JMP定制实验设计优化胃癌患者PBMC分离方案

为探索胃癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)分离的优化条件,本研究用JMP10.0软件定制设计方法,研究离心时间、离心速度对PBMC离心厚度的影响,建立模型、刻画最优参数,验证并用台盼蓝染色观察优化条件下离心的PBMC细胞存活率。结果表明,离心时间、离心速度与PBMC厚度存在曲线关系,离心时间与离心速度的交互作用无统计学意义。预测模型的决定系数R2=0.88,预测值与实际值的一致性较好。刻画最优离心时间=10 min,离心速度=2 307 r/min,PBMC厚度预测值=2.596 923 mm,95%CI(2.342 13,2.851 71),验证离心的PBMC厚度=2.7 mm,细胞存活率=95%。本研究采用JMP定制设计方法优化PBMC离心条件,可为标准操作程序的建立提供基础。     

离心法分离毕赤酵母活细胞和死细胞

本文以毕赤酵母为研究对象,探索出一种分离活酵母细胞的新方法。研究发现,通过改变淋巴细胞分离液和50%聚蔗糖溶液的比例,获得不同密度的酵母细胞分离液,进而通过离心分层的方法可使毕赤酵母活细胞主要存留于离心液的上层。当酵母细胞分离液的密度为1.1467 g/mL (27.5%淋巴细胞分离液+72.5%聚蔗糖溶液),分离液上下层中酵母活细胞的分配比例差别达到最大,分别为94.67%(分离液上层)和5.33%(分离液下层)。毕赤酵母细胞浓度为4.35×108~1.13×109/mL时,活细胞在分离液上下两层的分配比例约为95%和5%。低毕赤酵母细胞存活率有利于离心分离。本方法可用于有效分离培养液中的毕赤酵母活细胞。     

用两相法纯化玉米精细胞质膜

纯系玉米(Zea mays L.)708的新鲜花粉经蔗糖溶液等渗温育、低渗胀破,用30％Percoll不连续密度梯度离心,制备大量的生活精细胞。精细胞用French压力室破碎后离心(90000×g,4℃),获得微粒体。随后,用16g的(6.2％Dextran T500/6.2％PEG3350)两相系统加以纯化。一级分离后,上相液(U_1)的K~ 刺激的Mg~(2 )-ATP酶活性稍低于下相液(L_1);对U_1进行二级分离后,U_2的K~ 刺激的Mg~(2 )-ATP酶活性远远高于下相液(U_2L),分离率达到61.1％。膜蛋白质的分离趋势与K~ 刺激的Mg~(2 )-ATP酶相似。选用细胞色素C氧化酶作为线粒体的标志酶,虽只经一级分离,但在U_1中已检测不到该酶活性。精细胞质膜的磷钨酸特异染色电镜观察结果显示,由二级分离所得质膜的纯度达到90％以上。     

番茄红素提取工艺的优化

通过研究预处理方法、有机溶剂及混合溶剂、温度、时间和固液比等因素对分离番茄红素的影响,探索最优化工艺,为工业化高效提取提供依据.实验结果表明:优化温度55℃,温浴番茄果皮浆状物2.5 h后,经离心、乙醇洗涤,再按照固液比为1:4(g/mL),用V(石油醚):V(丙酮)为1:2的混合溶剂在封口容器中,于50℃水浴中萃取番茄红素25 min,期间不断轻微摇晃以确保萃取充分.用此法提取番茄红素成本低、效率高、易于自动化,具有广阔的工业化应用前景.     

小鼠Kupffer细胞分离及细胞培养

目的 采用在体胶原酶灌注、不连续密度梯度离心、选择性贴壁3步法分离Kupffer细胞（Kupffer cells,KCs）,探讨其在分离小鼠KCs的应用及其对KCs生物活性的影响.方法 根据原位灌注和梯度离心方法不同随机分为4组：无胶原酶原位灌注＋3层梯度离心组（A）、无胶原酶原位灌注＋双层梯度离心组（B）、胶原酶原位灌注＋3层梯度离心组（C）和胶原酶原位灌注＋双层梯度离心组（D）.采用F4/80（BM8）免疫染色及吞墨实验判断细胞纯度和功能、台盼蓝拒染实验判断细胞的活力,探讨不同方法KCs分离的效果及细胞活性.结果 刚分离的KCs细胞近似圆形,接种l h后收获细胞纯度较高,但细胞得率相对较低.培养4 h后KCs得率相对较高,培养28 d仍能存活.免疫荧光可显示分离的为KCs,台盼蓝染色显示各组细胞的活力均在90 %左右,在体胶原酶灌注和双层梯度离心可以增加KCs的得率,双层梯度离心法可以增加分离KCs的纯度.结论 在体胶原酶灌注对提高KCs得率较为重要,在体胶原酶灌注、不连续密度梯度离心、选择性贴壁3步法分离小鼠KCs的的方法简便、高效、稳定,培养的KCs具有良好的细胞生物学性状.     

一株芽孢杆菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化性测定

基于实验室从新疆罗布泊沙漠筛选到一株芽孢杆菌, 研究了该菌胞外多糖的分离纯化工艺及其抗氧化性质。发酵液经离心, 抽滤等预处理后, 使用Sevag试剂除蛋白, 并以无水乙醇作提取溶剂, 通过正交实验确定最佳提取条件为: pH为7.0, 温度为4°C, 时间为1.5 h, 料液比为1:4。粗多糖溶解后上活性炭柱(1.5 cm ′ 24 cm), 用蒸馏水、60%乙醇及95%乙醇洗脱, 分离得到主要部分, 再经Sephadex G-100凝胶柱, 用0.2 mol/L的NaCl溶液洗脱, 硫酸苯酚法和考马斯亮蓝     

一种能避免因断轴造成机器损坏的离心机主轴系统

HSC—20R型高速冷冻离心机从1979年开始研制,1981年通过鉴定并获吉林省人民政府科技成果二等奖,现由图们市离心机厂生产,已为国内三十多个单位采用。该机最高转速为20,000rpm,可用多种转子,并带冷冻系统。其主轴系统具有特殊结构,不会因断轴造成机器损坏。本文将先对该机作一简介,然后重点介绍具有特殊结构的主轴系统。一、HSC—20R型高速冷冻离心机简介此离心机是在GDL—Ⅱ—S型离心机的基础上改进而成的。GDL—Ⅱ—S型机是1964年研制的,稍加简化改动后由现北京市医用离心     

一种酶标板转子低速离心细胞制片方法

常规培养悬浮细胞Jurkat,离心收集细胞后,通过载玻片直接涂片、细胞涂片离心机和酶标板转子低速离心机3种方法制备细胞涂片,经瑞氏-姬姆萨染色后,显微镜下观察拍照。发现直接涂片中细胞图像难以观察,效果差,而细胞涂片离心机和酶标板转子低速离心机制备的细胞涂片,细胞图像清晰,均可达到细胞制片要求。酶标板转子低速离心细胞制片是一种便捷的新方法。     

菠菜原生质体游离与纯化的研究

以菠菜为实验材料进行原生质体分离、纯化、活力鉴定。结果表明:1.5%纤维素酶OnozukaR-10+1%果胶酶Pectolase+0.5mol/L甘露醇+CPW盐的酶液,酶解时间5h,菠菜原生质体的获得率高。纯化时,适当降低离心时间有利于原生质体纯化过程中产量及活力的保持,500r/min离心5min,效果较好。     

静脉导管留置及胸腔注射尿激酶治疗结核性胸腔积液影响

探讨中心静脉导管胸腔穿刺留置抽液联合胸腔内注入尿激酶(urokinase,UK)治疗结核性渗出性胸膜炎对胸膜肥厚、粘连的预防作用。方法:将52例收治的结核性渗出性胸膜炎所致大量胸腔积液患者随机分为治疗组(27例)和对照组(25例),对照组给于常规抗结核以及传统单纯胸腔穿刺抽液(每周3次)等治疗;全身结核中毒症状严重者,予口服泼尼松30mg．d-1,每周减量5～10mg,疗程约4～6周。在以上药物治疗同时,治疗组第一次穿刺时使用一次性中心静脉导管代替传统胸穿针穿刺置入并保留于胸腔,抽液后从导管注入尿激酶10～20万U,保留24小时后再次抽液;可以再次或多次使用尿激酶10万u注入胸腔;此后不定时抽液,经B超证实抽尽胸水后拔除导管。结果:治疗组住院时间(12．3±6．6)天,住院费用(2219．5±1171．9)元,治疗后第三个月的胸膜厚度(1．00±0．23)mm,无病例发生胸膜增厚、粘连及包裹性胸腔积液。对照组住院时间(20．4±7．9)天,住院费用(2721．9±1711．7)元,治疗后第三个月胸膜厚度(2．1±0．31)mm,另有3例发生胸膜增厚、粘连,2例形成包裹性胸腔积液。各项指标对比差异有显著性。结论:中心静脉导管胸腔穿刺留置抽液及尿激酶胸腔内保留注射治疗结核性胸腔积液具有简便、安全、创伤少、疗效确切;缩短住院时间,降低住院费用;且能有效预防胸膜肥厚和粘连发生。值得临床推广应用。     

用氯仿-甲醇抽提法测定鱼体脂肪含量的研究

脂肪含量的测定,是鱼类能量学及营养学的重要环节1。目前最常用的测定方法,是用氯仿一甲醇(2:1)混合液(下面简称C-M液)抽提1。这一方法的基本步骤见图1。不同研究者采用的具体步骤有所差异。如崔奕波1引用的方法系将样品用C-M液匀浆后直接离心,而Hopkins等2对样品不匀浆,仅用C-M液浸泡半小时后离心。这一方法最初是用于医学检验;在生态学研究中。常需要测定大量样品,故方法的简化尤为重要。本研究的目的是探讨不同抽提步骤对测定结果的影响,以期对原方法进行简化;同时将C-M抽提法与我国常用的索氏乙醚抽提法进行比较。       

流式细胞仪鉴定猕猴桃倍性技术研究

利用流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)对不同倍性猕猴桃DNA的相对含量进行测定,建立一套简易、快速的鉴定猕猴桃倍性方法。以二倍体"红阳"猕猴桃为对照,‘81-5'、‘皖翠'猕猴桃为试材,通过筛选最优鉴定叶片部位;改良解离液配方;提高滤膜的目数;过滤次数;增加离心次数等优化鉴定技术。结果表明,露地栽培条件下,茎尖下初展叶是倍性鉴定的最佳部位;两次离心;解离液中2%PVP-30;500目滤膜抽滤两次可以有效解决仪器堵管现象,有效去除杂质峰并获得清晰样品峰。通过优化后的鉴定技术可实现同时测定2个以上倍性的猕猴桃混合样品。     

出芽短梗霉膨大细胞分选及产糖分析

本研究运用Percoll密度梯度离心的方法对出芽短梗霉Aureobasidium pullulans的两种细胞形态进行分选,并对两种形态的细胞进行多糖产量的分析。通过对转速、分选时间、Percoll分离液浓度的优化,确定了两种细胞形态分选效果最佳的条件是Percoll分离液浓度为60%、转速为5 000r/min、离心时间为30min。经过光学显微镜和透射电子显微镜观察发现上层为酵母状细胞（YL）、下层为膨大细胞（SC）,并发现膨大细胞外有明显的薄膜包被,且产大量多糖。也为今后在相应状态下研究出芽短梗霉膨大细胞的其他代谢机理提供了可行的方法,满足后续研究的需要。     

柑桔衰退病毒的提纯

从甜橙病株的嫩梢皮组织提纯柑桔衰退病毒(Citrus Tristeza Virus,CTV),冰冻组织按每克鲜组织加入5ml0.1mol/L Tris缓冲液pH8.4(内含0.15％Triton x—100)进行匀浆。经几次差速离心和两次PEG(分子量6,000)沉淀后,将获得的病毒粗提液铺在不连续蔗糖密度梯度液上,HITACHI RPS_(40)T转头30,000r/m离心3小时,收集位于300mg/ml和400mg/ml梯度层之间的分离带,洗脱、浓缩后获得CTV提纯物。提纯的CTV粒子大小为1.000—1,500x12urn,与美国的CTV抗血清起阳性反应。     

蛙精子中心体的分离

中心体是动物和低等植物中构成有丝分裂器的重要结构和功能元件,是间期细胞质微管和分裂期纺锤体微管的组织中心。本文报道一种从蛙精子中分离中心体的简便方法:通过匀浆将精子尾部与头部脱离,用蔗糖离心去除脱落的尾部和杂质颗粒,从而得到纯化的精子头部。用含EGTA的低渗液使精核膨大,再以超声破碎,离心得到中心体的粗制品,以重复超声和离心去除染色质和中心体外围的线粒体,得到纯度较高的精子中心体。电镜观察和免疫荧光染色显示分离所得的中心体由一对中心粒和其外周物质组成。     

琼脂糖悬浮电泳分离制备血红蛋白

琼脂糖(Agarose)悬浮电泳技术是Hjerten1963年建立的。由于该方法在分离制备过程中必须通过光扫描或Folin-Lowry等测蛋白质步骤才能确定无色蛋白质的泳动区带,操作颇为复杂,应用受到一定限制。我们利用血红蛋白样品自身易辨认和半流动性,以及琼脂糖的离心洗脱回收简便等特点,分离制备了多种血红蛋白。一、材料与方法 1.红细胞的收集正常人、α和β-地中海贫血患者的静脉血,经A.C.D.抗凝,3500转/分,离心15分钟去血浆。用生理盐水洗沉积的红细胞三次(离心处理同上)。所得红细胞在液氮中可保存1～3个月。 2.方法 (1)红细胞溶解液的制备取上述压积红细胞加     

管藻目绿藻刺松藻LHCII复合物的分离

采用TritoX-100增溶刺松藻类囊体膜,经初离心,蔗糖密度梯度离心和Mg^2 聚集作用后再离心,纯化到一种只含有分子质量为28000u脱辅基蛋白的LHCⅡ复合物,证实此种多肽为同时结合有Chla、Chlb和管藻黄素及管藻素的色素蛋白复合物,Chla/b=0.91。吸收和荧光光谱显示分离物中各种色素之间保持着良好的能量传递关系。其中管藻黄素及管藻素吸收的光能可直接传递给Chla,而无需Chlb作为中介。     

庆丰链霉菌质粒DNA的分离及电镜观察

本文报道用清亮裂解液PEG沉淀法从庆丰链霉菌M-15菌株中分离到质粒DNA,琼脂糖凝胶电泳用溴化乙锭染色及CsCl-EtBr密度梯度离心,在紫外线下观察均表明除了染色体带之外还有一条质粒带。我们摄制的电镜照片表明存在共价闭合超盘旋和开放环形两种分子构型,以多数大小相近的分子周长取平均值,按1微米=2.07×10~6道尔顿的公式计算,庆丰链老菌质粒DNA分子量约为10×10~6道尔顿。     

节杆菌β-半乳糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

分离纯化了由节杆菌所产的fI-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23)并研究了其酶学性质.以乳糖发酵培养基培养,离心收集茵体,超声破碎细胞得到粗酶液;采用硫酸铵沉淀、Phenyl-Sepharose疏水、DEAE-Sepharose离子交换和p-aminobelazyl-1-thio-β-galactopyranoside...     

一种纯化细菌有机磷水解酶的简便方法

Cibacron blue T_3GA与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联后,产生一种能有效地分离有机磷水解酶的吸附剂。用0.15mol/L MgCl_2溶液从黄杆菌P3—2细胞抽提出的粗酶液通过柱层析分离,即可得到纯化8倍、酶活性回收率为269.4％的纯酶制品。该酶制品用凝胶电泳测是均一的。