农杆菌介导籼稻优良恢复系bar基因的遗传转化研究

应用农杆菌介导转化体系,成功地将含有CaMv35s启动子启动的bar基因导入籼稻幼胚来源的愈伤组织,获得籼稻优良恢复系T461、R402和752三个品种（系）共47个抗除草剂Basta的转基因株系,Southem分析结果表明,转基因植株基因组中检测到bar基因的整合,转基因植株自交后代Basta除草剂抗性鉴定表现出分离,且大多数为1-2个整合位点的孟德尔方式遗传。结果表明,根癌农杆菌介导法可以有效且可靠地转化籼稻。     

芪合酶基因转化番茄产生白藜芦醇的研究

为了获得含有白藜芦醇的转基因番茄,从葡萄雷司令中克隆到芪合酶基因,以之构建了含有组成型启动子的植物表达载体pBS2,用于农杆菌介导对番茄品种Tx00l4的遗传转化。通过对诱导愈伤、出芽、生根、再生植株的筛选,得到5株再生小苗,经PCR、Southem检测证实,有3株为真正的转基因植株。用HPLC对3株转基因植株叶片进行白藜芦醇含量鲜重分析,它们中白藜芦醇的含量分别为12．45μg/g,5.35μg/g,4.55μg/g。     

农杆菌介导的玉米遗传转化研究进展

本文就农杆菌介导的玉米遗传转化的技术要点及原理等进行了综述,并对各种影响农杆菌率玉米效率的关键因子包括农杆菌的菌株与载体、标记基因、受体材料的基因型、来源和发育状态以及组织培养的条件等进行了讨论。     

农杆菌介导棉花大规模高效转化体系的研究

对农杆菌介导法转化棉花技术体系进行了综合改进,突破基因型的限制,使多品种或基因型(10个以上)的我国主栽棉花品种(系)转化成功,其中中棉所24号发展成为快速模式化转化品种(转化周期5～7个月,转化率8．1％),CCRI27、CCRI36等多个品种转化体系基本成熟。不同转化体系的愈伤组织诱导率为10％～40％,愈伤组织胚性愈伤诱导率达到10％～40％,转化率总体平均达到1．8％,并对大批量再生苗的鉴定予以程序化。实现棉花转基因规模化,达到年产转基因棉花植株2000～4000株以上的水平。     

根癌农杆菌介导的虎杖茎尖转化研究

为了建立根癌农杆菌介导的虎杖茎尖遗传转化体系,以虎杖的茎尖为转化受体,研究了携带白藜芦醇合酶基因(PcRS)的根癌农杆菌载体介导的虎杖遗传转化若干因素对转化效果的影响。结果显示,较适宜的转化系统为预培养2 d,农杆菌菌液(OD600值为0.6)侵染10 min,共培养3 d,在含8 mg/L潮霉素的培养基上诱导不定芽。利用该体系从300块茎尖外植体中共转化获得15株抗性再生植株,经PCR和Southern杂交检测,有6株虎杖的基因组中已整合进了目的基因。     

农杆菌介导的墨兰遗传转化

转基因育种是快速定向改良兰花育种目标性状的有效方法,但迄今未见有关墨兰转基因育种的研究报道。试验以‘企剑白墨’墨兰Cymbidium sinensis cv.‘Qijianbaimo’的根状茎为受体材料,研究了影响农杆菌介导墨兰遗传转化效率的因素,以建立有实用价值的墨兰遗传转化技术体系。结果表明,受体的预培养时间、乙酰丁香酮的添加方式及浓度、农杆菌工程菌液浓度(OD600)、侵染时间和共培养时间均对‘企剑白墨’根状茎的GUS瞬时表达率有显著影响。以预培养39 d的根状茎尖为材料,在添加200μmol/L乙酰丁香酮,OD600为0.9的工程菌液中侵染35 min后,转入添加200μmol/L乙酰丁香酮的共培养基中培养7 d时,‘企剑白墨’根状茎的GUS瞬时表达率最高,为11.67%。采用上述条件对‘企剑白墨’墨兰进行遗传转化,经PCR鉴定和GUS染色检测,从400株再生植株中获得了3株转基因植株,转化率为0.75%。研究表明通过农杆菌介导法对墨兰进行遗传改良是可行的。     

农杆菌介导的紫花苜蓿高效遗传转化体系的研究

为建立高效的农杆菌介导的紫花苜蓿的遗传转化体系,对影响转化体系的若干因素进行了研究.结果表明,最适宜的条件分别为抗菌素为350 mg/L的羧苄青霉素(Carb);卡那霉素(Kan)筛选的浓度为60 mg/L;基因型为WL-323;外植体为下胚轴;农杆菌菌液浓度OD600值为0.4-0.6;侵染时间10 min;乙酰丁香酮(AS)的浓度为10 mg/L.     

农杆菌介导的天绿香遗传转化影响因素的研究

通过农杆菌介导的方法将新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因Mpafp149导入天绿香中,对影响农杆菌转化频率的各种因素进行了研究。结果表明农杆菌介导天绿香遗传转化的潮霉素最佳筛选浓度为8 mg·L^-1,预培养时间2 d,共培养时间2 d,菌液浓度OD₆₀₀为0.2～0.25,浸染时间为8 min时适宜天绿香不定芽的诱导,有利于天绿香转基因植株的获得。通过PCR检测,初步证明外源基因Mpafp149已整合到天绿香基因组中。     

农杆菌介导的芸苔属植物遗传转化技术的研究进展

本文从芸苔属植物遗传转化技术的几大要素：植物基因型,农杆菌株系,外植体生理状态及培养条件;筛选标记及抗生生素类型,ＡｇＮＯ３的作用;褐化及玻璃苗的防治等方面对农杆菌介导的转化技术的研究进展进行了综述。     

液体悬浮培养促进蔓茎堇菜高效再生的研究

液体悬浮培养具有促进蔓茎堇菜芽分化的作用。以叶片为外植体在培养基MS 2,4-D1.5 ZT1.0中诱导出生长良好的愈伤组织。愈伤组织在液体培养基MS 6-BA1.0 NAA0.25中振荡培养12d后（转速为90r/min）,转入固体培养基MS 6-BA2.0 NAA0.5中继续培养14d,芽分化率可达97.5%,转接至生根培养基MS NAA2.0 6-BA0.25中培养1个月后可移栽,成活率在90%以上。     

蔓茎堇菜总黄酮提取工艺初探

分别采用热水浸提法、甲醇浸提法和乙醇浸提法来提取蔓茎堇菜样品的总黄酮,并以芦丁为标准品,用紫外分光光度法在265nm处测定各提取液的总黄酮含量。结果表明,甲醇浸提法和乙醇浸提法显著优于热水浸提法,而用70％乙醇为提取溶剂时效果最佳。研究结果可为利用蔓茎堇菜工业化生产黄酮类药用成分提供科学依据。     

蔓茎堇菜基因组DNA 3种提取方法的比较研究

以SDS作为解离剂,采用常规SDS法、改进的SDS法及SDS高盐低pH法分离提取蔓茎堇菜基因组DNA.比较3种方法的提取效果,结果表明：常规SDS法DNA得率高但完整性及纯度较差;改进的SDS法DNA质量好但得率相对较低;只有SDS高盐低pH法是最为理想的提取方法,不同组织提取的DNA相对分子质量均大于48 kb,260 nm/280 nm光密度比值在1.7～1.9之间,产率为479.0～543.9μg/g,所得DNA可直接用于限制性内切酶酶切,并适于进行RAPD分析.     

黄瓜香水、醇提取液对肠道菌群的调整作用的比较

目的研究不同溶剂提取黄瓜香有效成分的作用效果,以期能更好提高药物的利用度。方法用盐酸林可霉素制造小鼠菌群失调模型,然后分别用黄瓜香的水、醇提取物治疗,比较治疗效果。结果醇提取物和水提取物均能调整肠道菌群平衡,与自然恢复组相比差异有统计学意义(P0.05),且醇提取物组效果要优于水提取物组(P0.05)。结论黄瓜香醇提取物是理想的微生态调节剂。     

农杆菌介导单子叶植物基因转化研究进展

农杆菌介导基因转化系统是双子叶植物基因转化的普通而有效的手段, 其优点倍受重视,近年来又广泛用于曾被认为不在农杆菌宿主范围之内的单子叶植物的基因转化研究,并在很多重要粮食作物上获得成功,例如水稻、玉米、大麦、小麦等。本文就农杆菌转化的优点,转化机理以及对单子叶植物转化的研究进展作一概述     

农杆菌介导寒地水稻遗传转化的研究

通过农杆菌介导法,将拟南芥转录激活因子ICE1基因导入寒地品种垦鉴稻10号成熟胚愈伤组织中,将经潮霉素筛选得到的抗性愈伤进行分化,获得了一些再生抗性植株,部分植株经PCR检测为阳性,证明外源目的基因已整合到水稻的染色体上,从而建立了高效水稻遗传转化体系。实验表明:YEB和MS按适当比例混合作为悬浮培养基转化率较高;干燥除菌效果和转化率均优于羧苄青霉素、头孢霉素液体除菌;潮霉素采用低压-高压-低压方式筛选最好;AS和葡萄糖均能提高转化率。     

Ce(NH4)2(NO3)6对蔓茎堇菜悬浮细胞凋亡和总黄酮含量的影响

用DNA Laddering和DAPI荧光检测法对Ce(NH4)2(NO3)6诱导的蔓茎堇菜(Viola diffusa Ging.)悬浮细胞的凋亡情况进行研究,同时还测定了诱导过程中悬浮细胞的生长量和总黄酮含量。结果表明,Ce(NH4)2(NO3)6可诱导蔓茎堇菜悬浮细胞发生凋亡,1.0 mmol.L-1Ce(NH4)2(NO3)6胁迫诱导培养8 d时,细胞凋亡率最高(55.7%);总黄酮含量显著增加,达2.820%。表明Ce(NH4)2(NO3)6在诱导蔓茎堇菜悬浮细胞凋亡并抑制其生长的同时,还能促进黄酮类化合物的合成。     

根癌农杆菌介导的大豆遗传转化

农杆菌介导法是大豆遗传转化的重要方法之一 ,许多实验室应用该方法得到了转基因大豆 ,但目前使用该方法进行转化的效率还比较低 ,尚需深入研究。农杆菌菌株、大豆基因型、组织培养条件、T-DNA的转移效率和转化后的筛选模式都会影响大豆转化的效率。概述了近年来根癌农杆菌介导的大豆遗传转化的一些重要成果 ,以及转化过程中大豆的易感性与农杆菌的转化能力、乙酰丁香酮促进vir基因活化、转化的受体系统和巯基混合物减轻受体材料的褐化、提高T DNA的转移效率等几个重要因素的研究进展 ,并介绍了转化中常用的几个筛选标记基因 (nptⅡ、hpt、bar基因和突变的ahas基因 )及通过共转化法去除标记基因的方法 ,同时对今后研究的重点进行了讨论.     

农杆菌介导的水稻转Bt基因研究

通过农杆菌介导法 ,将Bt毒蛋白基因的一种—cryIAb基因导入 2个云南水稻栽培品种(滇系 4号 ,合系 39号 )的愈伤组织中 ,经过潮霉素筛选后 ,获得了一批抗性苗 ,部分苗经PCR检测为阳性 ,GUS组织化学染色分析发现Bt基因已整合到水稻基因组 ,并由此建立了一套有效的水稻遗传转化体系。实验中发现培养器皿的透气性对水稻愈伤组织的形成、生长具有较大的影响 ,提高培养基的渗透势能够提高愈伤组织的分化率。选择合适的洗菌液渗透势能够大大降低洗菌对愈伤组织所造成的损伤 ,从而提高转化率。