AFLP引物组合数量对准确研究竹子系统关系的影响

利用AFLP技术对26个竹子种类进行了多样性分析,以探索引物组合数量对准确研究竹子类群系统关系的影响。实验共随机选取10对AFLP引物,并对所得10组AFLP标记数据随机组合后进行Nei氏遗传距离/UPGMA聚类分析。每对AFLP引物扩增数据为一组,随着用于聚类统计的AFLP标记数据随机组合数量的增加,26个竹子种类的聚类关系趋向一致。这提示我们,在系统学研究中,足够数量的引物组合是获得供试材料间准确聚类关系的基础,应采用对各AFLP引物组合数据随机累加后进行聚类分析的方法,以聚类关系为标准来确定用于分析供试品种的最少引物组合数量。     

羊草种质基因组DNA的AFLP多态性研究

羊草是禾本科牧草之王 ,在当前我国西部生态建设和草原畜牧业发展中发挥着重要作用。用AFLP方法对2 7份我国不同地区分布的羊草 (Leymuschinensis (Trin .)Tzvel)材料进行了基因组DNA多态性分析 ,8对AFLP引物组合在 2 7个不同羊草基因型中共扩增出 5 37条带 ,产生出的DNA片段大小分布在 75bp - 5 30bp之间。其中单态性带 89条 ,占 16 .6 % ,多态性带 32 9条 ,占 6 1.3%。平均每对引物组合扩增的DNA带数为 6 6 .13,总的多态性比率为 78.84%。AFLP多态信息含量PIC值分布于 0 .0 - 0 .5之间 ,平均PIC值为 0 .2 16 ,出现的PIC最大值 (0 .5 )约占AFLP标记的 8.5 % ,说明羊草基因组DNA的多态性比较丰富。以 5 37个AFLP标记为原始数据 ,根据Nei和Li的方法对 2 7份羊草材料进行遗传变异和聚类分析的结果表明 :羊草种内有高频率的遗传变异发生 ,且与地理分布和生态环境密切相关 ;2 7份羊草不同基因型被划分为四大类群 ,不同类群相互间的遗传距离相对较大 ,在树状图中表现为较远的亲缘关系。对羊草种内遗传变异发生的原因和品种的形成进行了初步讨论。     

用RAPD和AFLP的方法对中国卤虫（Autemia）种及亲缘关系的研究

利用ＲＡＰＤ（随机扩增多态ＤＮＡ）和ＡＦＬＰ（扩增片段长度多态性）技术对不同种及种群卤虫的关系进行分析。１０１个随机引物对４种卤虫Ａ．ｆｒａｎｃｉｓｃａｎａ、Ａ．ｕｒｍｉａｎａ、Ａ．ｓｉｎｉｃａ和Ａ．ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃａ基因组ＤＮＡ进行扩增,平均每个种获得７５１条带,其中４５８条带为多态性标记,每个引物提供平均７．４个标记信息,聚类结果表明Ａ．ｓｉｎｉｃａ是不同于其他旧大陆两性生殖卤虫     

环境因子对竹子开花影响研究

四川雅安地区刺竹和水竹开花年(2001～2006年)1月均温分别高出未开花年(1985～2000年)和多年(1985～2006年)平均值0.29℃和0.225℃;7月均温分别高出未开花年和多年平均值0.958℃和0.697℃;开花年年降水量分别比未开花年和多年平均值少124.9 mm和90.8 mm.开花和未开花水竹林小生境生态因子的调查显示,处于阳坡、光照条件好的样地开花明显多于处于阴坡、光照条件较差的样地;林内温度和湿度与竹子开花显著相关,开花样地内早上9时和中午2时平均温度和湿度均比未开花样地高.表明充足的光照、较高的林内温度、湿度,干旱和气温的升高在一定程度上起到了诱导和促进竹子开花的作用.     

RAPD引物数量对施式巴鲵遗传多样性评估结果的影响

应用RAPD技术对神农架施式巴鲵居群内24个个体进行了遗传多样性分析,探讨引物数量对遗传多样性分析结果 的影响,结果表明:遗传多样性分析准确度与引物数量有关,引物数增加到30左右时,PPB(Percentageofpolymorphicbands)、 Shannon信息指数(Shannon′sinformationindex)、Nei′s遗传多样性指数(Nei′sgenediversity)变化趋于稳定。标准误分析表明, 引物数增加到25左右时,再增加引物,标准误变化很小。若要客观反映出个体之间的遗传变异关系,引物数应在25以上,多 态位点数应在250以上。     

采用随机引物组合对绞股蓝作RAPD分析及SCAR鉴定

为寻找简单、可重复的分子鉴定方法,对绞股蓝（Gynostemma pentaphyllum（Thunb．）Makino）新鲜品、药材干品及其混淆品乌蔹莓（Cayratia japonica（Thunb．）Gagnep）进行了鉴定。首先从2000余条10碱基的随机引物中筛选出20条,并以5条为1组随机分成4组,然后采用RAPD方法对7份不同来源的绞股蓝新鲜品进行扩增,对扩增得到的绞股蓝特征条带进行基因克隆、测序,分析序列特征,再设计特异性引物,最后．用绞股蓝新鲜品、药材干品及其混淆品乌蔹莓等样品进行PCR验证。结果显示：RAPD扩增能够得到7份绞股蓝新鲜品重复的共有特征条带;经基因克隆、测序并设计特异性引物后进行PCR验证,获得了绞股蓝特异序列扩增区域标志（Sequence—characterized amplified region maker,SCAR）。初步建立了区分绞股蓝及其混淆品乌蔹莓的分子鉴定标准,并首次将SCAR应用于绞股蓝分子鉴定中。     

利用SPSS与AFLP方法对双丰甜菜品种（系）间亲缘关系与系谱分析比较

作物育种必须调查植物学性状和生物学特征指标数据,来建立种质资源库,利用SPSS多元分析方法克服了传统植物学性状和生物学特征指标难以综合评价的缺陷,探讨利用SPSS统计分析软件对双丰系列甜菜品种（系）间亲缘关系与系谱进行准确性分析,除双丰2号品种块根产量、产糖量和株高三个主成分具有极值影响外,结果基本与亲本分析一致,可以作为亲缘关系与系谱分析的一种辅助工具;通过AFLP获得不同基因型品种的特征带和特征缺失带,表明AFLP技术在甜菜品种鉴定上的应用潜力。但AFLP也具有缺点,主要是标记是共显性的,不能完全区分某一位点是杂合体和纯合体,因而不能更好地估算种群遗传的变异,对种群遗传结构的分析不能提供更多的统计信息,相信随着AFLP分子标记技术的不断完善与发展,将与SPSS统计分析软件一起越来越广泛地利用在种群遗传和系谱分析中。     

东北梅花鹿居群内亲缘关系的AFLP指纹分析

用扩增片段的长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)标记分析研究了东北梅花鹿同一居群内27个个体的亲缘关系,并以此作为优良种鹿选育种的辅助手段。筛选出9对AFLP引物组合,用EcoRⅠ/MseⅠ双酶切,对27只东北梅花鹿基因组DNA进行AFLP检测,共获得15 169条扩增带,检测出多态性条带11 443,多态性比率78.43%,平均每对引物检测到1 271个多态性位点。群体内相似系数AFLP研究结果,平均为0.7841(0.6809-0.8648),27只鹿聚为Ⅰ和Ⅱ两大类群,Ⅱ大类群分为5组,说明该鹿群个体间有较丰富的遗传变异,且与人工定向选配种有关。Ⅱ-4组群体内相似系数最高,在0.82以上,个体之间遗传距离最小在0.1354-0.1563之间,与繁殖记录的亲缘关系基本一致。该研究表明AFLP指纹技术用于梅花鹿遗传多态性分析,品种鉴定及亲缘关系分析是可行的。     

红花玉兰与玉兰亚属几个种亲缘关系的AFLP分析

应用AFLP分子标记技术对红花玉兰与玉兰亚属几个种之间的亲缘关系,以及红花玉兰的分类地位进行了分析。9对引物对7个玉兰种的36个代表样株进行选择性扩增,共得到扩增谱带874条,其中多态性谱带635条。分析结果表明：各玉兰种间,红花玉兰与白玉兰、武当木兰的遗传相似度较高;玉兰亚属种间基于AFLP分析的聚类结果与形态学对种的划分基本吻合。红花玉兰不仅形态上与其它玉兰种有明显区别,AFLP分子标记也支持红花玉兰为一个独立的新种,多瓣红花玉兰变种与红花玉兰原变种为一个种。     

铲鲟微卫星引物对中华鲟的适用性研究

将21对铲鲟（Scaphirhynchus platorynchus Rafinesque)的微卫星引物在中华鲟（Acipenser sinensis Gray)基因组DNA上进行PCR扩增,14对（约占67％）引物得到了扩增产物,其中有10对（约占48％）表现为多态性,但只有2对（9．5％）引物SPl-100和Spl－168的多态性较高,且带型清晰,可直接作为分子标记应用于相关的研究,此外,对具有特异性扩增,但有Stutter band现象的4对引物的部分可分离PCR产物进行了回收和测序,并对其中的3对引物的序列进行了重新设计,最后得到两对可应用于中华鲟的引物As-100和Spl0-170b,研究结果表明,对相近种的微卫星引物进行优化设计来获得一个物种的微卫星引物是一条简捷有效的途径。     

银杏观赏品种遗传关系的AFLP分析

从64对EcoRⅠ／MseⅠ引物（其中MseⅠ引物为荧光标记物）中筛选出8对扩增产物多态性高、谱带清晰的引物,对来自美国、荷兰、日本、法国和我国的21个银杏观赏品种的遗传关系进行了研究。结果表明：8对引物共产生1117条谱带,229个特异位点（其中缺失带54条、单态带175条）,多态带983条,多态带的比例为88％;每对引物鉴别效率为100％。14个国外银杏观赏品种平均多态带的比例35．86％,7个国内品种平均多态带的比例31．51％。21个观赏品种之间相似系数为0．4899-0．8499。当相似系数为0．7300时,供试观赏品种可分为四类,来源地相同的品种并不单独聚成一类,中国和法国的品种分别属于其中的三类。根据对观赏品种的特异位点、相似系数、聚类结果等进行综合分析表明,‘塔形银杏’、‘垂乳银杏’、‘筒叶银杏’、‘大耳银杏’、‘斑叶银杏’、‘展冠银杏’、‘垂枝银杏’、‘沂源叶籽银杏’这8个品种是银杏观赏品种中的重要特异种质。     

木豆种质资源遗传多样性研究中的AFLP技术优化及引物筛选

以来自国际半干旱热带作物研究所(ICRISAT)的2份栽培木豆( Cajanus cajan)和1份野生木豆(Cajanus scarabaeoides)资源为试材,将AFLP技术体系在木豆资源研究上进行优化,并筛选出20对多态性高的AFLP引物组合,推荐用于将来的木豆种质遗传多样性分析.     

Genetic Relationships of Ornamental Cultivars of Ginkgo biloba Analyzed by AFLP Techniques

Eight primer combinations that produced clear and a large number of polymorphic bands were screened from 64 EcoR I/Mse I primer combinations (Mse I fluorescent labeled). The genetic relationships of 21 ornamental cultivars of Ginkgo biloba L. from the United States of America, Holland, Japan, France, and China were analyzed. These primer combinations produced a total of 1 119 bands, 229 specific loci (including 54 absent bands, and 175 monomorphic bands). Among them, 983 polymorphic bands (PPB), accounting for 88%, were detected. The percentage of identification per primer combination was as high as 100%. The average PPB of 14 foreign cultivars was 35.86% and the average PPB of seven domestic cultivars was 31.51%. Genetic similarity coefficient (SC) among all cultivars varied from 0.4899 to 0.8499, and all cultivars were divided into the four clusters when SC was set at 0.7300. The cultivars from the same origin did not fall into the same group. The cultivars from France and China were classified into three groups. According to the comprehensive analyses based on specific loci, similarity coefficient, and clustering results, eight cultivars ‘Fastigiata’, ‘Tit’, ‘Tubifolia’, ‘Daeryinxing’, ‘Variegata’, ‘Horizontalis, ‘Pendula’, and ‘Yiyuanyeziyinxing’ were considered to be important germplasms of ornamental cultivars of Ginkgo biloba.     

24个中外猪种(群)的AFLP多态性及其群体遗传关系

利用12对AFLP引物组合检测了19个中国地方猪种（群）,1个培育猪种和4个欧美引进猪种混合基因组DNA的遗传变异,根据AFLP分析结果计算了24个猪种（群）间的遗传相似系数,据此构建了UPGMA聚类关系图,结果表明,AFLP标记有着很高的多态检测效率（Ai),平均每个引物组合检测到17.3个多态标记,非常适合于猪种（群）遗传多样性分析和品种鉴定;中国地方猪种与欧美引进猪种间的遗传分化十分明显,两类猪群间的亲缘关系较远;南昌白猪与大白猪,铅山黑猪与玉山黑猪有着极近的亲缘关系,分别与其育成历史,地理分布和RAPD分析结果相一致。另外还对部分猪种（群）的聚类分析结果与其形态学,地理分布和现行分类情况不相一致的原因进行了探讨。     

Genetic Relationships Among 22 Taxa of Bamboo Revealed by ISSR and EST-Based Random Primers

Genetic relationships among 22 taxa of bamboo were evaluated using 12 inter simple sequence repeats (ISSR) and four expressed sequence tag (EST)-based random primers, resulting in amplification of 220 loci. The grouping of species based on Jaccard's similarity matrix using UPGMA and principal coordinate analysis agreed with earlier published reports on molecular phylogenetic studies in bamboos with few deviations. In the dendrogram, however, species of one genus were placed in different clusters along with members of other genera. This calls for correct taxonomic delineation at the genus and species level using both vegetative and reproductive characters and correlation of molecular data with morphologically definable taxonomic groupings at the proper taxonomic level.     

A Study of Genetic Variation and Relationships within the Bamboo Subtribe Bambusinae using Amplified Fragment Length Polymorphism

Taxonomic and systematic studies of the woody bamboos are traditionallybased on floral morphology, which can cause problems in identificationdue to the lack of, or infrequent, flowering. Limited studieshave been conducted using molecular techniques to overcome thisproblem. In this study, we used amplified fragment length polymorphisms(AFLPs) to conduct a study of four genera of bamboos (Bambusa,Dendrocalamus, Gigantochloa andThyrsostachys ) in the subtribeBambusinae. AFLP analysis using eight primer combinations wascarried out on 15 species of bamboo. Results showed that AFLPsdistinguish the different species by their unique banding patterns.Unique AFLPs were detected in 13 of the 15 species examined.The six Bambusa species examined separated into two clusters.The sixGigantochloa species studied formed a discrete clusterdiverging from one of the Bambusa clusters, whileThyrsostachyswas less similar to the Bambusa clusters. The similarity indexbetween B. lako and G. atroviolacea was the highest, suggestingthat B. lako is more appropriately included within the genusGigantochloarather than the genus Bambusa. The two Dendrocalamus speciesexamined were very different with D. brandisii clustering withinone of the Bambusa clusters and D. giganteus appearing as avery distant species. These results support the contention thatcritical study of the genus Dendrocalamus is required. The useof AFLPs for identification of particular bamboo species, aswell as for the study of relationships within the subtribe,will be useful for industrial purposes and for systematic studies.Copyright 2000 Annals of Botany Company Bamboo, Bambusinae, Bambusa, Gigantochloa, Dendrocalamus, Thyrsostachys, AFLP, diversity, AFLP markers     

红花玉兰种质资源遗传多样性初探

采用AFLP分子标记对目前仅发现在湖北五峰狭域分布的红花玉兰种质资源的遗传多样性进行了研究.用10对引物对6个居群的43个个体进行了选择性扩增,共检测到623个有效位点,其中多态位点595个.结果表明:在物种水平上,红花玉兰的遗传多样性水平很高,多态位点百分率达95.51%,Nei s基因多样度(HT)为0.211 0±0.028 6;红花玉兰的遗传变异主要存在于居群内,居群间的遗传分化较小.AMOVA分析表明总变异的93.37%存在于居群内,居群间的变异只占总变异的6.63%.Nei s遗传分化系数(GST)为0.191 9,居群间基因流(Nm)2.105 5.鉴于红花玉兰总体遗传多样性水平很高,而居群数目及居群内个体数量均很少,应该对红花玉兰各居群的所有个体实施及时的就地保护,并对其生境进行保护;并在原产地营建基因保存林,营建时应加大各居群内的取样数量,使得红花玉兰较高的遗传多样性得到保存;同时积极开展异地引种栽培,使红花玉兰在观赏应用中得到切实的保护.     

香蕉种质遗传多样性与亲缘关系的AFLP分析

应用AFLP技术,对60个栽培蕉和野生蕉种进行了遗传多样性分析及分类研究。在相似系数0.62的水平上将供试的60份蕉类植物分为4个群体;在相似系数0.64的水平上将栽培蕉划为两个类群;在相似系数0.83的水平上将香牙蕉类群划分为6个亚群;认为传统地将Cavend ish亚群分为5个类别的分类依据与基因型之间并无严格的对应关系。将Saba归入ABB群体;吊罗矮蕉和北大矮蕉2号很可能是同一品种;国家果树种质广州香蕉圃收集的小米蕉、63-1与华农香蕉园种植的小米蕉、63-1均属同名异物情况。