乙型肝炎病毒X蛋白通过miR-122调节肝癌细胞增殖及细胞周期的研究

乙型肝炎病毒中的功能蛋白乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)在促进肝细胞恶性改变中起到重要作用,但目前HBx调控肝癌细胞生长的具体机制仍未完全阐明。miR-122是具有抑癌特性的一类miR,在乙肝相关肝癌中表达减少。为了研究HBx通过微小RNA(microRNA,miR)-122调节肝癌细胞增殖及细胞周期的作用,本研究培养肝癌HepG2细胞株并进行分组,NC组转染NC慢病毒载体、HBx组转染HBx慢病毒载体、HBx+NC模拟物组转染HBx慢病毒载体及NC模拟物、HBx+miR-122模拟物组转染HBx慢病毒载体及miR-122模拟物、NC模拟物组转染NC模拟物、miR-122模拟物组:转染miR-122模拟物。通过MTS法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,PCR检测miR-122表达量,western blot检测细胞周期蛋白G1(CyclinG1)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达量。结果显示HBx组细胞的OD值、细胞周期G2/M期比例及细胞中CyclinG1、XIAP、β-catenin的表达量均明显高于NC组(P0.05),细胞周期G0/G1期、S期比例及细胞中miR-122表达量均明显低于NC组(P0.05);HBx+miR-122模拟物组细胞的OD值、细胞周期G2/M期比例及细胞中CyclinG1、XIAP、β-catenin的表达量均明显低于HBx+NC模拟物组(P0.05),细胞周期G0/G1期、S期比例及细胞中miR-122表达量均明显高于HBx+NC模拟物组(P0.05);miR-122模拟物组CyclinG1、XIAP、β-catenin荧光素酶报告基因的荧光活性明显低于NC模拟物组(P0.05)。本研究结果充分说明HBx能够增强肝癌细胞的增殖活力及明显加速细胞周期,且该作用部分由miR-122的下调所介导。本研究首次阐明了HBx调节肝癌细胞生长的分子机制,也初步探明了具有抑癌活性的miR-122在肝癌细胞中可能靶向CyclinG1、XIAP、β-catenin等基因。     

Survivin反义寡核苷酸对人胆管癌QBC939细胞株凋亡增殖及survivin和cyclinD1表达的影响

目的:观察survivin反义寡核苷酸(Antisensc Oligodeoxynuleotide,ASDON)对人胆管癌QBC939细胞株凋亡增殖及survivin和cyclinD1表达的影响.方法:合成特异性靶向survivin ASODN,并将其转染QBC939细胞,流式细胞术观察survivin ASODN对QBC939细胞凋亡和增殖的影响;同时,应用免疫组化检测survivin ASODN对QBC939细胞中survivin和细胞周期素D1(cyclinD1)蛋白表达的影响.结果:ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),ASODN转染组细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05).ASODN组survivin和cyclinD1的蛋白表达明显低于对照组(P<0.05).结论:SurvivinASODN转染能诱导胆管癌细胞QBC939凋亡,抑制细胞增殖,并可下调survivin和cyclin D1蛋白表达.     

人乳头瘤病毒16 E6蛋白通过Wnt/β-catenin通路促进食管癌Eca109细胞增殖、迁移的实验研究

人乳头瘤病毒16(Human papillomavirus 16,HPV16)感染与食管癌的发生密切相关,HPV16编码的HPV16E6蛋白是主要的致癌蛋白,已经在宫颈癌细胞中被证实能够促进癌细胞的增殖、迁移,同时也可激活Wnt/β-catenin通路。但HPV16 E6蛋白对食管癌细胞增殖、迁移的调控作用及机制尚未阐明。为研究HPV16 E6蛋白对食管癌Eca109细胞增殖、迁移及细胞中Wnt/β-catenin通路的调节作用,本研究培养食管癌Eca109细胞并分组,空白对照组用不含药物及质粒的DMEM处理,空白pcDNA3.1组转染空白的pcDNA3.1质粒,HPV16 E6组转染HPV16 E6基因的pcDNA3.1质粒,HPV16 E6+XAV组转染HPV16 E6基因的pcDNA3.1质粒、同时加入β-catenin抑制剂XAV939;并检测细胞的增殖、迁移活力及细胞中增殖基因、迁移基因、Wnt/β-catenin通路基因的表达。结果显示,转染24h后,HPV16 E6组细胞的增殖活力、迁移活力以及细胞中c-myc、cyclinD1、bcl-2、HMGA-2、N-cadherin、Wnt2、β-catenin的蛋白表达量均明显高于空白对照组、空白pcDNA3.1组;HPV16 E6+XAV组细胞的增殖活力、迁移活力以及细胞中c-myc、cyclinD1、bcl-2、HMGA-2、N-cadherin、β-catenin的蛋白表达量均明显低于HPV16 E6组,Wnt2的蛋白表达量与HPV16 E6组比较无明显差异。本研究揭示,HPV16 E6蛋白能够促进食管癌Eca109细胞的增殖、迁移且该作用与激活Wnt/β-catenin通路有关。     

LncRNA MEG3通过抑制Wnt/β-catenin信号通路对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)人母系表达基因(Maternally expressed gene 3,MEG3)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:选取我院住院的OA患者和半月板损伤患者各40例,采用RT-PCR检测两组患者软骨组织和细胞中MEG3的表达。在OA软骨细胞中,转染si RNA-MEG3(si-MEG3)或过表达MEG3的慢病毒载体(LV-MEG3),采用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,RT-PCR和western blot检测PCNA、Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达。结果:OA患者膝关节软骨组织中MEG3的表达水平明显低于半月板损伤患者软骨组织(P0.05),同时OA软骨细胞中MEG3的表达水平明显低于正常软骨细胞(P0.05)。OA软骨细胞转染siMEG3后,细胞增殖能力和PCNA表达明显下降(P均0.05),G0/G1期细胞比例明显升高(P0.05),S期细胞比例明显下降(P0.05),细胞凋亡率明显增加(P均0.05)。低表达MEG3能够显著降低Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达水平(P均0.05),增加GSK-3βm RNA和蛋白表达水平(P均0.05)。在OA软骨细胞转染LV-MEG3后,细胞增殖能力和PCNA表达明显升高(P均0.05),G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),S期细胞比例明显增加(P0.05),细胞凋亡率明显减少(P均0.05)。高表达MEG3能够显著增加OA软骨细胞中Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达水平(P均0.05),降低GSK-3βm RNA和蛋白表达(P均0.05)。同时,采用XAV939阻滞Wnt/β-catenin信号通路能够显著逆转过表达MEG3对OA软骨细胞增殖和凋亡的影响。结论:MEG3在OA患者和软骨细胞中均显著低表达,并能够通过阻滞Wnt/β-catenin信号通路激活影响OA软骨细胞增殖和凋亡。MEG3可能成为OA治疗的重要靶分子。     

人巨细胞病毒感染通过Wnt/β-catenin通路抑制滋养细胞的增殖及侵袭

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)感染能够影响胎盘绒毛外滋养细胞的增殖、侵袭,进而参与病理妊娠的发生,但具体的机制尚未阐明.在真皮成纤维细胞中的研究表明,HCMV能够抑制Wnt/β-catenin通路.因此,为了观察HCMV感染通过Wnt/β-catenin通路抑制滋养细胞增殖及侵袭的作用,本研究培养了人绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo.研究分为对照组、HCMV组、HCMV+LiCl组细胞.对照组细胞用培养液处理,HCMV组细胞用含有3个感染复数(Multiplicity of infection,MOI)HCMV的培养液处理,HCMV+LiCl组细胞用含有3MOI HCMV及50mmol/L Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl的培养液处理.48小时后,采用MTS法检测细胞增殖,采用Transwell检测细胞侵袭,采用western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase 9,MMP9)、β-连环蛋白(β-catenin)和磷酸型糖原合酶激酶-3β(p-GSK-3β)的表达量.结果显示,与对照组细胞相比,HCMV组细胞的O.D490水平、侵袭数目及cyyclinD1、MMP2、MMP9、β-catenin、p-GSK-3β的表达量均降低(P＜0.05);与HCMV组细胞比较,HCMV+LiCl组细胞的O.D490水平、侵袭数目及cyclinD1、MMP2、MMP9、β-catenin、p-GSK-3β的表达量均增加(P＜0.05).以上结果表明,HCMV感染抑制人绒毛外滋养细胞的增殖和侵袭,且该作用与抑制Wnt/β-catenin通路有关.本研究阐明了HCMV感染通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而抑制滋养细胞增殖及侵袭的分子机制,为最终阐明HCMV先天感染的致病机理积累了有价值的研究资料.     

飞燕草素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌的机制研究

为研究飞燕草素对乳腺癌MDA-MB-231细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。免疫组化检测裸鼠乳腺肿瘤组织和肺组织转移瘤Ki-67及乳腺肿瘤组织蛋白水解酶超家族基质金属蛋白酶-7(matrix metallopeptidase 7,MMP-7)的表达水平;Western blot检测移植瘤Wnt/β-catenin通路β-联蛋白(β-catenin)、磷酸糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)及通路下游细胞周期相关蛋白cyclinD1、原癌基因c-myc和MMP-7的蛋白水平表达,体内外实验发现飞燕草素不仅能抑制裸鼠异种移植瘤生长及乳腺癌肿瘤组织和肺组织转移瘤Ki-67表达还可以明显降低乳腺癌MDA-MB-231细胞Wnt/β-catenin信号通路β-catenin和p-GSK-3β下游靶基因c-myc、cyclin D1和MMP-7蛋白的表达。本研究证实飞燕草素能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,发挥抑制乳腺癌的作用。     

乙型肝炎病毒X蛋白上调环加氧酶2表达促进肝癌细胞增殖的实验研究

乙肝病毒X蛋白（Hepatitis B virus X protein,HBx）高表达与乙肝相关肝癌的发病密切相关,但HBx发挥促癌作用的机制并不清楚。环加氧酶2（Cyclooxygenase,COX2）具有促进肝癌细胞增殖的功能,乙肝相关肝癌中COX2的表达增加且与HBx呈正相关,提示上调COX2可能是HBx促进肝癌细胞增殖的分子机制。为了阐明HBx是否通过上调COX2促进肝癌细胞增殖,本实验培养了肝癌HepG2细胞并分为对照组、转染pcDNA3.1-HBx质粒的HBx组、转染NC siRNA的si-NC组、转染NC siRNA及pcDNA3.1-HBx质粒的si-NC+HBx组、转染COX2 siRNA及pcDNA3.1-HBx质粒的si-COX2+HBx组。检测细胞增殖活力OD_490nm的水平,COX2、B淋巴细胞瘤2基因（BCL2）、生存素（Survivin）的表达量,前列腺素E2（英文名,PGE2）的含量。实验结果显示,HBx组的OD_490nm水平,细胞中COX2、BCL2、Survivin的表达量,培养基中PGE2的含量均高于对照...     

敲减FBXL20基因降低食管癌KYSE150细胞增殖

为了探究FBXL20(F-box and leucine rich repeat protein 20)基因对人类食管癌细胞株KYSE150的影响及机制,我们采用慢病毒转染技术,构建FBXL20基因的慢病毒载体,转染KYSE150细胞系;采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测细胞株中FBXL20基因m RNA和蛋白的表达量;采用Western blotting检测细胞株β-catenin、cyclin D1、c-myc的蛋白水平;采用CCK-8法检测细胞增殖能力;采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡。成功构建低表达FBXL20慢病毒转染KYSE150细胞后,与对照组(CON组)相比,低表达FBXL20组(FBXL20-RNAi组)的KYSE150细胞增殖能力显著降低,细胞被阻滞在G1期,凋亡能力显著增加,β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白水平显著降低。我们的实验证实FBXL20在人类食管癌中是一个致癌基因,通过激活Wnt通路促进癌症的发生和发展。     

东北刺人参falcarindiol制备及其抗结肠癌作用机制研究

为建立一种快速高效的falcarindiol(FAD)制备程序并探讨其抑制结肠癌细胞HCT-116增殖作用与调控细胞周期阻滞相关基因之间的关系。研究使用硅胶柱色谱富集及制备HPLC分离纯化得到了FAD单体,依据波谱数据鉴定其结构;采用MTS法检测FAD对结肠癌细胞HCT-116的细胞毒活性,运用流式细胞术、RT-qPCR以及Westernblotting法分别检测FAD对结肠癌细胞HCT-116周期影响、周期阻滞基因β-catenin、cyclinD1和c-myc的mRNA水平及蛋白表达的作用。结果显示建立制备HPLC方法可以较快速稳定地得到较高纯度的FAD。FAD对结肠癌细胞HCT-116具有明显的细胞毒活性,与HCT-116细胞作用24、48、72h的IC50值分别为8.1±1.4、4.6±0.5、3.2±0.4μmoL/L。此外,FAD将HCT-116细胞周期阻滞在G2/M期,且能够显著下调Wnt/β-catenin通路中的β-catenin、cyclinD1和c-myc基因的转录及表达。据此推断FAD可能是通过调节Wnt/β-catenin信号通路阻滞HCT-116细胞生长周期进而抑制其细胞的增殖来产生抗结直肠癌的作用。     

布洛芬对肝癌细胞HepG2增殖及wnt／β-catenin信号通路的影响

研究非甾类抗炎药布洛芬对肝癌细胞增殖和β-catenin信号通路的影响,探讨布洛芬影响肝癌细胞增殖的可能机制.体外培养HepG2细胞,MTT法检测不同浓度布洛芬分别作用24、48和96 h后细胞增殖情况;应用RT-PCR检测布洛芬处理HepG2 48 h后β-catenin、cyclin D1和c-myc转录水平的变化;western blotting检测布洛芬对HepG2中β-catenin1蛋白表达量的影响;免疫细胞化学法观察布洛芬处理组HepG2细胞β-catenin的亚细胞定位.结果表明0.7mmol/L的布洛芬处理细胞48 h后能明显见到细胞增殖受到抑制,抑制率达到53.8%,且抑制作用有时间、剂量依赖性:经布洛芬处理后细胞的β-catenin、cychn D1和c-myc转录也受到显著抑制;布洛芬处理组细胞β-catenin蛋白表达低于对照组;布洛芬处理后β-catenin在胞核中定位减少,胞浆定位增多.因此,布洛芬能抑制肝癌细胞的增殖,且随着处理时间和药物浓度的增加,其抑制作用逐渐增强,其抑制作用可能与调控β-catenin信号通路,影响β-catenin的表达和定位,调节下游相关靶基因的转录有关.     

siRNA抑制c-myc基因的表达对宫颈癌细胞增殖的影响

目的:利用siRNA(small interference RNA)技术研究c-myc基因的对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响.方法:依据Promega公司在网上提供的设计软件,设计针对c-myc基因的siRNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA.通过阳离子聚合物jet-SITM-ENDO将合成的siRNA转染入HeLa细胞,以未转染细胞以及错义序列siRNA-scr转染细胞为对照.用细胞计数法检测siRNA对HeLa细胞增殖的影响.流式细胞法检测细胞周期及蛋白表达的变化,RT-PCR法比较转染前后c-myc mRNA表达水平的变化.结果:细胞计数法结果显示,转染24h后c-myc基因siRNA明显抑制MCF-7细胞增殖,转染48h后,抑制效率稳定.c-myc基因siRNA转染后能有效地抑制HeLa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,siRNA转染组c-myc mRNA、蛋白的表达量明显低于空白对照组、错义序列组.结论:体外转录合成的siRNA可有效降低HeLa细胞c-myc基因的表达,抑制细胞增殖.     

STAT3反义核酸对HL-60细胞周期及c-myc mRNA表达的影响

实验分反义组、无义组、脂质体组、空白组,转染后,应用四唑盐（MTT）比色法分析细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR检测细胞中STAT3 mRNA和c-myc mRNA的表达。探讨STAT3反义寡核苷酸对白血病细胞HL-60细胞周期及c-myc的影响。STAT3 ASODN抑制HL-60细胞增殖呈时间和浓度依赖性;反义寡核苷酸作用后,G0/G1期细胞明显减少,S期细胞增多,细胞周期进程受到明显阻滞;反义寡核苷酸作用48h后细胞内STAT3mRNA及c-myc mRNA的表达水平下降,与各对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。STAT3 ASODN能够明显抑制HL-60细胞增殖,并能阻滞HL-60细胞于G0/G1期、并下调c-myc mRNA的表达。     

siRNA抑制c—myc基因的表达对宫颈癌细胞增殖的影响

目的：利用siRNA（small interference RNA）技术研究C-myc基因的对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法：依据Promega公司在网上提供的设计软件,设计针对C-myc基因的siRNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA。通过阳离子聚合物jet—SITM—ENDO将合成的siRNA转染入HeLa细胞,以未转染细胞以及错义序列siRNA—scr转染细胞为对照。用细胞计数法检测siRNA对HeLa细胞增殖的影响。流式细胞法检测细胞周期及蛋白表达的变化,RT—PCR法比较转染前后C-myc mRNA表达水平的变化。结果：细胞计数法结果显示,转染24h后c-myc基因siRNA明显抑制MCF-7细胞增殖,转染48h后,抑制效率稳定。c-myc基因siRNA转染后能有效地抑制HeLa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0／G1期,siRNA转染组c-myc mRNA、蛋白的表达量明显低于空白对照组、错义序列组。结论：体外转录合成的siRNA可有效降低HeLa细胞c-myc基因的表达,抑制细胞增殖。     

12a-羟基明杜西酮通过Wnt/β-catenin信号通路促进人肝癌细胞凋亡的作用研究

为了探讨化合物12a-羟基明杜西酮对人肝癌细胞系Hep G2增殖与凋亡的影响及其作用机制,本研究采用MTT法检测人肝癌细胞系Hep G2的增殖情况;应用流式细胞术检测细胞的周期分布、凋亡率和ROS水平;通过Western Blotting法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达情况。结果表明,化合物12a-羟基明杜西酮可抑制人肝癌细胞系Hep G2的增殖,其抑制率与作用浓度呈时间和剂量依赖性,24 h、48 h和72 h的IC50分别为(12.8±0.67)μmol/L、(8.8±0.43)μmol/L和(6.6±0.42)μmol/L;12a-羟基明杜西酮可剂量依赖性地(5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L)使Hep G2细胞阻滞在G2/M期(p0.05),同时可增加细胞凋亡率(p0.05),提高细胞内ROS水平(p0.05)。此外,12a-羟基明杜西酮对Hep G2细胞内总的、细胞质的和细胞核的β-catenin蛋白表达均有降低作用,这说明Wnt/β-catenin通路可能受到了抑制。进一步的研究结果也证实了上述推测:12a-羟基明杜西酮可使Dvl-2、Dvl-3、GSK-3β(p-ser9)、c-myc、survivin的蛋白表达下降,而使GSK-3(p-tyr216)、Axin-2的蛋白表达水平升高,对总的GSK-3β蛋白水平则无明显影响。上述结果表明,化合物12a-羟基明杜西酮可以抑制人肝癌细胞系Hep G2的增殖并诱导其凋亡,其主要作用机制可能与升高细胞内ROS水平和抑制Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路有关。     

食管癌组织中β-catenin、PTTG及c-myc的表达及其临床意义*

目的:探讨食管癌组织中β-链接素(β-catenin)、垂体肿瘤转化基因(PTTG)、原癌基因(c-myc)的表达及其临床意义。方法:将2015年6月至2017年6月期间新疆医科大学附属肿瘤医院手术切除的食管鳞癌标本98例作为观察组,同时切取癌旁正常黏膜组织标本98例作为对照组,观察两组β-catenin、PTTG、c-myc蛋白表达情况,对比观察组不同病理特征患者β-catenin、PTTG、c-myc蛋白阳性表达情况,并分析食管癌组织中PTTG与β-catenin、c-myc蛋白表达的相关性。结果:观察组β-catenin、PTTG、c-myc蛋白表达阳性率均显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组β-catenin、PTTG、c-myc蛋白阳性表达均与患者的TNM分期和淋巴结转移有关(P0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤直径以及分化程度无关(P0.05)。食管癌组织中PTTG与β-catenin、c-myc蛋白表达均呈正相关(P0.05)。结论:食管癌患者β-catenin、PTTG、c-myc蛋白表达阳性率较高,与患者的TNM分期和淋巴结转移有关,且PTTG与β-catenin、c-myc蛋白表达呈正相关,三者可作为早期诊断和评估食管癌预后的重要参考指标。     

FBXO31基因对宫颈癌细胞增殖的影响

为了探讨FBXO31在宫颈癌中的表达情况及其对宫颈癌细胞增殖的影响及其可能机制,本研究采用实时定量PCR法检测FBXO31在宫颈癌组织中的表达水平;MTT法检测Hela细胞增殖能力;流式细胞术检测Hela细胞周期分布;Western blotting检测Hela细胞FBXO31、β-catenin、CyclinD1和c-Myc蛋白的表达水平。研究结果表明,FBXO31在宫颈癌组织中表达明显下调(p0.05)。FBXO31过表达能够明显抑制宫颈癌Hela细胞增殖能力。与空载质粒组比较,过表达FBXO31组的G1期细胞数显著增加,S期细胞数明显降低(p0.05)。本研究还发现FBXO31过表达能明显下调β-catenin蛋白、cyclin D1和c-Myc蛋白水平(p0.05)。本研究结论表明,FBXO31基因在宫颈癌中低表达;过表达FBXO31基因可通过抑制Wnt/β-catenin通路从而抑制宫颈癌细胞增殖。     

c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞增殖的调节作用及机制

c-ski是成纤维细胞增殖的复杂调节子,它对中胚层来源的皮肤成纤维细胞增殖的作用还不清楚。在观察正常成纤维细胞周期c-ski表达的时相特点的基础上,通过体外转染c-ski,观察它对细胞增殖活性、细胞周期进展以及周期蛋白表达的影响。结果显示：c-ski mRNA表达在加入血清后开始升高,在细胞周期G,期的高峰期达到峰值,S期显著下降,在G2／M期维持在较低的水平：转染的c-ski可以以剂量依赖的方式增加细胞的增殖活性,并且可以逆转Smad3对细胞增殖活性的抑制作用;C-ski使成纤维细胞提前达到G0／G1期的最低点,进入S期：同时细胞G1期周期蛋白cyclinD的表达增加。这些结果表明：C-ski是皮肤成纤维细胞G1期的调节子,通过加快G1期进展促进增殖,抑制Smad3活性,促进cyclinD的表达可能与这一作用的分子机制有关。     

跑台运动和饮食控制对去卵巢肥胖大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察跑台运动和饮食控制对去卵巢肥胖大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、磷酸化-GSK-3β和GSK-3β蛋白表达的影响。方法:将48只3月龄雌性未孕SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组、去卵巢组、去卵巢运动组和去卵巢控食组。去卵巢运动组大鼠在去卵巢手术后的第3周开始进行为期8周的跑台运动训练,去卵巢控食组在去卵巢后的第三周开始进行为期8周的控食干预。干预结束后,腹主动脉取血处死各组大鼠,用电子天平秤量大鼠心肌重量,用Western blot方法检测心肌β-catenin、磷酸化-GSK-3β和GSK-3β蛋白表达。结果:与假手术组大鼠比较,去卵巢组大鼠体重、心肌重量显著增加,而心肌重量指数、β-catenin、磷酸化GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著降低(P0.05);与去卵巢组大鼠比较,去卵巢运动组大鼠在最后两周时体重显著降低(P0.05),心肌组织β-catenin、p-GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著升高,而去卵巢控食组大鼠体重、心肌重量、心肌重量指数和GSK-3β表达差异均无统计学意义(P0.05),但心肌组织β-catenin、p-GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著升高(P0.05)。结论:跑台运动和控食干均预均能激活去卵巢大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路。     

紫杉醇对大鼠颅内C_6胶质瘤细胞wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察紫杉醇类药物对大鼠颅内胶质瘤细胞中wnt/β-catenin信号通路基因和蛋白表达的影响,探讨wnt/β-catenin信号通路在紫杉醇治疗胶质瘤中的作用。方法通过预实验计算出紫杉醇IC50=6.04nmol/L,实验组中加入紫杉醇溶液终浓度6.04nmol/L,对照组加等体积培养液,温箱中作用48h后,采用RT-PCR法检测各组细胞c-myc基因表达,免疫组织化学法检测β-catenin蛋白表达。结果两组C6细胞中均检测出β-catenin蛋白和c-myc的mRNA表达,癌基因c-myc mRNA表达实验组较对照组明显下降(P0.05),而且β-catenin蛋白表达也较对照组降低(P0.05)。结论抑制细胞内β-catenin蛋白表达及癌基因c-myc的表达,从而阻断wnt信号转导通路,是紫杉醇类药物抗癌机制之一,研究紫杉醇对wnt/β-catenin信号通路的影响对提高其疗效有潜在的临床意义。     

5-氟尿嘧啶通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制骨髓基质细胞增殖

该研究探讨了5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)抑制人骨髓基质细胞HS-5增殖的可能机制,寻找改善化疗药物对骨髓基质细胞损伤的治疗靶点。实验分3组,对照组:常规培养; 5-FU组:常规培养基础上加入25μg/mL 5-FU;氯化锂(LiCl)+5-FU组:10 mmol/L LiCl预处理细胞, 6 h后加入25μg/mL 5-FU,各组培养48 h。EdU检测HS-5细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期, Western blot检测β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达, DCFH-DA荧光法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平, Western blot检测缝隙连接蛋白Cx43表达。与对照组相比, 5-FU组HS-5细胞增殖能力下降,细胞阻滞在G0/G1期,胞内ROS水平显著升高,β-catenin、 Cyclin D1、C-myc、Cx43蛋白表达下调。与5-FU组相比, LiCl+5-FU组HS-5细胞增殖能力回升,细胞G1期阻滞减轻,胞内ROS水平降低,β-catenin、Cyclin D1、C-myc、Cx43蛋白表达上调。5-FU可通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制HS-5细胞增殖,其作用机制可能与5-FU诱导细胞发生氧化应激,下调细胞间隙连接蛋白Cx43表达有关。