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敖世洲 《Acta biochimica et biophysica Sinica》1998,30(3):217-219
酵母酸性磷酸酶基因表达的分子机制敖世洲(中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,上海200031)酵母酸性磷酸酶PHO5基因是一种阻遏型基因,它的表达受高浓度无机磷的阻遏,在低浓度无机磷条件下去阻遏[1]。PHO5基因的转录至少受5种蛋... 相似文献
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酵母酸性磷酸酯酶转录调控因子PHO2的功能域分析 总被引:5,自引:5,他引:0
利用定点诱变,氨基酸插入或缺失的方法对PHO2进行结构改造,观察对其功能的影响。PHO2蛋白的同源域中有α-螺旋2-β-转我-α螺旋3的结构,是转录因子结构DNA的功能域。定点诱变α-螺旋3上的Ile123为Pro123或者在α-螺旋2中插入PDPD4个氨基酸,破坏α-螺旋的结构,可导致PHO2功能的丧失。氨基酸片段的缺失分析表明,N端Gin丰富区大部缺失,对PHO2功能没有影响;而包含酸性氨基酸 相似文献
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酵母酸性磷酸酯酶多肽P56,P57和P60二级结构的预测与比较 总被引:2,自引:0,他引:2
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酵母PHO81在酸性磷酸酯酶基因表达调控中的作用 总被引:5,自引:5,他引:0
利用酵母PHO81与大肠杆菌β-半乳糖苷酶的融合基因,系统地研究了PHO81基因在酵母酸性磷酸酯酶的不同调控因子的单缺失株和双缺失株中的表达规律,它与酸性磷酸酯酶基因PHO5和PHO11的控制机制相似。构建 了ADH1启动子控制下PHO81表达质粒。在PHO81在细胞内组成型表达时,酸性磷酸酯酶基因的表达仍受无机磷的控制,提示PHO81蛋白可能在不同浓度无机磷条件发生变构。PHO81的酸性磷酸酯酶 相似文献
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利用酵母PHO81与大肠杆菌产β-半乳糖苷酶的融合基因,系统地研究了PHO81基因在酵母酸性磷酸醋酶的不同调控因子的单缺失株和双缺失株中的表达规律,它与酸性磷酸酯酶基因PHO5和PHO11的控制机制相似。构建了ADH1启动子控制下PHO81表达质粒。在PHO81在细胞内组成型表达时,酸性磷酸酯酶基因的表达仍受无机磷的控制,揭示PHO81蛋白可能在不同浓度无机磷条件发生变构。PHO81在酸性磷酸酯酶基因表达系统中是一个中介因子。在此基础提出了一个酸性磷酸酯酶基因调控的分子模型。 相似文献
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CENP——B的基因表达与细胞周期关系的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文以Hela细胞为材料研究一种有丝粒蛋白CENP-B的基因表达与细胞周期及细胞核骨架的关系。将Hela细胞同频不同周期时相,以流式细胞光度术、同位素掺入和ACA着丝粒染色等方法检测细胞同步化效果。我们分别提取了各周期时相细胞的总RNA和Poly(A)^+RNA,用Dot blot和Northern blot杂交方法研究CENP-B在细胞周期中的表达。结果表明,CENP-B基因在细胞周期中的各个时 相似文献
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酵母PHO80基因的克隆,表达及功能分析 总被引:1,自引:0,他引:1
利用原位杂交方法从野生型酵母菌染色体DNA中克隆了PHO80基因,全长约4.2kb,包括1.1kb的上游序列和879bp的编码序列。以URA3基因为筛选标记,通过体内同源重组和营养互补筛选获得了PHO80基因缺失突变株。进一步研究了PHO80在细胞内的功能,它是酵母阻遏型酸性磷酸酯酶结构基因以及调控基因PHO81表达的负调控因子,但不影响PHO4和PHO85的表达。还构建了PHO80-LacZ融合基因,探索它在细胞内的表达规律。β-半乳糖苷酶活力测定结果表明,PHO80基因在细胞内呈低水平表达,并受自身产物和PHO85的抑制,推测它与PHO5和PHO81基因的调控模式可能相似。 相似文献
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酵母PHO85基因的定点诱变和功能分析 总被引:2,自引:1,他引:1
克隆酵母PHO85基因,用URA3基因取代其部分编码序列,通过染色体同源重组的途径,构建PHO85缺失突变株。以细胞内酸性磷酸酯酶的活力水平显示PHO85的功能作用。完整PHO85基因转入缺陷型酵母菌,能使表达回复,位点专一诱变的PHO85基因(Gly13→ASP或LYS33→Glu)丧失此种功能。PHO85与CDC28编码的蛋白激酶有较高的同源性。PHO85的Gly13和Lys33相当于蛋白激酶 相似文献
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酵母PHO4基因的克隆与表达 总被引:4,自引:3,他引:1
用原位杂交方法从酵母菌染色体DNA中分段克隆,拼接,获得完整的PHO4基因,全长约3.4kb,利用体内同源重组的方法,构建了PHO4基因缺失突变株。PHO4基因的缺失导致酸性磷酸酯酶活性明显下降,将完整的PHO4基因转入这种缺陷细胞,能使酶活性回复到野生型水平,PHO4起正调控作用,构建PHO4-LacZ融合基因,以β-半乳糖苷酶的活力表示PHO4的表达水平。融合基因不同名的表达表明,PHO4基因 相似文献
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大豆磷酸烯醇式丙酮酸磷酸酯酶研究Ⅲ、非专一性酸性磷酸酯酶的纯化与特性 总被引:1,自引:1,他引:1
从大豆叶片中分离能水解磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的酸性磷酸酯酶,通过硫酸胺分部(20%~50%饱和度)沉淀、DEAE纤维素层析、刀豆球蛋白琼脂糖凝胶亲和层析将酶纯化了422.47倍,活性达78.16U/mg蛋白。该酶对PEP专一性不强,Km为1.09mmol/L(PEP),最适pH5.8,在pH4.8~7.0范围内及60℃以下较稳定,水解PEP的活性被Mg2+、Mn2+激活,F、Cu2+、Zn2+、PO43、MoO42及3磷酸甘油酸(3PGA)、三磷酸腺苷ATP等代谢物抑制,受异柠檬酸等有机酸影响较小。 相似文献
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酵母细胞周期调控的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
酵母是一种研究细胞周期调控的好材料,在细胞周期的调控研究中具有重要作用。现在通常以芽殖酵母和裂殖酵母为代表进行研究。这两种酵母的细胞周期进程与高等真核生物相比各有其特点。 酵母细胞周期运行中存在有三个不同的控制点,即start点、S期启动点、G2/M转换处。在这三个不同的控制点起作用的CDK的组成是不同的。芽殖酵母分别是Cdc28-Clns;Cdc28-Clb5和Cdc28-Clb6;Cdc28-Clb1、Cdc28-Clb2、Cdc28-Clb3和Cdc28-Clb4。裂殖酵母中分别是Cdc2-Cig2;Cdc2-Cig2;Cdc2-Cdc13和Cdc2-Cig1,其中芽殖酵母中的Cdc28和裂殖酵母中的cdc2是等效基因。不同的控制点存在着不同 的调控机制,它们涉及到大量的基因,其中以G2/M转换处的调控机制研究得最早也最透彻。另外,APC途径在M中期/后期转化中起着重要作用。 相似文献
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以斑玉蕈为材料分别从菌盖和菌柄中提取一种酸性磷酸酯酶(ACPase,EC.3.1.3.2),进一步用硫酸铵沉淀分离,Sephadex G-200柱纯化,从菌盖中分离到3个酶组分,从菌柄中分离到4个酶组分,分别对菌盖和菌柄的酶Ⅰ和酶Ⅰ′进行聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳纯度鉴定,均呈现单一酶蛋白带。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定酶Ⅰ和酶Ⅰ′的相对分子量均为65kDa,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Sephadex G-75凝胶过滤测定分析,酶Ⅰ和酶Ⅰ′均为单亚基蛋白。紫外吸收光谱(UV)测 相似文献
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萌发木豆种子中酸性磷酸酯酶的纯化和动力学特性 总被引:1,自引:0,他引:1
以对硝基苯磷酸为底物检测酶活性,通过20%~60%硫酸铵分部、DEAE-葡聚糖A25、羟基磷灰石、伴刀豆球蛋白-琼脂糖4B柱层析,从木豆萌发的种子中纯化到一个同工酶APaseⅡ,酶最终纯化倍数为247倍,比活力达51.8U/mg蛋白。非变性PAGE和SDS-PAGE表明所纯化的酶已经达到电泳纯,是一个分子量为33.1kDa的单体蛋白。APII的最适pH为5.0,最适温度为35℃,在pH3.5~7以及55℃以下稳定。该酶对焦磷酸有最大活性,受K+和Mg2+激活,受Fe2+,Mn2+,Mo7O246-,F-及酒石酸、苹果酸、异柠檬酸、草酸、柠檬酸、乙醇酸、乙醛酸和抗坏血酸等有机酸抑制。 相似文献
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甲基营养型酵母基因表达系统 总被引:2,自引:0,他引:2
甲基营养型酵母为第二代酵母表达系统,具有表达水平高,产物活性好,培养成本低,易扩大为工业化生产等特点,近来得到越来越广泛的应用。本文就该系统的载体构件、外源基因与宿主染色体的整合、分泌表达、影响表达量因素等方面作一综述 相似文献
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正当我们热衷于利用大肠杆菌(Escherichia coli)、酿酒酵母(Saccharomyces cervisiae)等传统表达系统来研究各种基因表达时,国外一些新型表达系统正在悄然兴起。这些系统有着独特的优点,潜力很大,可能对今后基因工程产品的开发和生物技术的发展产生重要作用。其中巴斯德毕赤氏酵母(Pichia Pastoris)特别值得引起我们的注意。本文对该系统作一简要评述。 相似文献
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甲醇酵母基因表达系统的研究进展 总被引:15,自引:0,他引:15
在大肠杆菌这一传统表达系统被频繁用作研究各种基因表达时,一种新型且有效的基因表达系统-甲醇酵母正逐渐引起人们的注意。本文对甲醇酵母基因表达系统的特点及研究进展作一简要综述。 相似文献