干扰素

1957年,Isaacs等在研究流感病毒的干扰现象时,将灭活的流感病毒与鸡胚绒毛尿囊膜块一同培养,再用活的流感病毒攻击,发现病毒繁殖被抑制。说明灭活的流感病毒作用于细胞后,细胞产生了一种干扰病毒繁殖的物质,当时称此物质为干扰素。     

流行性乙型脑炎病毒皮下感染小白鼠后脑组织中抑制物质的初步观察

继Issacs&Lindenmann二氏发现用灭活的流感病毒处理鸡胚绒毛尿囊膜能产生干扰素以来,已证明若干人类病毒在组织培养系统或动物亦能产生干扰素或类干扰素(病毒抑制物质)。其中包括大病毒(如牛痘病毒)和小病毒(如脊髓灰白质炎病毒);含DNA的病毒和含RNA的病毒。这说明病毒引起细胞产生这种抵抗感染发展的物质的性能是很普遍的。然而,关于流行性乙型脑炎病毒干扰素尚未见有报告。     

A型流感病毒非结构蛋白的功能及临床应用

NS1蛋白作为A型流感病毒的非结构蛋白,最初的研究着重于它对宿主细胞蛋白质合成的抑制作用方面考虑.随着研究的深入,对其基因的进化、蛋白质的抗原性作了详细的研究,同时发现流感病毒的NS1蛋白与流感病毒所诱导的细胞凋亡之间存在一定的联系,其对凋亡的调节作用与流感病毒感染的细胞是否产生干扰素及其所感染的细胞系直接相关.NS1蛋白能够抑制病毒感染细胞干扰素的产生,在流感病毒拮抗干扰素的抗病毒效应中发挥了重要的作用,许多研究表明,这种干扰素拮抗作用可能与流感病毒的毒力有关.由于传统疫苗的广泛应用,NS1蛋白在临床应用中作为鉴别诊断免疫禽和自然感染禽的检测抗原具有广阔的前景.     

短期重复口服鸡α干扰素体内抑制H9N2亚型流感病毒复制

为研究口服鸡α干扰素最佳的给药频率及与灭活病毒联合使用对鸡群的影响,文中将构建的原核表达质粒pET-22b-ChIFN-α转入大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3),宿主菌经诱导表达收获重组包涵体蛋白,经变性、纯化、复性后获得重组鸡α干扰素。SDS-PAGE结果分析显示,目的蛋白可在原核表达载体中高效表达,发酵液上清中目的蛋白浓度高达0.2 mg/mL,分子量约为20 kDa。将鸡α干扰素稀释至活性为2.5×10~4 U/羽份,与灭活H9N2亚型流感病毒联用以口服的方式免疫无特定病原(SPF)鸡群,试验结果表明,短期(96 h)重复免疫3次,鸡α干扰素具有较好的安全性,可诱导鸡群的外周血、脾脏及胸腺产生较高水平的抗病毒相关的诱导基因,攻毒结果显示鸡α干扰素使用次数为连续使用3–5 d鸡群排毒率最低,体现出较好的抗流感病毒能力。本研究结果获得了鸡α干扰素的最佳免疫频率及免疫时间,为干扰素的最佳临床应用方法提供理论支撑。     

干扰素的生产及其临床应用

<正> 干扰素-来源于细胞的一种糖蛋白,能影响许多种细胞和病毒的生长过程。1975年Isaacs和Lindenmann发现了干扰素,他们证实:细胞在受到传染性的或是灭活的流感病毒侵袭后,细胞会产生和分泌一种能够抑制病毒繁殖的物质-干扰素。自从干扰素发现之后,就有人想要把它用于治疗病毒性疾病,不过只是到近来部分精制的干扰素制剂才能在数量上满足必要的临床试验。 最近的临床研究已经证明:系统的给予干扰素时对一些病具有显著疗效;诸如慢性活动性肝炎、接受免疫抑制治疗的带状疱疹患者(免疫抑制患者)。疤疹性结膜炎在局部清创术同时并用干扰素加速治疗及抑制病毒感染。局时应用大剂量干扰素对实验性鼻病毒感染具有保护。干扰素对于免疫抑制儿童发原性水痘、狂犬病、骨肉瘤、和其它肿     

流行性乙型脑炎病毒灭活程度与诱发产生干扰素能力间的关系

1．本文报告了乙型脑炎病毒经56—58℃或37℃加热灭活和福尔焉林灭括后,接种鸡胚单层捆胞不能产生干扰素,不表现有自家干扰现象,而只有当灭活材料残留有活病毒 时才能分离到干扰素。 2．由于乙型脑炎病毒经加热灭活后丧失其产生干扰素和引起自家千扰的能力,以及结合干扰素对温度稳定性的特性,这就为采职加热灭活处理此类病毒干扰素提取方法提供了依据。达一方法较pH2透析法快速、简便。     

甲型流感病毒感染过程中干扰素介导的天然免疫应答机制

甲型流感病毒作为引起人类和动物急性呼吸道传染病的一个主要病原体,在世界范围内广泛流行。研究表明,甲型流感病毒感染宿主后会诱导宿主的天然免疫应答。甲型流感病毒感染可引起Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)和RIG-Ⅰ样受体(RIG-Ⅰ like receptors,RLRs)等宿主模式识别受体介导的抗病毒信号通路的活化,并在多种机制调控下诱导干扰素和其他细胞因子的表达,如Ⅰ型干扰素、Ⅲ型干扰素等,从而启动干扰素刺激基因(Interferon stimulated genes,ISGs)的转录及其抗病毒蛋白的表达,进而实现抗病毒作用。本文就甲型流感病毒感染与干扰素介导的天然免疫应答相关的信号通路和调控机制进行综述。     

流感病毒RNA与其多聚酶在试管内重建感染性颗粒的研究

1．本文报道用从流感病毒部分提纯的无感染性的KNA,与从病毒感染的鸡胚绒毛尿囊膜的部分提纯的无感染性多聚酶体系,在试管内重建成为具有感染性的颗粒。将其接种于鸡胚羊膜腔可导致完整病毒的增殖。 2．重建材料的感染性与流感病毒KNA在实验范围内于高渗缓冲液中透析以及在90℃加热时间有关,时间较长者,感染性也较高。于反应系统中加入用DOC裂解的病毒制品,也可提高感染性。加入DEAE-葡聚糖则无明显作用。 3．对试管内重建的感染性颗粒进行了电镜观察。初步阐明了蛋白质在流感病毒生命话动过程中的重要作用。     

IFN α2b抗流感病毒的作用

用流感病毒攻击小鼠建立动物模型,观察了重组干扰素α2b抗流感病毒的作用。小鼠采用滴鼻和腹腔注射途径分别给予40μL干扰素α2b,取40μL致死剂量(LD50)流感病毒攻击小鼠,观察IFNα2b抗流感病毒的效果。结果显示,干扰素可提高小鼠生存率。可见干扰素具有抗流感病毒的作用。     

细丝蛋白A通过活化Ⅰ型干扰素信号通路抑制H5N6流感病毒复制

H5N6 A型流感病毒(influenza A virus, IAV)是严重危害公共卫生安全的新发人兽共患病病原,其复制和致病的科学问题需进一步深入研究.细丝蛋白A(filamin A, FLNA)是一种多功能的肌动蛋白结合蛋白,其可作为细胞信号转导中的支架蛋白,广泛参与细胞内的多种重要生物学过程,但其在流感病毒感染与免疫过程中的作用尚未见报道.前期深度测序分析发现H5N6流感病毒感染细胞后可显著下调FLNA的表达水平,而FLNA过表达能够显著抑制流感病毒在细胞中的复制,并且可以活化Ⅰ型干扰素信号通路.通过siRNA或抑制剂阻断Ⅰ型干扰素下游信号通路之后, FLNA对流感病毒复制的抑制作用消失.以上结果表明, FLNA可以通过活化Ⅰ型干扰素信号通路来抑制H5N6流感病毒在细胞中的复制.本文阐明了FLNA蛋白在流感病毒复制过程中的作用,发现了FLNA参与细胞天然免疫反应的新功能,同时为抗流感病毒药物研发提供了理论依据和研究思路.     

动物遗传工程

921143对流感病毒具有胞内免疫性的转基因小鼠〔英〕/A rnheitcr,H.…了Cell(Cambridge)一1990,62(1)一51一61二译自ANI,1991,3(4),3503〕 已产生了在干扰素反应调节片段控制下表达胞内抗流感病毒蛋白M对的转基因小鼠。用流感病毒侵染时,高反应品系小鼠在病毒复制起始位点处产生Mxl蛋白,限制病毒扩散并抗其侵染。低反应品系小鼠,则病毒扩散范围宽,且只能抗大剂量病毒侵染。为了抗低剂量病毒侵染,需同时给小鼠注射干扰素。_匕述结果表明,流感病毒的致病性是由侵染病毒剂量与抗病毒寄主因子Mxl浓度间精确的平衡决定的,通过种系转化获得的…     

蛋白转导域研究进展

蛋白转导域(PTDs)是小分子多肽,又称为细胞渗透性蛋白(CPP)或转膜序列(MTS),它可以不依赖于经典的细胞内吞,将多种大分子物质导入细胞内。因此,PTDs被认为是一种理想的运载工具,在将蛋白和其他分子导入活细胞的研究中有着广泛的应用前景。本文着重综述PTDs的跨膜转运机制及其应用等方面的研究进展。     

自我失活型逆转录病毒载体在衰老基因转录调控中的应用

以自我失活型逆转录病毒载体pSIR为基础,构建了含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的载体pSIR-EGFP和含有870bp p16启动子载体pSIR-EGFP-870.将两种病毒载体转染至包装细胞包装成病毒颗粒.病毒感染2BS靶细胞,病毒5′LTR在逆转录过程中自我灭活.通过该系统观察到p16启动子在2BS细胞衰老过程中,转录活性明显增强.结果表明,自我失活型逆转录病毒载体能很好地用于衰老基因转录调控的研究.     

A型流感病毒非结构蛋白NS1与宿主相互作用的研究进展

作为A型流感病毒的非结构蛋白,NS1蛋白是流感病毒的一个重要的毒力因子,决定了病毒在宿主细胞内的破坏作用。概述了NS1蛋白对宿主细胞蛋白合成、宿主细胞凋亡的影响,及其拮抗干扰素的作用。     

DNA shuffling技术提高干扰素比活性的研究

DNA shuffling技术可以定向进化干扰素,获得比rhIFN-α2b标准品更高比活的干扰素.rhIFN-α2b基因与Infergen基因用DNaseI酶切成30-50 bp小片段,回收之后进行无引物PCR 重聚和有引物PCR扩增基因.将重组基因连接到载体pUC19中,转化至DH5α并挑选阳性克隆测序.将测序正确的突变基因连接到载体pET30a中并转化至BL21（DE3）中,然后诱导蛋白表达、SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot分析.经过表达细胞诱导、细胞裂解、包涵体变性、复性和单克隆抗体亲和层析之后,获得高纯度的重组干扰素.经测定纯化后的重组干扰素比活达到5.8×108IU/mg,比rhIFN-α2b标准品高出5倍左右.实验结果证明此实验方法对提高干扰素的比活是有效的,可以获得比标准品更高比活的干扰素.     

自我失活型逆转录病毒载体在衰老基因转录调控中的应用

以自我失活型逆转录病毒载体pSIR为基础，构建了含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的载体pSIR-EGFP和含有870bp p16启动子载体pSIR-EGFP-870.将两种病毒载体转染至包装细胞包装成病毒颗粒.病毒感染2BS靶细胞，病毒5′LTR在逆转录过程中自我灭活.通过该系统观察到p16启动子在2BS细胞衰老过程中，转录活性明显增强.结果表明，自我失活型逆转录病毒载体能很好地用于衰老基因转录调控的研究.     

热休克蛋白27增强A型流感病毒NS1对β干扰素的抑制作用

热休克蛋白27(Heat shock protein 27,HSP27)是一种具有多重功能的小热休克蛋白,它在一些病毒的生命周期中也发挥着重要作用。为研究HSP27对流感病毒感染的调节作用,首先在原核及真核细胞中克隆并表达了人源的HSP27蛋白,并验证了HSP27和A型流感病毒NS1蛋白能够相互结合。通过荧光素酶检测试验发现,HSP27可以抑制病毒感染细胞中β干扰素(IFN-β)的表达,但不依赖于其自身的磷酸化状态,而且HSP27与NS1共同对于IFN-β的表达具有叠加抑制效果。进一步的结果表明HSP27可能通过RIG-I样RNA解旋酶(RLH)途径中MDA5因子抑制IFN-β的表达。研究表明,HSP27在被感染细胞的天然免疫中发挥一定作用,有助于进一步阐明宿主因子对于流感病毒感染的调节机理。     

流行性感冒病毒M2蛋白可溶性表达及其免疫原性的研究

流行性感冒（流感）的M2蛋白是其保护性抗原之一,在几科所有甲型流感病毒中高度保守,因此可以用来研究具有交叉保护能力的流感疫苗。然而M2分子在病毒颗粒中含量非常少,用从病毒中纯化的方法很难获得足够的免疫原。在原核表达时发现,M2蛋白对宿主菌具有很强的毒性作用,导至其死亡,因此很难获得高表达。在本研究中,采用RT－PCR方法从病毒感染的MDCK细胞中克隆了A1／PR／8／34毒株的M2基因,然后通过基因工程手段缺失了M2蛋白的跨膜区26－55位氨基酸的编码序列,将其克隆以pET-32a中,与硫氧还蛋白融合,在大肠杆菌中获得了高效表达,并且表达产物以可溶形式存在,不形成包涵体。利用硫酸铵盐析结合金属离子鏊和柱亲和层析的方法纯化了表达的融合蛋白。免疫荧光实验表明,融合蛋白免疫小鼠后产生的抗血清能够与流感病毒感染的细胞发生特异性的结合,证明表达产物具有流感病毒M2蛋白的抗原性。     

血管内皮细胞生长因子受体Flt-1胞外区基因的克隆及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

从原代培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)提取细胞总RNA,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法得到VEGF受体Flt-1胞外区前3个IgG样区域cDNA片段(Flt-1n3).将获得的受体基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,得到重组质粒pcDNA3.1/Flt-1n3,通过脂质体转染方法将其转入中国仓鼠卵巢细胞(CHO),用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆.经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆,细胞测活结果表明,表达产物具有抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的活性.鸡胚测活结果表明,CHO细胞表达的r Flt-1n3能抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成.     

呼吸道病毒和干扰素对正常人淋巴细胞环磷酸腺苷产生的影响

将流感病毒和副流感病毒、α和β干扰素作用于正常人外周血淋巴细胞后,发现病毒和干扰素可明显降低正常人淋巴细胞内经异丙肾上腺素刺激后的环磷酸腺苷(cAMP)含量,但不影响淋巴细胞内基础cAMP含量。病毒和干扰素的这种抑制作用,可能是由于病毒和干扰素影响了淋巴细胞β受体的功能所致。