腺苷二磷酸核糖基化作用及其机制

腺苷二磷酸核糖基化作用及其机制杨其伟,陈德风（南开大学分子生物学研究所,天津３０００７１）关键词腺苷二磷酸核糖基化作用腺苷二磷酸（ＡＤＰ）核糖基化作用是以ＮＡＤ作为修饰基团的供体,将ＡＤＰ核糖共价连接到受体蛋白上去的一种转译后的修饰过程。自从６０年代...     

一氧化氮供体增强大鼠记忆及其与脑内ADP-核糖基转移酶的关系

为探讨与学习记忆有关的一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ,ＮＯ）信号转导通路,本文用ＮＯ供体硝普钠（ｓｏｄｉｕｍ ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ,ＳＮＰ）或同时给予ＡＤＰ－核糖基转移酶（ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＡＤＰＲＴ）抑制剂尼克酰胺（ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ,ＮＩＣ）侧脑室内流射,观察其对大鼠学习记忆行为的影响,并用高效液相色谱法测定脑内ＡＤＰＲＴ活性。结果表明,ＳＮＰ（０．     

植物中合成蔗糖和淀粉的关键酶Ⅰ.腺苷二磷酸—葡萄糖焦磷酸化酶

植物中合成蔗糖和淀粉的关键酶Ⅰ．腺苷二磷酸┐葡萄糖焦磷酸化酶高振宇黄大年（中国水稻研究所,杭州３１０００６）关键词ＡＧＰＡＤＰＧ３－ＰＧＡ变构调节基因调控自本世纪８０年代初提出腺苷二磷酸（ＡＤＰ）－葡萄糖焦磷酸化酶（ＡＧＰ）是淀粉合成的中心酶以来,该...     

实验性肝硬化部分肝切除后肝组织学及组织化学变化的研究

四氯化碳所致肝硬化的大白鼠,进行７０％和３０％肝脏切除,于术后４８小时、１周、２周分别取剩余肝脏观察肝的组织化学变化,包括ＤＮＡ（脱氧核糖核酸）,ｈｉｓｔｏｎｅ（组蛋白）、ＲＮＡ（核糖核酸）、ＳＤＨ（琥珀酸脱氢酶）、Ｇ－６－Ｐａｓｅ（葡萄糖－６－磷酸酶）、Ｍｇ－ＡＴＰａｓｅ（镁激活三磷酸腺苷酶）、ＣｈＥ（胆碱酯酶）、ＡＫＰ（碱性磷酸酶）、ＡＣＰ（酸性磷酸酶）,ＰＡＳ（糖原）反应。其中肝硬化切除３０％肝脏的动物,术后４８小时再生肝细胞活跃,肝脏ＤＮＡ、ｈｉｓｔｏｎｅ、ＳＤＨ、Ｇ－６－ｐａｓｅ、ＡＴＰａｓｅ活性及反应明显增高;而ＣｈＥ活性及ＰＡＳ反应等显著减弱。     

骤冷与饥饿对小鼠肝脏影响的实验研究

为探讨饥饿及饥饿与骤冷对动物肝脏的影响,本实验用健康昆明种小鼠２５只,随机分成正常组５只,饥饿组１０只,饥饿后再予冷刺激组１０只（下称骤冷组）。采用组织化学及酶组织化学方法观察糖原（ＰＡＳ反应）、ＳＤＨ（琥珀酸脱氢酶）,ＬＤＨ（乳酸脱氢酶）,ＣｈＥ（胆碱酯酶）、Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ（镁激活三磷酸腺苷酶）,ＡＣＰ（酸性磷酸酶）。结果提示：饥饿时肝脏ＰＡＳ反应,ＳＤＨ,Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ、ＣｈＥ活性显著下降,而ＡＣＰ活性明显增强;饥饿后骤冷时ＰＡＳ（反应）、ＳＤＨ、ＣｈＥ更显著下降,而ＡＣＰ及Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性反而增强。     

ASGP受体介导的体内基因转移

我们针对肝细胞特异的ＡＳＧＰ（去唾液酸糖蛋白）受体,构建了一种具有肝细胞特异导向性的基因转移载体系统,该载体包括两种共价结合的功能成分：一种为ＡＳＧＰ,作为配体,与肝细胞表面特异的ＡＳＧＰ受体结合;另一种为多聚左旋赖氨酸（ｐｏｌｙ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ）,与ＤＮＡ以强静电作用相结合。小鼠尾静脉注射３２Ｐ－ＤＮＡ－ｐｏｌｙ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ－ＡＳＯＲ（去唾液酸ａｌ酸性糖蛋白）或等量的３２Ｐ－ＤＮＡ、ＡＳＯＲ、ｐｏｌｙ－ＤＬ－ｌｙｓｉｎｅ单体混合物,２０小时后,小鼠肝、脾、肾各组织的放射性计数结果表明该载体系统具有较强的肝组织特异性。     

亲和层析纯化HepG_2细胞分泌的PAI－1

本文报道用抗ＰＡＩ－１单克隆抗体（ＭｃＡｂ）亲和层析建立了纯化ＰＡＩ－１的简便方法。经免疫亲和层析,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００凝胶过滤,从ＨｅｐＧ２细胞培液中分离到糖基化和非糖基化两种形式的ＰＡＩ－１,回收率为８４％,ＰＡＩ－１比活性６．１×１０４ＩＵ／ｍｇ。糖基化ＰＡＩ－１分子量为５０ｋＤ,比活性５．８×１０４ＩＵ／ｍｇ。非糖基化ＰＡＩ－１分子量４３ｋＤ,占总ＰＡＩ－１３０％,仍具有ＰＡＩ－１活性。用ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析进一步纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯的糖基化ＰＡＩ－１。     

6－Dimethylaminopurine（6－DMAP） Spontaneously Induces Interphase Transition Of Metaphase Mouse Oocytes

６－Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ（６－ＤＭＡＰ）ＳｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙＩｎｄｕｃｅｓＩｎｔｅｒｐｈａｓｅＴｒａｎｓｉｔｉｏｎＯｆＭｅｔａｐｈａｓｅＭｏｕｓｅＯｏｃｙｔｅｓ￥ＳＵＮＱｉｎｇ－ｙｕａｎ（孙青原）;ＧＡＯＳｈａｏ－ｒｏｎｇ（高...     

五种酶组织化学方洁显示大鼠海马微血管的比较

本文对１０例成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠海马,应用过氧化物酶二氨基联苯胺（ＤＡＢ）法、碱性磷酸酶（ＡＩＰ）、镁离子激活的三磷酸腺苷酶（Ｍｇ（２＋）－ＡＴＰａｓｅ）、钙离子激活的三磷酸腺昔酶（Ｃａ（２＋）－ＡＴＰａｓｅ）和５’－核苷酸酶（５’－Ｎａｓｅ）等酶组织化学方法显示其微血管,并应用体视学方法测算,比较上述方法显示微血管的效果,结果表明：ＤＡＢ法显示微血管的效果最好,ＡＩＰ法次之,Ｍｇ（２＋）－ＡＴ－Ｐａｓｅ法再次之。大鼠海马微血管Ｃａ（２＋）－ＡＴＰａｓｅ呈弱阳性,５‘－Ｎａｓｅ呈阴性。ＤＡＢ法和Ｍｇ（２＋）－ＡＴＰａｓｅ法分别适宜作微血管长度密度和血管直径的定量分析。     

人GRY-RBP基因的表达及其RNA结合活性的初步鉴定

ＲＲＭ ＲＮＡ 结合蛋白在基因的转录后调控中起着重要作用．人ＧＲＹ－ＲＢＰ 是我们实验室最近克隆的一个新的全长ｃＤＮＡ,编码一个ＲＲＭ ＲＮＡ 结合蛋白．ＧＲＹ－ＲＢＰ 的全编码区用ＰＣＲ扩增后,克隆到ｐＥＴ３０ａ＋ 表达载体中,在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得了高效表达,表达的ＧＲＹ－ＲＢＰ重组蛋白占细菌总蛋白的２１％ ．利用融合在ＧＲＹ－ＲＢＰＮ 端的Ｈｉｓ．Ｔａｇ,采取亲和层析的方法纯化了表达的重组蛋白．为了检测ＧＲＹ－ＲＢＰ的ＲＮＡ 结合活性及其所结合的ＲＮＡ 性质,将表达的蛋白与ｐｏｌｙ（Ａ）－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ结合,发现ＧＲＹ－ＲＢＰ能与ｐｏｌｙＡ （Ａ）结合,结合活性能被可溶性的ｐｏｌｙ（Ａ）、ｐｏｌｙ（Ｃ）减弱．改变ＮａＣｌ浓度和加入不同浓度的酵母ｔＲＮＡ竞争物后,ｐｏｌｙ（Ａ）结合活性不变．     

畲族Ge,PGM1,AcP1,6—PGD,ADA和AK1的遗传多态性

对畲族血浆组特异性成分、红细胞磷酸葡萄糖变位酶１（ＰＧＭ１）、酶性磷酸酶（ＡｃＰ１）、６－磷酸葡萄糖酸氢酶（６－ＰＧＤ）、腺苷脱氨酶（ＡＤＡ０、腺苷酸激酶（ＡＫ１）的遗传多态性进行了研究。Ｇｃ与ＰＧＭ１是用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚集分析的,ＡｃＰ１、６－ＰＧＤ、ＡＤＡ及ＡＤ１是用淀粉凝胶电泳分析的。各基因座的基因频率分别为Ｇｃ１Ｆ０．４７２２、Ｇｅ１Ｓ０．２４２１、Ｇｃ２０．２７３８;ＰＧＭ１１Ａ     

不同磷脂和糖脂对莱氏衣原体膜上Mg~（2＋）－ATPase活性的影响

莱氏衣原体膜上Ｍｇ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ用ＤＯＣ溶解后,经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－６Ｂ和ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２离子交换柱,得到了部分纯化的Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ,并将此ＡＴＰａｓｅ与不同极性头部的磷脂和膜糖脂重组,研究了不同的极性头部的磷脂和膜糖脂对ＡＴＰａｓｅ活性的影响。此酶的活性不依赖酸性磷脂,ＰＧ、ＤＰＧ、大豆磷脂等明显抑制酶活性,中性磷脂ＤＭＰＣ、ＰＥ、ＰＣ则能增加酶活性,其中尤以非双层脂ＰＥ的作用最为明显。从莱氏衣原体膜上提取的糖脂（ＭＧＤＧ,ＤＧＤＧ）单独和ＡＴＰａｓｅ重组时,酶活性增加并不明显,当ＭＧＤＧ和ＤＧＤＧ以等比例混合时,能大大地增加酶活性。这表明Ｍｇ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ的活性很大程度上与磷脂的表面电荷及磷脂的组成相关。     

DOPE、DOPC对重组去脂肌质网Ca~(2+)-ATPase活力和构象的影响

经磷脂酶Ａ２ 去脂的肌质网Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 重组于不同比例的二油酰磷脂酰胆碱（Ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ,ＤＯＰＣ） 和二油酰磷脂酰乙醇胺（Ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ,ＤＯＰＥ） 形成脂酶体,研究了不同磷脂环境中Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 的ＡＴＰ 水解和Ｃａ２ ＋ 转运活力。结果表明,ＤＯＰＣ 和ＤＯＰＥ 分别有利于ＡＴＰ 水解和Ｃａ２ ＋ 的转运,ＤＯＰＥ 可以增强Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 的ＡＴＰ水解和Ｃａ２ ＋ 转运之间的偶联效率。利用内源荧光、荧光淬灭及Ｆｏｒｓｔｅｒ 能量转移原理测定Ｃａ２ ＋ －ＡＴＰａｓｅ 相应的构象变化, 发现随着ＤＯＰＥ／ ＤＯＰＣ 比例的改变使Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 构象发生相应的变化。     

兔出血症病毒信使RNA的分离纯化及其生物活性的鉴定

用液相免疫沉法从感染兔出血症病毒（Ｒａｂｂｉｔ Ｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ,ＲＨＤＶ）８小时后的兔肝组织的多聚核糖体中,分离出ＲＨＤＶ特异性的多聚核糖体,并由此获得全核酸,经Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ亲和层板,得到３．４Ａ２６０的ＲＨＤＶｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ占全核酸的３．５％。此Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ经甲醛变性琼脂糖电泳,得到６条单一的带,其大小分别为０     

尖吻蝮蛇酸性磷脂酶A2的纯化和初步晶体学

为进一步揭示影响血小板聚集活性的结构基础,纯化了江西尖吻蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒａｄｕｎ ａｃｕｔｕｓ）酸性磷脂酶Ａ２。江西省吻蝮蛇蛇毒经ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换柱层析,两步ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换柱层析以及Ｍｏｎｏ）ＧＦＰＬ离子交换柱层析,得到了ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和等和集电泳均一的磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）,其分子量为１６．５ＫＤ,等电点为４．３,经测定,该酶具有抑制ＡＤＰ诱地     

生物体^31P核磁共振的研究

通过对~（３１）Ｐ核磁共振（（３１）－Ｐ－ｎｕｃｌｅａｒｍａｇｎｅｔｉｃｒｅｓｏｎａｎｃｅ,~（３１）Ｐ－ＮＭＲ）的Ｉｎｖｉｖｏ谱图介绍,总结了该方法用于定量计算ＡＤＰ、ＡＭＰ、游离［Ｍｇ~（２＋）］、ｐＨ、自由能变化（△Ｇ）及定性研究多种含磷化合物的代谢过程,突出其无创性,显示了该技术的应用前景。     

糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的含糖量及其构象变化

通过对ＧＡＰＤＨ及ｇＧＡＰＤＨ含糖量、ＣＤ、荧光及ＤＴＮＢ的修饰表明：用间氨基苯硼酸琼脂糖（ｍ－ＡＰＢＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ６Ｂ）亲和层析法分离的兔肌ｇＧＡＰＤＨ每分子含有１．８９个糖基。ｇＧＡＰＤＨ及ＧＡＰＤＨ的远紫外ＣＤ谱差别较小,但近紫外差别较明显。两者内源荧光在不同浓度的ＧｕＨＣｌ溶液中的变化亦有一定差异。ＤＴＮＢ对酶活性部位巯基的修饰表明,ｇＧＡＰＤＨ的ＤＴＮＢ修饰的快相一级动力学常数大于ＧＡＰＤＨ动力学常数一个数量级。以上结果提示：糖基化导致酶分子及活性部位的空间结构改变,糖基化位点可能发生在酶活性部位附近。     

糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的含糖量及其构象变化

通过对ＧＡＰＤＨ及ｇＧＡＰＤＨ含糖量、ＣＤ、荧光及ＤＴＮＢ的修饰表明：用间氨基苯硼酸琼脂糖（ｍ－ＡＰＢＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ６Ｂ）亲和层析法分离的兔肌ｇＧＡＰＤＨ每分子含有１．８９个糖基。ｇＧＡＰＤＨ及ＧＡＰＤＨ的远紫外ＣＤ谱差别较小,但近紫外差别较明显。两者内源荧光在不同浓度的ＧｕＨＣｌ溶液中的变化亦有一定差异。ＤＴＮＢ对酶活性部位巯基的修饰表明,ｇＧＡＰＤＨ的ＤＴＮＢ修饰的快相一级动力学常数大于ＧＡＰＤＨ动力学常数一个数量级。以上结果提示：糖基化导致酶分子及活性部位的空间结构改变,糖基化位点可能发生在酶活性部位附近。     

糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的分离纯化及糖基代位点的探讨

应用糖基化蛋白亲和层析技术对兔肌及人红细胞的３－磷酸甘油醛脱氢酶的分离分析表明,兔肌非糖基化ＧＡＰＤＨ的比活为１８０—２００单位,而糖基化ｇＧＡＰＤＨ的为４０—５０单位,并占该酶蛋白总量的４０％。人类红细胞糖基化ｇＧＡＰＤＨ的活力占其总活力的５５％左右。以上结果表明：哺乳动物体内存在糖基化３－磷酸甘油醛脱氢酶。由于（１）糖基化明显影响ＧＡＰＤＨ的活力;（２）糖基化酶活性部位的巯基（Ｃｙｓ－１４９）空间位置发生了改变;（３）糖基化影响活性部位的空间构象及（４）ＯＰＴ对糖基化及非糖基化酶的修饰无论在动力学上还是在ＫＩ淬灭时都有明显差异,因此,糖基化的位点可能与赖氨酸残基有关,并且接近或位于酶的活性部位。     

尿激酶抗人交联纤维蛋白—D—二聚体单抗化学偶合体的制备

利用双功能试剂Ｎ－琥珀酰亚胺－３（２－二硫吡啶）丙酸酯（ＳＰＤＰ）作交联剂,合成了尿激酶（ＵＫ）－抗人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体单抗（ＭＡ－ＨＩＤ１）化学偶合体（ＵＫ．ＭＡ－ＨＩＤ１）并用苯甲脒－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ及人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化,获得偶合体产物,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈现一条带,其分子量约为２０００００,纤维蛋白平板法测活结果显示,偶合体中酶比活