琼脂糖凝胶电泳

Ⅰ琼脂糖凝胶 琼脂糖凝胶电泳是在卧式电泳装置上进行的,因为:(1)它为低浓度的琼脂糖凝胶提供了较好的支持体系,(2)在电泳过程中较少发生扭曲,(3)所得的DNA带比较直。最容易操作的凝胶体系,是将琼脂糖凝胶完全浸没在电泳缓冲液之下约1毫米     

AST同工酶的琼脂糖凝胶电泳NBT显色法

分布于细胞内线粒体及细胞质中的天门冬氨酸氨基转移酶(AST·EC·2·6·1·1)是人血清中含有的两种同工酶,分别称为AST-m和AST-c同工酶.AST-c电泳迁移率介于血清α-球蛋白与β-球蛋白之间.AST-m电泳迁移率相似于γ-球蛋白,琼脂糖凝胶电泳固蓝B染色法对m-AST检出率较低.用NBT显色法则可得到较好效果.     

琼脂糖凝胶电泳技术

九、碱性琼脂糖凝胶 科学家们认为,琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的一种极好的方法。这种技术操作简单,快速,并且还能解决在密度梯度离心中所存在的DNA片段不能充分分离的难题。此外,还能直接确定凝胶中DNA的位置:其方法是先用低浓度的能发荧光的具有插入本领的染料(溴乙锭),对胶中DNA条带进行染色;然后,把电泳胶置于紫外光下进行直接检测,其灵敏度可达1毫微克(ng)。     

第13届国际生物奥林匹克竞赛(2002)实验试题(2)

(续 2 0 0 3年第 3 8卷第 4期第 60页 )实验Ⅲ　　分子生物学实验考试时间是 60min ,40分试题 :质粒pXDNA片段的琼脂糖凝胶电泳分离和pX质粒限制性内切酶酶切图谱分析。实验室老师严格依下述的实验室安全规则和准确的操作给予你 5分。A—在实验时戴手套B—在使用电源和正确使用紫外分析灯前向老师说明C—正确使用移液器D—在凝胶的样品槽中全量装好样品E—没有损坏凝胶注意 :3～ 4位学生使用 1个电源 ,2位学生使用 1个紫外分析灯 !　　在实验时请戴手套 !　　实验室老师依次提供电源 !　　技术说明原理电泳是分离带有电荷、有一定分子量…     

家蚕浓核病毒(山梨株)DNA的电子显微镜研究

最近所分离的家蚕浓核病毒(DNV)山梨株(Y-DNV)与最初在家蚕中发现的DNV伊那株在各种理化性质方面有所不同。从Y-DNV中提取的病毒DNA在琼脂糖凝胶电泳中出现二条带(DNA Ⅰ和Ⅱ)。用限制性内切酶处理这些DNA,其结果也明显不同。为了弄清这些现象,用电子显微镜对这些DNA分子进行研究。通过琼脂糖凝胶电泳分离的DNA Ⅰ和DNA Ⅱ都是双链线状分子,但DNA Ⅰ分子的长度略长。在电子显微镜下,二种DNA的构象没有差异,因此可以肯定DNA Ⅰ和DNAⅡ有不同的碱基序列组成。这在DNV中是罕见的,因为到目前为止所知道的所有DNV都只有4种结构蛋白。基于这种情况,在前一篇论文我们曾推测这些蛋白质可能是来自两种DAV,它们各自具有其中3种或4种结构蛋白。应当指出的是,Y-DNV的衣壳本身是由一种还是由二种结构所组成的还需要进一步的研究给予证实。因为Y-DNV的病毒直径很小,它不可能包含二种DNA(分子量分别为2.1×10~6d,和1.7×10~6d.)所以家蚕Y-DNV很可能是由二种相似但是不相同的DNV所组成的混合物。     

2002年普通高等学校招生全国统一考试(广东、河南、广西卷)生物

本试卷分第 卷 (选择题 )和第 卷 (非选择题 )两部分 ,共 15 0分。考试用时 12 0分钟。第 卷 (选择题 ,共 70分 )一、选择题 :本题包括 2 6小题 ,每题 2分 ,共 5 2分。每小题只有·一 ·个选项符合题意。1.生物体内的蛋白质千差万别 ,其原因 ·不可能是A.组成肽键的化学元素不同B.组成蛋白质的氨基酸种类和数量不同C.氨基酸排列顺序不同D.蛋白质的空间结构不同2 .下列细胞结构中 ,在普通光学显微镜下分辨 ·不出的是A.染色体　B.液泡　C.核糖体　D.叶绿体3.植物吸收矿质元素受内外因素的影响 ,下列叙述·错 ·误的是A.呼吸抑制剂可降…     

第11届国际生物奥林匹克竞赛(2000)实验试题(Ⅱ)

(续 2 0 0 1年第 2期第 44页 )实验三　动物解剖、形态和分类学参赛的同学 :这一实验包括 2个不同部分的试题 ,你可以任何一部分开始 ,30 m in以后转为第 2部分。仔细检查一下 ,保证让给你的这一部分试题卷纸符合你桌上的试题。在交换考试桌子时请跟随指导教师的引导。国家　姓名　代号试题 1.用它们的身体长度计算微小动物的生物量。目的 :·评估参赛者做生物学上的准备能力。·评估参赛者使用显微镜的能力。·评估参赛者在显微镜下测量的能力。·评估参赛者在 1个公式中使用已获得的结果的能力。参赛的同学 ,在你的桌上有 :载片、盖片、甘…     

2001年普通高等学校招生全国统一考试(广东、河南卷) 生物(1)

本试卷分第 卷 (选择题 )和第 卷 (非选择题 )两部分。第 卷 1至 6页 ,第 卷 7至 12页 ,共 150分。考试时间 12 0分钟。第 卷 (选择题 ,共 70分 )一 .选择题 :本题包括 2 6小题 ,每题 2分 ,共 52分。每小题只有 1·个选项符合题意。1.细胞质基质是细胞结构的重要组成部分 ,下列生物化学反应在细胞质基质中进行的是A.葡萄糖的无氧分解　　B.丙酮酸的氧化分解C.RNA的合成　　　　　D.各种消化酶的合成2 .肌细胞内运输氧的是A.血红蛋白　　B.肌球蛋白C.肌红蛋白　　 D.肌动蛋白3 .叶绿体和线粒体都是重要细胞器 ,下列叙述中 ·错 ·…     

λ DNA酶切片段与pUC19克隆载体的构建与鉴定

目的:构建λDNA片段/p UC19重组质粒并鉴定。方法:将克隆质粒p UC19和λDNA进行Hind III酶切、碱法提取质粒,琼脂糖凝胶电泳纯化鉴定、紫外分光光度测定,T4DNA连接酶切产物、冰Ca Cl2转化E.coli DH5α菌株使之成为感受态细胞、蓝白斑筛选法筛选并鉴定重组转化子。结果:1所提质粒p UC19电泳获得预期的3条带,经由标准DNA Markar比对准确,提取浓度满足酶切需要。2酶切质粒p UC19电泳获得预期的1条带,λDNA片段电泳获得的4条带,经由标准DNA Markar比对准确。3培养皿不同区域出现数量不等的蓝色、白色菌斑。结论:应用质粒p UC19可成功构建λDNA片段/p UC19重组质粒。经鉴定,该克隆载体能够导入菌株E.coli DH5α,转化效率较高。     

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测小麦基因组DNA RAPD扩增产物的方法学比较

通过20%(wv)的琼脂糖凝胶和5%(wv)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对小麦白粉病抗、感特性品种基因组DNA的RAPD检测结果表明:5%聚丙烯酰胺凝胶对线性DNA分子(01～20kb)和长度相差100bp以下的DNA分子的分离较20%的琼脂糖凝胶电泳效果好。因此,我们研究出了一项利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测小麦白粉病抗、感特性的新技术,在工作中建立了一种适合于检测小麦基因组DNA结构差异的电泳方法。该方法主要包括:(1)丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的新配比;(2)分离DNA片段的最佳凝胶浓度;(3)电泳条件;(4)脱色、漂洗、银染、显色过程。实验发现,该技术对于小麦白粉病抗、感特性检测中的小片段和长度相差100bp以下的线性DNAPCR扩增结果的分辨效果较好。应用该技术在抗感品种间已经发现了DNA水平上的差异。     

枯草芽孢杆菌基因片段的琼脂糖凝胶电泳分离I．色氨酸C基因片段的分离

限制性核酸内切酶EcoRl酶切枯草芽孢杆菌(Bactllus subtlis) SR 22的 DNA,用琼脂糖凝胶电泳分离了色氨酸C基因(trpC)的片段,位于凝肢柱的10—11厘米处。冷冻挤压回收该段的DNA,荧电光分光光度计直接测定回收液中DNA的含量。电泳后比电泳前trpC 转化活性提高了37.7倍。这一段DNA的平均分子量为5.1×106,trpC片段的纯度为9.3％。     

实验2 回收DNA限制性酶切片段

一、琼脂糖凝胶电泳洗脱回收 1.DNA经限制性内切酶消化后,琼脂糖凝胶电泳。在紫外灯下检测确定需要回收的DNA条带,用刀片将含此条带的凝胶切下。 2.透析袋里装满电泳缓冲液,将切下的凝胶条块装入透析袋,挤出多余的缓冲液,袋里只留下少量缓冲液且无气泡。 3.让透析袋里的凝胶切断面同电流方向垂直。透     

浙贝母根际土壤总DNA提取和纯化方法的比较

本研究通过对6种土壤总DNA提取方法(CTAB-SDS-冻融法、玻璃珠-SDS-酚氯仿抽提法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-SDS法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-溶菌酶法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-冻融法和UltraClean试剂盒法)和4种纯化方法(改进琼脂糖凝胶电泳法、2%聚乙烯吡咯烷酮-琼脂糖凝胶电泳法、PVPP层析柱法和低熔点琼脂糖电泳法)的比较,证明利用20 mmol/L EDTA(pH 7.5)预处理土壤后,利用CTAB-SDS-冻融法提取土壤总DNA并经改进琼脂糖凝胶电泳法纯化获得的浙贝母根际土壤总DNA的得率和纯度相对较高,达44.00 μg/g±2.65 μg/g土壤,可用于后续基于16S rDNA分析基础上的土壤微生物分子生态学的分析工作.     

一个体外构建的重组质粒——pCBI

构建了质粒pBR322和pCRI 的重组质粒——pCBI。已通过转化技术将其送入大肠杆菌,在含有四环素和卡那霉素的培养基中筛选了转化子。在细菌培养液内加入氯霉素使转化子中的重组质粒扩增。采用琼脂糖凝胶电泳法及水溶性两相抽提法纯化重组质粒。重组质粒pCBI 的电泳速度低于两个亲本质粒。用限制酶EcoRI 降解重组质粒,在凝胶电泳上看到两条带,它们的位置分别对应于pBR322线性DNA和pCRI 线性DNA。电镜观察到环状pCBI DNA 并测得其长度为5.77±0.30微米,折合分子量为(11.9±0.6)×10~6道尔顿。     

两类新型DNA质粒pSC1和pSC2的分离与观察

本文报道从一株啤酒酵母E4-2A分离到两类脱氧核糖核酸质粒pSC1与pSC2。经琼脂糖凝胶电泳分离质粒DNA分子,证明这两类质粒的分子量不同于已知的酵母2μmDNA质粒。电镜分析指出这两类新型核外DNA质粒的长度为0．91士0·12μm(pSCl)和0.48士0.10μm(pSC2),经计算分子量分别相当于1．9x106和1．0 x106。pSCI由共价闭环和开环两种构型组成,而pSC2仅有开环型。     

仙人掌多糖清除活性氧作用初探

从仙人掌中提取并纯化多糖,采用分光光度法在多种体系中研究了仙人掌多糖清除活性氧的作用,并用琼脂糖凝胶电泳法观察了该多糖对·OH导致DNA链损伤的抑制作用。结果表明,仙人掌多糖能够有效地清除O 2和·OH等活性氧,对·OH导致的DNA损伤具有良好的保护效果。     

限制性片段凝胶电泳

DNA琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳装置的设计有很多种。有些装置很容易用玻璃或有机玻璃制成,而且用这些简单装置可得到极好的结果(图1)。     

叶用甘薯的组培快繁(摘编)

植物材料、外植体 培养基 (ｍｇ·Ｌ- 1 ) 结　　果绿梗型和红梗型叶用甘薯 (Ｉｐｏｍｏｅａｂａｔａｔａｓ) ,由台湾引进。茎尖分生组织(1)初代培养基 :ＭＳ +ＴＤＺ0 .0 5 +ＩＢＡ 0 .1,3 %白糖 ;(2 )绿梗型增殖、生根培养基 :ＭＳ +ＴＤＺ 0 .0 2 +ＩＢＡ 0 .4,2 %白糖 ;(3 )红梗型增殖、生根培养基 :ＭＳ +ＴＤＺ 0 .0 1+ＩＢＡ 0 .2 ,2 %白糖。以上培养基中附加 6ｇ·Ｌ- 1 琼脂 ,ｐＨ值为 5 .8。光照时间 12ｈ·ｄ- 1 ,光照度 15 0 0～2 0 0 0ｌｘ ,培养温度 (2 6± 2 )℃。　　健壮种薯在室温 2 5℃以上进行催芽 ,当幼苗长到 3 0ｃｍ…     

RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳的优化及探讨

目的:优化RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳条件。方法:对实验器材进行彻底的RNase灭活处理;在原有电泳过程的基础上,增加预电泳、缓冲液液面的处理和制胶过程中未加入溴化乙锭等优化过程。结果:优化后的电泳不仅能验证总RNA的完整性,而且能鉴定RNA的分子大小。结论:优化的RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳法操作简单、省时、快速,RNA条带清晰、定位准确、无弥散及非特异条带。     

转座子Tn233(CH)缺失突变株特性的研究

将带有质粒pBR322::Tn233(CH)(抗药类型为Ap~rTc~rSm~rSu~rHg~r)的大肠杆菌C600ML(多聚酶Ⅰ温度敏感突变株)在非允许温度条件下培养时,分离到12株营养缺陷突变型,其中10株的抗药类型为Sm~rSu~rHg~r,经质粒DNA提取与琼脂糖凝胶电泳分析表明,除1株(突变型3号)仍有质粒DNA外,其它9株细胞中的质粒DNA已不复存在。在12株中另外2株的抗药类型为sm~rSu~r(突变型19号与41号),它们也仍旧带有质粒DNA,经质粒抽提与限制性内切酶分析表明,这3种质粒(分别称为pTD3,pTD19与pTD41)DNA分别比pBR322::Tn233(CH)少了一些相邻的限制片段,经计算,pTD3缺失了1.33kb,pTD19缺失了7.22kb,pTD41缺失了9.09kb。从质粒的遗传图上可以看出,这3株缺失质粒都保留了pBR322载体上的DNA复制点与Tn233(CH)上的转座基因(TnpA),但是Tn233(CH)与pBR322相连处的两个末端反向重复顺序中的一个已经缺失,实验表明它们可能都失去了转座功能。对这些自发产生的缺失变种在转座子演化上的意义进行了讨论。