人输卵管粘膜凝集素受体表达的研究

研究正常、妊娠及慢性炎症三种状态下输卵管粘膜凝集素受体表达及其相互关系。应用免疫组织化学ABC方法,以六种生物素化的凝集素为探针,对以上三种状态下的输卵管粘膜凝集素受体进行标记。结果表明PNA.UEA－1.SJA的表达在分泌期比增生期为强;妊娠时输卵管壶腹部粘膜DBA、PNA、SJA表达比分泌期为强,而UEA－1表达比分泌期减弱;慢性输卵管炎粘膜凝集素受体的表达与输卵管妊娠时接近或相同。提示：月经周期中输卵管粘膜凝集素受体的表达受雌激素及孕激素的调节;输卵管妊娠时的表达除受雌孕激素的影响外,还可能与着床时胚泡的局部作用有关;慢性输卵管炎易致输卵管妊娠的因素之一,可能与输卵管粘膜凝集素受体的改变有关。     

FSH促进牦牛输卵管上皮细胞分泌输卵管特异性糖蛋白的研究

为在胚胎共培养过程中添加相关激素提高哺乳动物胚胎发育的研究提供理论依据,本研究探讨了促卵泡生成素(FSH)对牦牛输卵管上皮细胞分泌特异性糖蛋白的影响。体外分离培养牦牛输卵管上皮细胞,并在细胞中添加不同浓度的FSH,作用6 h后运用荧光定量PCR分析输卵管特异性糖蛋白mRNA的表达水平,并用细胞免疫标记对其分泌输卵管蛋白的部位进行分析。结果显示,FSH的浓度为0.5-5.0μg/m L时,输卵管蛋白的表达量随着FSH浓度的上升而增加,在5.0μg/m L的FSH作用后,输卵管蛋白的mRNA表达量最高;浓度超过10.0μg/m L时,输卵管蛋白基因的表达量降低。结果表明,FSH具有促进输卵管上皮细胞分泌输卵管特异性糖蛋白的作用,且具有剂量依赖性,其最佳作用浓度为5.0μg/m L,输卵管蛋白主要由细胞质分泌。     

β-Tubulin在正常及妊娠输卵管组织中的表达

目的探讨β-tubulin在正常及妊娠输卵管组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法和图像分析技术检测正常输卵管及妊娠输卵管组织中β-tubulin的表达,并分别比较增生期与分泌期、分泌期与妊娠输卵管组织中β-tubulin的平均光密度。结果正常输卵管组织β-tubulin的表达分泌期明显强于增生期;妊娠输卵管组织中β-tubulin的表达比分泌期明显减弱。差异均有显著性(P<0.05)。结论β-tubulin在妊娠输卵管组织中的低表达可能是输卵管妊娠的影响因素。     

输卵管妊娠时输卵管壁肥大细胞的研究

目的　探讨肥大细胞在输卵管妊娠中的数量变化及其与血清性激素的关系。方法 :取输卵管妊娠时的输卵管及月经周期的增生期、分泌期和正常宫内早孕时的输卵管 ,常规石蜡切片 ,用甲苯胺蓝染色法显示肥大细胞 ;用酶免疫分析法检测输卵管妊娠患者、正常育龄未孕妇女 (增生期和分泌期 )及正常宫内早孕妇女血清雌二醇和孕酮水平。结果 :输卵管妊娠患者血清雌二醇和孕酮水平均高于正常育龄未孕妇女 (增生期和分泌期 ) ,低于正常宫内早孕妇女 ,四组间两两比较差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ;肥大细胞主要分布于输卵管肌层 ,其数量变化为 :输卵管妊娠组较增生期和分泌期这两组均少 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ,而增生期和分泌期这两组肥大细胞数量变化不明显 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;两例正常宫内早孕时的输卵管壁肥大细胞数量明显比输卵管妊娠组多 ,与增生期和分泌期这两组比较 ,肥大细胞数量变化不明显。结论 :1 人输卵管壁内肥大细胞的数量不受血清性激素水平的影响。 2 输卵管妊娠时肥大细胞数量减少     

输卵管素(Oviductins)的研究进展

一类具有广泛结构多态性的输卵管特异的糖蛋白———输卵管素,可与卵子的透明带和着床前胚胎相联系。本文综述了这种糖蛋白的合成、分泌、进化上的保守性及其在受精和早期胚胎发育过程中的重要作用。     

输卵管素（Oviductins）的研究进展

一类具有广泛结构多态性的输卵管特异的糖蛋白－输卵管素,可与卵子的透明带和着床前胚胎相联系。本文综述了这种糖蛋白的合成,分泌,进化上的保守性及其在受精和早期胚胎发育过程中的重要作用。     

克服早胚发育阻断的兔输卵管因子“DPF-1”的初步研究

兔64 kDa输卵管蛋白(DPF-1)具克服小鼠早胚发育阻断的作用。进一步分析的结果表明DPF-1的等电点介于7.2-8.1;其合成与分泌对雌激素或孕激素无明显依赖性,能穿越透明带,紧密附着在早胚细胞膜周围。借助于Western blotting分析法,发现DPF-1的分布具组织专一性,仅存在于输卵管,而新西兰白兔子宫、卵巢、肝脏、心脏、肺、脾脏、骨骼肌、小肠和脑等组织中皆未发现;在所检测的小鼠和金黄田鼠输卵管中,也显示出DPF-1相关分子,小鼠的为71 kDa和32 kDa输卵管蛋白,金黄田鼠的为68 kDa和49 kDa输卵管蛋白。值得注意的是,以DPF-1主动免疫的雌性小鼠,经交配,输卵管中的44.8%早胚发育遭阻断,提示DPF-1在克服早胚发育阻断并实现由母型向合子型基因调控过渡的过程中可能起决定性作用。     

β-tubulin在输卵管妊娠着床部位与非着床部位的表达

目的探讨β-tubulin在输卵管妊娠着床部位与非着床部位的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法和图像分析技术检测正常输卵管分泌期、输卵管妊娠着床部位与非着床部位β-tubulin的表达。图像分析技术检测各组输卵管粘膜上皮组织中的β-tubulin表达的平均光密度值,并分别比较正常输卯管分泌期与输卵管妊娠非着床部位、输卵管妊娠非着床部位与着床部位粘膜上皮中β-tubulin表达的差异。结果输卵管妊娠非着床部位β-tubulin的表达弱于正常输卵管分泌期;输卵管妊娠着床部位β-tubulin的表达弱于非着床部位。差异均有显著性（P〈0．05）。结论β-tubulin的低表达可能是引起人输卵管妊娠的因素之一。     

兔输卵管液和血清中维生素A,D,E含量的比较

输卵管液是由输卵管粘膜上皮细胞分泌和输卵管血管渗出的混合液。人和浦乳动物的输卵管液除维持输卵管内渗透压和调节pH值外,还对生殖细胞的进一步成熟、受精、受精卵的卵裂和运输有极其重要的作用。输卵管液内含有水、无机盐、糖、蛋白质和各种氨基酸。有些内含物质还和动物的性周期有关。但有多种生理功能和生殖功能的维生素A、D、E在输卵管液中的含量未见报道。我们采用荧光分析法对不同性周期兔输卵管液中和血清中维生素A、D、E的含量进行了测定与比较。     

推进早期胚胎发育正常调控过渡的输卵管细胞因子的初步研究

本研究对勉输卵管上皮细胞分泌蛋白的特征及功能能作了初步研究和分析。ＲＯＳｓ分子量介于１３５－４４ｋＤ,可分为３组,其中第２,３组为酸性糖蛋白。经糖苷酶消化,第３组ＲＯＰＳ显著地降解为分子量接近３０ｋＤ的蛋白。利用制备的抗总ＲＯＰｓ多抗以及针对不同分子量ＲＯＰ的抗血清,分别进行功能分析发现,Ａｒｏｐ－Ｔ和Ａｒｏｐ－Ⅰ能使受精卵发育完全阻断．     

兔输卵管蛋白具有组织特异性而没有种属特异性

哺乳动物输卵管为配子的最终成熟、配子的运输、受精及早期胚胎发育提供了一个独特的、适宜的环境。可以推测：输卵管粘膜上皮细胞分泌的某些蛋白参与了这些过程。有证据表明：输卵管粘膜上皮细胞分泌因子与克服发育阻断作用的现象“相关”。而且,这些因子在功能上无种属专一性。我们刚进一步表现：输卵管因子能克服早期胚胎发育阻断。通过纯化兔输卵管上皮细胞分泌蛋白,制备针对各种不同蛋白组份的多抗血清,进行抗体封闭实验。结果表明：抗64kD输卵管蛋白（DPF－1）多抗血清能完全阻断体外早期胚胎的正常发育,阻断率达100％。另外,鼠DPF－1抗血清的用量与小鼠早期胚胎体外发育阻断率呈一定的剂量效就关系。In vivo抗生育实验,即通过主动免疫雌性小鼠,亦证实DPF－1具有克服早期胚胎发育阻断的作用。尺经免疫的雌性小鼠,怀孕后检查发现,近半数的早期胚肥发育均遭阻断,这就进一步表明了DPF－1在克服早期胚胎发育阻断并实现由母型向合子型调控过渡过程中的作用。为了深入研究DPF－1的理化特性和生物学行为,本文对DPF－1进行了初步纯化,并制备了DPF－1单抗。选择、性、雌性新西兰白兔经自然发情、交配后,17小时处死。取出输卵管上皮细胞、洗涤,于CB741－A(鞠血清、无蛋白、无次黄嘌呤培养液）中培养48小时后收集培养液,离心,取上清液（即为条件培养液）。调pH,酒精沉淀。离心,将收集的蛋白作10％SDS－PAGE分离,KCL负染后,切取64kD蛋白（DPF－1）条带。以此为抗原,免疫BALB／C小鼠,按常规方法合脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞,经过ELISA初步筛选和Westernblotting再次筛选,最终获两株小鼠抗DPF0－1单抗,并对它们进行了鉴定（Table1)。两种抗体均为IgM类型;专一识别DPF－1条带;接种于BALB／C小鼠腹腔之后,腹水滴度均达1：1,000,000。经Western blotting分析发现：DPF0－1具有组织特异性而没有种属特异性。在所检测的新西兰白免中,DPF－1仅存在于输卵管中,而肾脏、卵巢、大脑、心脏、骨骼肌、子宫、脾脏、肝脏和小肠等组织中均未发现（Fig.1);在所检测的小鼠和金黄田鼠输卵管中,也显示含有DPF－1相关分子,小鼠有7kD和32kD两种,金黄田鼠有49kD和68kD两种（Fig.2)。我们试将DPF－1单抗初步应用于检测方面。结果表明：亲和力、灵魂度、重复性和专一性方面均令人满意。DPF－1单抗的制备对DPF－1的分离纯化和研究提供了有力的工具。     

鸡输卵管上皮细胞体外分离培养的研究

鸡输卵管上皮细胞是卵清蛋白的主要分泌细胞,是研究输卵管特异表达蛋白调控的重要工具。在以往的研究中,多采用普通DMEM培养液对鸡输卵管上皮细胞进行分离与培养,容易造成其自身特性在体外培养过程中的改变。本研究我们优化了细胞分离方法,发现从输卵管漏斗部组织分离的输卵管上皮细胞增殖较快;用鸡输卵管上皮细胞培养基相比DMEM更适合促进细胞生长;与胰酶相比,用Accutase消化酶进行细胞传代,有利于输卵管上皮细胞特性维持。对所获得的输卵管上皮细胞鉴定发现,己烯雌酚能促进卵清蛋白的表达,说明分离培养的细胞保持了鸡输卵管上皮细胞特性。本研究建立的方法为输卵管特异表达蛋白调控以及家禽生物反应器的研究奠定了基础。     

克服早胚发育阻断的兔输卵管因子“DPF—1”的初步研究

兔６４ｋＤａ输卵管蛋白（ＤＰＦ－１）具克服小鼠早胚发育阻断的作用。进一步分析的结果表明ＤＰＦ－１等电点介于７．２－８．１;其合成与分泌对雌激素或孕激素无明显依赖性,能穿越透明带,紧密附着在早胚细胞膜周围。借助于Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析法,发现ＤＰＦ－１的分布具组织专一性,仅存在于输卵管,而新西兰白兔子宫、卵巢、肝脏、心脏、肺、脾脏、骨骼肌、小肠和脑等组织中皆未发现;在所检测的小鼠和金黄     

鸡输卵管上皮细胞瞬时表达系统

在开发利用生物反应器生产特定蛋白的研究中,若先用特异组织作原代培养,建立瞬时表达系统,对特定调控元件和融合基因进行分析,可大大缩短研究进程。本文首次报道用鸡输卵管上皮细胞原代培养,建立瞬时表达系统的方法。输卵管细胞体外培养（Fig.1-3),在二,三周时间内仍然保持分泌卵清蛋白的功能,当分泌功能减弱时,若地培液中添加激素,一般一周后大部分细胞又可恢复分泌功能（Fig.4),由于卵清蛋白是一种分泌蛋白,通过斑点免疫渗滤法可迅速简便的从培液中检测到（Fig.4)。为 验证培养细胞能否表达外源基因,在原代培养细胞中转染绿色荧光蛋白基因,可在细胞浆中显示绿色荧光（Fig.5)。说明这是一个有效而又方便的检测调控元件的瞬时表达系统。     

黄喉水龟繁殖期输卵管组织结构的变化的研究

本文研究了黄喉水龟在繁殖期输卵管组织结构变化,得到如下结果：１．黄喉水龟输卵管组织结构由浆膜、肌层、粘膜三层组成。２、将输卵管人为分成上、中、下三段时,上段管壁最薄,中段较厚,下段最厚、肌层发达。３．排卵时,因粘膜上皮纤毛和肌肉收缩活动,将卵向泄殖腔方向推送。４．中段腺体细胞所含分泌颗粒多,表明此段比上段代谢旺盛。     

沙眼衣原体感染后大鼠输卵管糖蛋白的变化

目的：研究沙眼衣原体（chlamydial trachomatis,CT）感染后,输卵管粘膜的结构及糖蛋白的变化。方法：60只成年Wistar雌性大鼠随机分为实验组和对照组,实验组单侧卵巢囊接种沙眼衣原体E型株,对照组接种2SP代替沙眼衣原体,分别于接种后第0.5、7、14天取材,在光镜下观察输卵管的结构变化,并采用PAS-Alcian blue染色显示输卵管内糖蛋白组分的变化。结果：对照组输卵管粘膜结构和糖蛋白组分无明显变化;实验组输卵管受损部位主要局限于粘膜层,PAS-Alcian blue染色显示沙眼衣原体感染可导致中性糖蛋白分泌减少。结论：沙眼衣原体的感染可使输卵管糖蛋白组分发生改变,这可能与反复感染的宫外孕、输卵管性不孕的发生有关。     

兔输卵管上皮细胞解除大鼠早期胚胎发育阻滞的研究

本研究利用兔输卵管上皮细胞,与异种动物大鼠的受精卵共培养,结果大量出现突破２细胞发育阻滞的现象。体外受精卵和体内受精卵的２细胞发育阻滞突破率分６２％和７３％;利用ＲＯＥＣ条件培养液培养大鼠的体外受精卵,２细胞发育阻滞的突破率达６８％,且能顺利发育至桑椹胚和囊胚。将ＲＯＥＣ直接培养在含＾３５Ｓ－甲硫氨酸的ＣＺＢ培养液中,经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影,发现在该条件培液中出现了分子量分别为１     

黄喉水龟繁殖期输卵管组织结构变化的研究

本文研究了黄喉水龟在繁殖期输卵管组织结构变化,得到如下结果：１．黄喉水龟输卵管组织结构由浆膜、肌层、粘膜三层组成。２．将输卵管人为分成上、中、下三段时,上段管壁最薄,中段较厚,下段最厚,肌层发达。３．排卵时,因粘膜上皮纤毛和肌肉收缩活动,将卵向泄殖腔方向推送。４．中段腺体细胞所含分泌颗粒多,表明此段比上段代谢旺盛。     

兔输卵管上皮细胞解除大鼠早期胚胎发育阻滞的研究

本研究利用兔输卵管上皮细胞(ROEc), 与异种动物大鼠的受精卵共培养,结果大量出现突破2细胞发育阻滞的现象。体外受精卵和体内受精卵的2细胞发育阻滞突破率分别为62%和73%;利用ROEC 条件培养液培养大鼠的体外受精卵,2细胞发育阻滞的突破率达68%,且能顺利发育至桑椹胚和囊胚。将ROEC直接培养在含~(35)S-甲硫氨酸的CZB 培养液中,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影,发现在该条件培液中出现了分子量分别为135Kd,68Kd,55Kd,51Kd 和44Kd 由ROEC 分泌的多肽,其中68 Kd 区带最显著,而135 Kd区带非常弱。用(125)~I-酰化剂标记示踪发现,与ROEC 共培养24 h 的大鼠胚胎透明带上含有68Kd 蛋白,并发现55 Kd 蛋白与透明带结合的痕迹。这些蛋白很可能就是胚胎发育调控由母型向合子型过渡并突破早期发育阻滞的关键因子,在功能上似无种属特异性。     

绿蟾蜍繁殖期间输卵管变化的组织学研究

本文研究了绿蟾蜍繁殖期间输卵管组织结构变化的规律。产卵前，输卵管壁最厚，固有层中的单管状腺充满胶质；产卵时，粘膜层形成细长的皱襞，固有层中的腺体分泌胶质，形成包裹卵子的卵胶膜；产卵后，输卵管壁变薄，腺体细胞缩小，但腺体间的结缔组织隔膜增厚，结缔组织可能对腺体细胞的修复起重要作用。