RNA干扰与基因敲除

RNAi是指通过双链RNA介导特异性降解靶mRNA,导致转录后水平基因沉默的现象。其作用途径有RdRP依赖的RNAi的途径与非RdRP依赖的RNAi途径2种。利用RNAi的基因敲除技术在dsRNA序列选择、质粒或病毒为载体的dsRNA体内合成、发夹样siRNA的转录、dsRNA的导入方法等方面取得了很大进展,在研究人类或其他生物基因组中未知基因及蛋白质的功能等领域具有诱人的应用前景。     

植物RNA沉默机制的研究进展

RNA沉默是真核生物中普遍存在的抵抗病毒复制表达、抑制转座子转座及调控基因表达的监控机制。植物中的RNA沉默(转录水平的基因沉默PTGS)在RdRP的作用、transitive RNAi的双向延伸、沉默效应的系统性传播等方面与动物中有所不同,且植物中的内源性miRNA在数量和种类上也更具多样性。文中就以上方面及RNA沉默在植物中的应用进行了综述。     

RNA干扰机制的研究进展

RNA干扰(RNAi)广泛存在于各种生物体中,是参与细胞防御与分化调控的重要机制之一。RNAi的作用由双链RNA启动,通过在转录、转录后和翻译等多个水平上对同源基因表达的特异阻断和抑制来实现,清晰地阐明其作用机制将为功能基因组学、发育生物学,以及抗肿瘤、抗病毒的新策略研究提供重要的理论依据。本文综述了近年来有关RNAi机制的研究进展。     

转录后水平沉默与基因表达

基因沉默是1个非常复杂和普遍的现象。转录后水平的基因沉默是指转基因在细胞核里能稳定转录,细胞质里却无相应的稳定态mRNA存在的现象。它往往被称为共抑制、静息作用或RNA干预等。本文介绍了转录后水平的基因沉默现象的发现、分子机理和应用等方面的进展。提出了克服转录后水平基因沉默的一些对策。     

RNA干扰技术及应用的研究进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)介导的序列特异的基因沉默现象,RNAi效应具有高特异性和高效性的显著特征,能够在细胞和子代间传递.除诱导同源序列mRNA降解或阻止其翻译而使目的基因表达受阻的转录后基因沉默外,RNA干扰可通过组蛋白甲基化影响染色质结构、通过DNA甲基化在转录水平调节基因表达,在翻译水平调节机体发育,并作为基因组的免疫系统,使转座因子或重复序列区域异染色质化,有效抑制了转座子和重复序列之间的同源重组对基因组可能造成的破坏,使生物基因组在长期进化过程中能保持结构的完整性和遗传的连续性. RNA干扰以阻抑基因的表达来模拟基因敲除技术,为反向遗传学研究基因功能提供了一种快速和简便的方法.RNA干扰技术日趋成熟和完善,为人们迅速准确地分析基因功能提供了极为有用的工具,同时在临床应用和治疗肿瘤和癌症等方面也有着巨大的应用前景.     

dsRNA介导的RNA干扰

在多种生物中 ,外源或内源性的双链ＲＮＡ(ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄＲＮＡ ,ｄｓＲＮＡ)导入细胞中 ,与ｄｓＲＮＡ同源的ｍＲＮＡ则受到降解 ,因而其相应的基因受到抑制。这种转录后基因沉默 (ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ,ＰＴＧＳ)机制首先在线虫 (Ｃ .ｅｌｅｇａｎｓ)中得以证实。由于这是一种在ＲＮＡ水平的基因表达抑制 ,故也称为ＲＮＡ干扰 (ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒ ｅｎｃｅ) ,简称ＲＮＡｉ[1] 。随后发现 ,在各种生物 ,如果蝇[2 ] 、拟南芥菜[3 ] 、及小鼠[4] 等均存在ｄｓＲＮＡ介导…     

RNA干扰：一种快速关闭基因的途径

RNA干扰是双链RNA分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达的过程，发现于植物、线虫。最近在哺乳动物细胞中也获得了满意的结果，这对研究哺乳动物，尤其是人类基因的功能将提供帮助。     

RNA干扰的研究进展

RNA干扰是指外源双链RNA进入细胞后引起与其同源的mRNA特异性降解的现象,它是真核生物在长期进化中形成的一种保守的防御机制,对真核生物有着重要的意义,它参与真核生物抵御病毒侵染、阻断转座子的异常活动,调控基因表达。RNA干扰已成为一种进行基因功能分析的强有力的工具,并有望成为最有潜力的基因干预治疗方法。     

RNA干扰与技术

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA诱导的、序列特异的基因沉默机制。它是自然存在于植物、线虫和果蝇中抵抗外来基因(包括病毒、转座子)入侵的方式。在哺乳动物细胞中,能够人工诱导RNA干扰,沉默有同源序列基因表达。这一新技术具有特异性、高效性。因此,正被用来研究人类基因组的功能、肿瘤和抗病毒感染等。     

Clinical advances of siRNA therapeutics

Small interfering RNA (siRNA) enables efficient target gene silencing by employing a RNA interference (RNAi) mechanism, which can compromise gene expression and regulate gene activity by cleaving mRNA or repressing its translation. Twenty years after the discovery of RNAi in 1998, ONPATTRO? (patisiran) (Alnylam Pharmaceuticals, Inc.), a lipid formulated siRNA modality, was approved for the first time by United States Food and Drug Administration and the European Commission in 2018. With this milestone achievement, siRNA therapeutics will soar in the coming years. Here, we review the discovery and the mechanisms of RNAi, briefly describe the delivery technologies of siRNA, and summarize recent clinical advances of siRNA therapeutics.     

RNAi的作用机制及其在抗病毒领域的应用

RNA干扰是外源性或内源性双链RNA诱发的mRNA水平上的基因沉默机制。RNA技术具有高效性、特异性。最近将RNA干扰应用于许多病毒性疾病的治疗研究均取得了显著的基因沉默效果,为病毒的预防和治疗开辟了一条新途径。就RNA干扰作用机制及抗病毒效应作一综述。     

RNA干涉分子机制研究进展

RNA干涉（RNA interference,RNAi）是生物体内的一种通过双链RNA(dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制.双链RNA与同源mRNA互补结合而使特定基因失活,这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示.近来研究表明,21～25 nt的小干涉RNA（small interference RNA, siRNA）可介导哺乳动物细胞特异性基因沉默.RNAi具有高效性和高度特异性,可能成为关闭基因的新技术而在基因功能研究和疾病基因治疗中发挥重要作用.     

A novel approach for the construction of multiple shRNA expression vectors

The application of RNA interference (RNAi) as a research and therapeutic tool depends on its ability to silence genes in a sequence-specific manner. Recent studies have reported that the effective knockdown of genes can be achieved by multiple short hairpin RNAs (shRNAs) in a single vector. Moreover, this approach can depress several genes simultaneously. However, current methods for the construction of multiple shRNA vectors often suffer from vector instability and are time-consuming. Here, we describe a simple, quick and low-cost approach to construct a single vector expressing four shRNA sequences driven by four different promoters. Using this vector, we were able to improve the gene silencing efficiency and make it possible to silence four different genes simultaneously, further expanding the application spectrum of RNAi, both in functional studies and therapeutic strategies.