盾叶薯蓣中薯蓣皂甙元提取新工艺的研究

为研究新工艺提取盾叶薯蓣薯蓣中薯蓣皂甙元的最佳实验指标,以薯蓣皂甙元得率为评价参数,采用6因素5水平的正交实验,用分光光度法对25种提取方法所得到的薯蓣皂甙元进行比较分析。结果表明,硫酸浓度对薯蓣皂甙元提取的影响最大,在实验室条件下,可采用20g样品加甲醇回流提取4h,回流速度为10min／次,用2．5mol／L的硫酸水解6h,120号溶剂汽油回流提取2h,回流速度为15min／次,能清洁快速提取盾叶薯蓣中的薯蓣皂甙元。     

盾叶薯蓣中薯蓣皂甙元不同提取方法的比较

为提高盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis C.H.Wright)中薯蓣皂甙元得率,在实验室条件下,以薯蓣皂甙元含量为评价指标,采用4因素4水平的正交试验,用高效液相色谱法对16种提取方法所得的薯蓣皂甙元含量进行了比较分析.结果表明,硫酸的浓度对薯蓣皂甙元含量有极显著影响,在实验室条件下,可采用10 g样品加2.0mol·L-1硫酸200 mL水解4 h,水解物用石油醚回流提取5 h,能快速准确提取盾叶薯蓣中的薯蓣皂甙元.     

RP-HPLC法测定盾叶薯蓣细胞中薯蓣皂甙元的含量

本文采用KromasilC - 18柱 (2 5 0× 4 6mm ,5 μm ) ,甲醇∶水 =95∶5流动相 ,流速 1 0mL/min ,UV检测器 ,检测波长 2 0 8nm ,对培养的盾叶薯蓣细胞中的薯蓣皂甙元含量进行测定 ,能将薯蓣皂甙元与杂质分离开 ,薯蓣皂甙元在 3 876～ 19 38μg范围内峰面积与其浓度线性关系良好 (R =0 9993) ,样品平均回收率为97 83% ,精密度RSD为 0 2 1% (n =4 )。该法测定样品快速准确 ,重复性好     

粉背薯蓣中甾体皂甙元的分离和鉴定

粉背薯蓣(D.collettii Hook f.var.hypoglauca Palibin)在我国野生资源丰富,分布较广,以华东地区的浙江、江西为多。丁志遵、唐世蓉,李德高等曾从该植物分离到约莫皂甙元,并对薯蓣皂甙元的含量进行了测定。国内一些生产厂反映用粉背著蓣提取的总甙元产品熔点偏低(184—187℃),不符合国内现行质量标准。为了进一步查明熔点偏低的原因以及粉背薯蓣能否用作薯蓣皂甙元的原料,我们对该植物中的甾体皂甙元进行了分离和鉴定。     

优化黄姜中甾体皂甙元测定的研究

对传统的黄姜中甾体皂甙元的测定方法进行了改进。提取甾体皂甙元时采用微量样品以氯仿浸提代替传统的回 流抽提法,以Liebemann-Barcharad试剂显色,用分光光度法测定。测定结果准确,高效低成本且步骤简单,应用广泛。     

薯蓣皂甙元ELISA定量分析方法的建立Ⅰ-薯蓣皂甙元全抗原的合成

建立薯蓣皂甙元的ELISA定量分析方法必须先合成薯蓣皂甙元的全抗原。试验利用薯蓣皂甙元3位上的-OH,在DMAP的催化下,薯蓣皂甙元与丁二酸酐反应,生成薯蓣皂甙元丁二酸单酯,用MSI、R1、H NMR1、3CNMR等方法对产物结构进行了表征。用混合酸酐法制备薯蓣皂甙元与牛血清白蛋白的结合物(DG-HS-BSA),碳二亚胺法制备薯蓣皂甙元与卵清蛋白的结合物(DG-HS-OVA),经TNBS测定,每分子结合物连接的薯蓣皂甙元分子数分别为28.0和8.8。     

薯蓣皂甙元的气液色谱分析

薯蓣皂甙元(diosgenin)是合成甾体激素药物的重要原料。它主要是从薯蓣属(Dioscorea)植物的根茎中提取的。测定植物材料中薯蓣皂甙元的含量通常采用重量法,操作繁琐费时,样品需量较大,不适宜大量样品的筛选。同时,由于操作条件掌握上的差异,容易造成较大的误差。六十年代以来,气液色谱(GLC)应用于甾体化合     

用微孔板分光光度法测定薯蓣皂苷元的含量

为了对植物样品中薯蓣皂苷元的含量进行高通量快速测定,本研究采用高压酸解制备薯蓣皂苷元,以高氯酸为显色剂,用微孔板分光光度法测定样品中薯蓣皂苷元的含量。合适的分析条件为:反应温度为30℃、高氯酸用量为200μL、振荡时间2 min后静置10 min,在410 nm处测定光吸收值。该方法的线性范围为每孔薯蓣皂苷元2～10μg(R=0.9988),平均回收率为99.9%,精密度的RSD为1.65%。该方法操作简单、准确稳定,可实现大批量样品中薯蓣皂苷元的快速检测。     

菊叶薯蓣生长发育的研究

一种原产墨西哥的提取薯蓣皂甙元（diosgenin)的重要原料植物菊叶薯蓣（Dioscorea composite Hemsl.),首次在我国西双版纳引种成功,试验结果表明,种子萌发以35℃最为适宜,种子千粒重达9克者,发芽率最高,可达90%以上,种子贮存期在3-4个月内,发芽率高而整齐,播种60天藤蔓开始有缠绕能力,可以移栽,移栽后12个月出现花蕾,开花结果,每年两次花果期,营养生长与生殖生长交驻沪进行,叶终年常绿,埠茎常年生长,产量逐年增加,栽培三年最高亩产鲜块茎5494公斤（按单株测产）。粗皂甙元含量3-4%（干样）。粗皂甙元重结晶一次溶点203-206℃,有利用价值。     

薯蓣皂甙元生产工艺研究进展

薯蓣皂甙元是一种重要的医药原料,本文阐述了薯蓣皂甙元生产过程中发酵时间,温度,酶预处理和水解的酸浓度,压力,时间对薯蓣皂甙元产率的影响,对其中的提取分离工艺废水的处理工艺进行了综述,并对薯蓣皂甙元生产工艺存在的问题和前景进行了分析。     

盾叶薯蓣悬浮培养细胞生长及薯蓣皂苷元合成

研究了盾叶薯蓣细胞悬浮培养过程中细胞生长、薯蓣皂苷元合成、蔗糖和磷酸盐的吸收利用以及酸性磷酸酶活性与薯蓣皂苷元合成的关系。结果表明,对数生长期细胞最大比生长速率μm为0.19 d-1;倍增时间为3.68 d;薯蓣皂苷元的形成与细胞的生长相关,培养6 d时薯蓣皂苷元质量分数和产量分别为0.20%和25.93 mg/L;蔗糖利用率达到95.65%,磷酸盐吸收率达到最大,为90.36%。盾叶薯蓣细胞悬浮培养过程中酸性磷酸酶活性动态变化规律与薯蓣皂苷元的动态合成规律基本一致。此外,研究还发现在相同供磷水平下,酸性磷酸酶活性高低与薯蓣皂苷元合成能力呈正相关;而在不同供磷水平下,酸性磷酸酶活性高低与薯蓣皂苷元合成能力没有相关性。     

从盾叶薯蓣组培苗中高压酸解制备薯蓣皂苷元

采用正交试验法对盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis)组培苗中薯蓣皂苷元的高压酸解制备工艺进行了研究。以薯蓣皂苷元的含量作为评价指标,选用正交表L16(45),以样品用量、硫酸浓度、提取时间为因素,设计了3因素4水平的正交试验。结果表明:高压酸解提取薯蓣皂苷元的最佳工艺条件为:样品用量25 mg、硫酸浓度0.5 mol/L、提取时间2 h,在此条件下提取物中薯蓣皂苷元的平均含量为9.12 mg/g。     

The best utilization of D. zingiberensis C.H. Wright by an eco-friendly process

An eco-friendly process for the best utilization of D. zingiberensis C.H. Wright tubers was developed. In the first stage, cellulose and ethanol were recovered by physical separation, multi-enzymes hydrolysis with yeast fermentation, and in the second stage diosgenin was separated using ethanol-modified supercritical carbon dioxide extraction. The new approach could not only recover 95% of diosgenin production, 95% of ethanol and 75% of cellulose, but also efficiently reduce 88% of COD in wastewater compared with the conventional method, which only extract diosgenin with discharging 80,000mg/l of COD into public sewers. The research indicates that the proposed system could be a clean and technological-efficient alternative to conventional processing of D. zingiberensis C.H. Wright tubers in industry.     

药源植物盾叶薯蓣甾体皂苷及皂苷元的研究进展

盾叶薯蓣是重要的甾体激素类药源植物,其根茎中薯蓣皂苷元含量居薯蓣属植物之冠,为我国的特有种。为了寻找高含量的资源、筛选新的生理活性成分,多年来我国学者做了大量的研究工作。主要概括了盾叶薯蓣的资源分布、薯蓣皂苷元的提取工艺、化学成分、药理、含量测定等方面的研究。     

镰刀菌诱导子对盾叶薯蓣离体培养物中薯蓣皂素合成的影响

研究了镰刀菌(Fusarium solani)诱导子对盾叶薯蓣离体培养物中薯蓣皂素合成的影响。结果表明:当培养基中诱导子糖含量达到30 mg GE/L时能使薯蓣皂素的含量明显提高;薯蓣皂素含量的最大值出现在镰刀菌诱导子处理后的第35 d,达到对照的2倍左右;盾叶薯蓣离体培养物PPO、SOD活性以及可溶性蛋白含量在添加诱导子后呈现一定的规律性变化。     

湖北薯蓣属植物资源

湖北薯蓣属植物有１４种,３变种,１亚种,属于块茎组的有７种,２变种,均含多量淀粉,不含薯蓣皂甙元。属于根状茎组的有７种,１变种,１亚种,除含淀粉外,都含有一定量的薯蓣皂甙元,其中盾叶薯蓣的含量最高,平均含量为３％,且其含量随生长环境而变化,由南向北呈递增趋势,盾叶薯蓣在湖北主要分布在宜昌地区,襄樊,神农架和郧阳地区,蕴藏量约３．５万吨。     

盾叶薯蓣环阿屯醇合酶全长基因的克隆与分析

环阿屯醇合酶(cycloartenol synthase,CAS)是薯蓣皂甙元生物合成途径中的第一个关键酶.以基因组DNA为模板,利用染色体步行和长距离PCR方法首次克隆了盾叶薯蓣CAS全长基因.序列分析比较结果表明,盾叶薯蓣CAS全长基因为7 192 bp,由18个外显子和17个内含子组成.外显子总长为2 280 bp,编码759个氨基酸,最长的外显子为198 bp,最短的为47 bp;内含子总长4 912 bp,最长的内含子为1 551 bp,最短的为68 bp.Southern blot杂交分析表明,CAS基因在盾叶薯蓣基因组中为单拷贝.     

盾叶薯蓣内生真菌及其对宿主培养物生长和皂苷元生产的影响

从盾叶薯蓣根状茎中分离并鉴定了9株内生真菌,经悬浮培养14d,分别制备灭活菌丝和菌液浓缩物。其中,内生尖孢镰刀菌Dzf17能有效地提高盾叶薯蓣无菌苗和培养细胞薯蓣皂苷元的含量和产率,且灭活菌丝的诱导效果要强于菌液浓缩物。Dzf17灭活菌丝处理无菌苗,薯蓣皂苷元的产率为78.697mg/L,是对照(27.471mg/L)的2.865倍;用Dzf17菌液浓缩物处理无菌苗,皂苷元产率为41.822mg/L,是对照的1.522倍。Dzf17灭活菌丝处理培养细胞,薯蓣皂苷元的产率为1.391mg/L,是对照(0.691mg/L)的2.013倍;用Dzf17菌液浓缩物处理培养细胞,皂苷元产率为1.214mg/L,是对照的1.757倍。结果表明,在盾叶薯蓣无菌苗或细胞培养中添加一定量的内生真菌灭活菌丝或菌液浓缩物对于提高薯蓣皂苷元含量和产量将是一种有效的方法。     

Identification and Isolation of Steroidal Saponins of Dioscorea zingiberensis Wright

Two diosgenin trisaccharides (A,B) and two furostanolic tetrasacharides of diosgenin (C, D) had been isolated from Dioscorea zingiberensis wright. By means of acetylation, acid hydrolysis, enzymolysis, IR, MS, 1H-NMR and 13C-NMR, saponin A was proved to be a new compound of structure: diosgenin-3-O- [ β-D-glucopyranosyl (1 → 2) ]-O- [ α-L-rhamnopyra- nosyl (1→3)]-O-β-D-glucopyranoside was provisionally named zingiberenin A; saponin B may be suggested as the steric isomer of gracillin; saponin C was identified as 26-O-β-D- glucopyranoside of A and saponin D as 26-O-β-D-glucopyranoside of B. The last two components named proto-zingiberenin A and proto-zingiberenin B respectively.