液酶活可达 2 6 0u mL。     

扩展青霉碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达

将编码扩展青霉碱性脂肪酶（PEL）的cDNA克隆到酵母整合型质粒pPIC3.5K,电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,通过橄榄油MM平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDSPAGE分析、橄榄油检验板鉴定,表明扩展青霉碱性脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中获得了高效表达。表达蛋白分泌至培养基中,分子量约28kD,与扩展青霉碱性脂肪酶大小一致,占分泌蛋白的95%。橄榄油检验板检验表明该表达蛋白可分解橄榄油,通过优化该表达菌的发酵条件,以橄榄油为底物进行酶活测定,其发酵液酶活可达260 u/mL。     

消费者橄榄油购买行为影响因素的实证研究——以成都市为例

识别消费者橄榄油购买行为的影响因素,能够为扩大橄榄油消费市场、推动橄榄油产业健康发展提供决策参考。基于合理行为理论,构建消费者橄榄油购买行为理论模型,运用成都市346名消费者调查数据,分别采用二元Logistic模型和多元有序Logistic模型分析影响消费者橄榄油购买经历和购买数量的主要因素。研究结果表明：消费者的性别、年龄、橄榄油的口感以及信息获取是影响消费者购买经历的显著因素,而消费者的年龄、家庭月收入、橄榄油的口感和促销活动则对消费者购买数量有着显著的影响。由此提出加强市场营销的针对性、提升橄榄油的品质、加大市场宣传力度等对策建议。     

毕赤酵母组成型表达脂肪酶及其高通量筛选方法

【目的】获得组成型表达脂肪酶毕赤酵母,建立利用橄榄油罗丹明B平板高通量筛选组成型表达华根霉脂肪酶基因的有效方法。【方法】运用PCR技术从pGAPZαA表达载体上扩增得到GAP启动子片段,插入到表达载体pPIC9K-proRCL中,构建组成型表达载体pGAPK-proRCL。在保留含有同源双交换重组序列的诱导型启动子AOX1序列的基础上,电转化后华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶基因proRCL表达盒在毕赤酵母基因组上发生双交换整合事件,从而组成型表达单拷贝的华根霉脂肪酶基因。【结果】重组菌发酵144 h后,脂肪酶最高酶活为130 U/mL。利用橄榄油罗丹明B平板高通量筛选组成型表达华根霉脂肪酶基因。【结论】该方法将初筛时间从12 d缩短为3 d,排除了多拷贝突变株的干扰,为后续脂肪酶的定向进化及筛选奠定了基础。     

NEJM：坚果橄榄油对心血管疾病有防护作用

橄榄油和坚果不仅是制作香喷喷的香蒜沙司不可缺少的作料，同时也是健康饮食的一个重要组成部分。     

基于易错PCR定向进化扩展青霉 Penicillium expansum FS1884碱性脂肪酶

为改善扩展青霉FS1884碱性脂肪酶的活性及酶学性质,利用连续两轮易错PCR对扩展青霉FS1884脂肪酶基因PEL进行随机突变,在大肠杆菌JM109中构建突变文库。含突变脂肪酶基因的重组质粒电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,经过YPOM板初筛和橄榄油检验板复筛,获得一株酶活性提高的脂肪酶突变体:PEL-ep25-GS。与野生型脂肪酶PEL-GS相比,在最适温度40℃、pH9.4时突变体的酶活力是野生型酶的1.3倍。测序结果表明:该突变体第253位氨基酸发生了突变,由赖氨酸变成蛋氨酸。     

环境保护上的应用

<正> 853811 橄榄油厂废水的厌氧消化[英]/Boari,G.…∥Agric.wastes.-1984,10(3)-161～175[译自 DBA,1984,8(17),84-08440]经调查,橄榄油作坊废物的厌氧处理是采用实验室(a)和中间规模(b)UASB 消化     

多酚类物质抑制人血管上皮细胞MMP-9和COX-2而减少炎症性血管新生

血管新生参与一系列的病生理过程,包括炎症疾病和癌症。地中海式饮食对血管新生有预防功效,其中初榨橄榄油和红酒中的多酚类物质起着关键作用,然而其中的作用机理尚未明确。本文的研究者通过研究初榨橄榄油中的OE和HT,以及红     

固液态发酵中橄榄油对Rhizopus chinensis全细胞脂肪酶的影响*

主要对华根霉全细胞脂肪酶固态和液态两种发酵过程进行比较,并着重探讨不同培养方式下橄榄油对其合成活力和水解活力的影响。结果表明:液态培养较有利于菌体生长,对脂肪酶的生产也有一定的促进作用。橄榄油的加入不仅有利于菌体生长、提高脂肪酶水解活力,更可使脂肪酶的合成活力显著增加,液态发酵下的效果更为明显。橄榄油在整个发酵过程中可能既作为碳源又是脂肪酶的诱导物。另外,全细胞脂肪酶的水解活力和合成活力在固液态发酵条件下均存在不对应性,表明华根霉可能产性质不同的脂肪酶同功酶。     

植物油对隐甲藻(Crpythecodinium cohnii)生长和DHA产量的影响

研究了植物油对隐甲藻（Crypthecodinium cohnill ATCD30556)生长及DNA产量的影响。结果表明,培养基中添加1－2％橄榄油或豆油均可促进隐甲藻生长及增加DHA产量,添加1－5％花生油对隐甲藻生长及DHA产量影响不大。以获得DHA为目的,则培养基中添加1％的橄榄油或豆油即可。     

固液态发酵中橄榄油对Rhizopus chinensis全细胞脂肪酶的影响

主要对华根霉全细胞脂肪酶固态和液态两种发酵过程进行比较,并着重探讨不同培养方式下橄榄油对其合成活力和水解活力的影响。结果表明：液态培养较有利于菌体生长,对脂肪酶的生产也有一定的促进作用。橄榄油的加入不仅有利于菌体生长、提高脂肪酶水解活力,更可使脂肪酶的合成活力显著增加,液态发酵下的效果更为明显。橄榄油在整个发酵过程中可能既作为碳源又是脂肪酶的诱导物。另外,全细胞脂肪酶的水解活力和合成活力在固液态发酵条件下均存在不对应性,表明华根霉可能产性质不同的脂肪酶同功酶。     

6种天然植物油的性能研究

通过高温加热试验、体外DPPH及酪氨酸酶抑制试验和人体皮肤保湿试验研究橄榄油、葡萄籽油、月见草油、火麻油、山茶油和茶树油的热稳定性、体外抗氧化及抑制酪氨酸酶能力和人体皮肤保湿能力,并进行综合评价打分。结果表明,橄榄油、月见草油较稳定(波长分别红移4、1 nm,吸光度增加了0.224、0.261),橄榄油、月见草油及葡萄籽油的体外抗氧化活性较好(IC50=298.40、281.53、277.27 mg/m L),25~325μg/m L的6种植物油对酪氨酸酶均无抑制作用(熊果苷的IC50=95.13μg/m L),茶树油和月见草油的人体皮肤保湿性能较好,不同含油量及环境湿度下均能显著提高皮肤水分含量。综合评价得分顺序依次为:月见草油橄榄油葡萄籽油茶树油山茶油火麻油。     

响应面法优化Burkholderiasp．SYBCLIP—Y发酵产低温脂肪酶条件的研究

用响应面法对Burkholderiasp．SYBCLIP—Y液体发酵产低温脂肪酶的发酵条件进行了快速优化。首先利用Plackett—Burman设计对影响其产酶相关因素进行评估并筛选出具有显著效应的三个因素：牛肉膏,橄榄油,TritonX-100;用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域后,利用响应面中心组合设计对显著因素进行优化,确定出牛肉膏,橄榄油,TritonX-100的最佳浓度分别为：牛肉膏31．8g／L、橄榄油21mL／L、TritonX-10036．55mL／L,优化后脂肪酶的酶活达到61．52U／mL,是优化前的2．62倍。     

碳源对轮枝链霉菌SK-2合成谷氨酰胺转胺酶的影响

研究不同的碳源对轮枝链霉菌(StreptoverticilliumSK-2产谷氨酰胺转胺酶的影响.结果2%甘油是最有效的碳源,其最高酶活达7.89μmol/(min*ml);添加油脂有助于菌体产酶,在各种油脂中,以添加橄榄油效果最好.并进一步研究了甘油和橄榄油作为复合碳源对产酶的影响.     

“光照对橄榄油品质的影响”在中职生物学实验教学中的应用

在中职生物学教学过程中,实验教学是重要的组成部分。依据中职学生的学习特点及中职学校培养技能性人才的目标,设计与现实生活贴近、操作性较强的"光照对橄榄油品质的影响"实验,旨为让学生在实验操作过程中,学会基本仪器的操作、溶液配制,理解光照会引起橄榄油品质变化的原因,同时调动学生的主观能动性,积极参与实验,提高动手能力,为今后就业做准备。     

羟基酪醇作为线粒体营养素的调控机制

地中海饮食,特别是橄榄油,赋予了地中海周边国家人民对于退行性疾病的强力抵抗,尤其是心血管疾病和肿瘤的发生率以及致死率相对更低。羟基酪醇是橄榄油中的多酚类化合物之一,在防治紫外辐射、糖尿病、老年性视网膜黄斑病变、心血管疾病以及肿瘤等方面都具有重要的生物学效应。将具体阐述羟基酪醇作为一种线粒体营养素（如通过调节线粒体的动态变化以及Nrf2介导的抗氧化酶的诱导等）如何促进其有益功能。     

单因子-响应面法优化白地霉Y162产脂肪酶条件

对白地霉Y162液体发酵产脂肪酶的条件进行了优化。首先采用单因子实验筛选出最适碳源为橄榄油,氮源为黄豆粉和NH4Cl,无机盐为BaCl2和MgCl2。在此基础上,利用Plackett-Burman设计对影响产酶因素的效应进行评价,筛选出具有显著效应的橄榄油、BaCl2和NH4Cl三个最显著的因素。用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域后,利用响应面中心组合设计对显著因素进行优化,得出橄榄油、BaCl2和NH4Cl最佳浓度分别为2.35％,0.36％,1.35％。优化后液体发酵液中脂肪酶活力提高到31.85 U/mL,比初始酶活力14.16 U/mL提高了2.25倍,表明单因子-响应面结合法可显著优化白地霉Y162液体发酵产脂肪酶条件。     

卡诺拉提取物作天然抗氧化剂

卡诺拉提取物作天然抗氧化剂食用油变质的重要原因是自动氧化作用。卡诺拉油的特殊的脂肪酸成份使它区别于其它植物油。卡诺拉油亚麻酸（Ｃ１８：３）含量高（８一１２％），而其它植物油如豆油，向日葵油、橄榄油、玉米油的含量均比它低。高含量的不饱和脂肪酸，尤其是Ｃ...     

环境保护上的应用

911015 在橄榄油碾磨厂废水厌氧净化中脂肪酸的检测[英]/Morelli,A.…// Biol.Wastes.-1990,32(4).-253～263[译自DBA,1990,9(15),90-09140]利用一上流式厌氧污泥床(UASB)消化槽和一上流式厌氧固化床消化槽研究了橄榄油碾磨厂废水(与自来水按1∶8稀释)的厌氧消化.测定了废水净化前后所含月桂     

利用a凝集素在酿酒酵母表面展示解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2

[目的]将解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2展示在酿酒酵母表面,构建全细胞催化剂.[方法]采用PCR方法扩增得到解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2成熟肽编码基因LIP2,将其连接到AGA2基因的下游构建表面展示载体pCTLIP2.分别以橄榄油、三丁酸甘油酯和对硝基苯酚棕榈酸酯(pNPP)为底物检测展示的脂肪酶酶活.在此基础上,对野生菌及工程菌的酶学性质进行比较.[结果]展示Lip2的酿酒酵母重组菌株在半乳糖的诱导下,表现出水解橄榄油、三丁酸甘油脂以及pNPP的活性,20℃诱导72h时酶活达到最高,为182 U/g干细胞.对展示的Lip2的酶学性质研究表明,其最适温度为40℃,最适pH为8.0,温度稳定性比自由酶有所提高,50℃温浴4 h后残余酶活为其最大酶活的23.2%.以不同碳链长度的对硝基苯酚酯为底物检测其底物特异性,结果显示其水解C8,C12,C16对硝基苯酚酯活性相近,均远高于对硝基苯酚丁酸酯(C4)的水解酶活.[结论]对于Lip2,a凝集素系统是一个有效的展示系统,利用该系统成功将Lip2展示在酿酒酵母表面,从而构建了酿酒酵母全细胞催化剂,该全细胞催化剂具有良好的潜在应用前景.