乙肝患者血清肝纤维化标志物与HBV DNA含量分析

目的 动态观察肝纤维化活动性与肝脏病变程度。方法 采用放射免疫法检测血清中透明质酸（HA）、层连蛋白（IN）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）肝纤维化标志物;采用核扩增荧光定量检测HBVDNA。结果 随着年龄的不同血清肝纤维化标志物水平变化呈多样性,而各年龄组间的病毒含量差异无显著性（P〉0．05）。结论 肝炎患者HBV复制活跃,传染性强,但并不表明肝炎后肝病的严重程度。     

川芎嗪调节自发糖尿病肾病鼠Ⅲ型前胶原表达的实验研究

目的:观察川芎嗪对自发糖尿病肾病大鼠肾小球Ⅲ型前胶原基因表达的调节.方法:将实验用6月龄SPF级GK大鼠和Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、川芎嗪治疗组.治疗16周.观察治疗后大鼠的尿素氮、_薛肌苷、内生肌苷清除率、24小时尿蛋白排泄率,免疫组化检测肾组织Ⅲ型前胶原表达.结果:①造模组大鼠均出现肾脏功能有损害②川芎嗪能改善自发糖尿病肾病大鼠基本状况,降低糖尿病大鼠的尿素氮、血肌苷、24h尿白蛋白排泄率,增加内生肌苷清除率,Ⅲ型前胶原表达显著下调.结论:川芎嗪可通过降低Ⅲ型前胶原的表达,对肾脏起保护作用.     

Tb（Ⅲ）与Ⅱ型胶原的相互作用

提取并分离纯化了Ⅱ型胶原,研究了Ｔｂ（Ⅲ）与Ⅱ型胶原的相互作用,结果表明Ⅱ型胶原对Ｔｂ（Ⅲ）有配位作用,并能极大地增强其荧光强度。用荧光滴定法和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图法确定了Ⅱ型胶原与Ｔｂ（Ⅲ）的结合常数和结合部位数,结果表明Ⅱ型胶原与Ｔｂ（Ⅲ）有两类结合部位,其结合部位数和结合常数分别为０．７;３．１×１０＾５和１．３;１．０×１０＾５。     

Tb(Ⅲ)与Ⅱ型胶原的相互作用

提取并分离纯化了Ⅱ型胶原,研究了Ｔｂ（Ⅲ）与Ⅱ型胶原的相互作用,结果表明Ⅱ型胶原对Ｔｂ（Ⅲ）有配位作用,并能极大地增强其荧光强度．用荧光滴定法和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图法确定了Ⅱ型胶原与Ｔｂ（Ⅲ）的结合常数和结合部位数,结果表明Ⅱ型胶原与Ｔｂ（Ⅲ）有两类结合部位．其结合部位数和结合常数分别为０．７;３．１×１０５和１．３;１．０×１０５．     

针对I型及Ⅲ型前胶原基因的二联核酶的构建及体外活性研究

增殖性瘢痕组织中胶原蛋白的合成显著增加从而导致胶原的过度沉积。利用核酶特异地抑制前胶原基因的表达可减少胶原蛋白的合成,为瘢痕的研究和防治提供了新的思路。为研究用核酶抑制前胶原基因表达的可能及效果,设计并构建了针对α1（I）型及α1（Ⅲ）型前胶原基因的二个单价核酶串联的二联核酶基因真核表达载体,并对其体外切割活性 进行研究。结果表明该二联核酶的切割效果明显,均能有效地切割底物,为进一步研究核酶的前胶原基因表达的抑制作用以及利用核酶防治瘢痕产生打下基础。     

缺氧和DDPH对人胚肺成纤维细胞前胶原mRNA表达的影响

用核酸原位杂交和图像分析等方法,观察直接缺氧（Ｈ）和缺氧猪肺动脉内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）对人胚肺成纤维细胞（ＫＭＢ１７）的前胶原ｐｒｏα１（Ⅰ）,ｐｒｏα１（Ⅲ）ｍＲＮＡ表达和抗高血压药１－（２,６－二甲基苯氧基）－２－（３,４－二甲氧基苯乙氨基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对此过程的影响。结果发现,Ｈ和ＨＥＣＣＭ均可使ＫＭＢ１７的两型前胶原ｍＲＮＡ表达量增高,明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。ＤＤＰＨ对ＨＥＣＣＭ组细胞的Ⅰ,Ⅲ两型前胶原ｍＲＮＡ表达增高均有显著的抑制作用（抑制率分别为－４３．９７％和－５６．２２％）,而对Ｈ组仅抑制ｐｒｏα１（Ⅰ）前胶原ｍＲＮＡ的过量表达（－５３．５８％）。提示缺氧可直接或通过肺动脉内皮细胞的介导,促进人胚肺成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ两型前胶原ｍＲＮＡ表达,ＤＤＰＨ在基因转录水平上对此过程有抑制作用     

PCR标记前胶原基因探针及其检测肝星状细胞前胶原基因表达

目的：建立一种新的前胶原基因探针制备方法,并用克勤克俭 检测HSC的前胶原mRNA表达。方法：从NCBIGeneBank查询Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原基因的序列,根据基因序列用OLIGO软件设计其引物：RT-PCR扩增基因,并用不对称PCR方法和DIG-dUTP标记前胶原基因探针,用其原位杂交检测HSC前胶原基因表达。结果：用所设计的引物和RT-PCR扩增得到目的基因,制备了DIG标记的前胶原基因探针,并用其检到HSC的前胶左面的基因表达。结论：建立了一种新的、较简易的前胶原基因探针标记方法,并对其它基因探针的标记有借鉴意义。     

藤茶总黄酮对肝纤维化大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的:观察藤茶总黄酮(Tengcha flavonoids,TCF)对大鼠实验性肝纤维化的治疗作用,并探讨其机制.方法:采用四氯化碳(CCL4)皮下注射制备大鼠肝纤维化模型,随机分为正常对照组、模型对照组、藤茶总黄酮(TCF)治疗组和秋水仙碱(CLC)治疗组.各组以灌胃的形式给药,采用蛋白免疫印迹分析和实时定量PCR技术检测各组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况.结果:藤茶总黄酮能明显降低实验性大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,与模型对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:藤茶总黄酮可通过减少肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的生成,发挥抗肝纤维化的作用.     

肝素对成纤维细胞促增殖作用的研究

应用核仁组成区相关嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲｓ）染色和抗Ⅲ型胶原以及抗５－溴脱氧尿苷单抗免疫组化技术,观察了肝素对体外培养的ＮＩＨ／３Ｔ３成纤维细胞增殖的影响,发现：（１）肝素能促使成纤维细胞数量增加,如０．１ｍｇ／Ｌ浓度的肝素在培养第３天成纤维细胞数量相当于对照值的１．３倍;（２）对成纤维细胞ＡｇＮＯＲｓ的合成显示出明显的促进作用,如０．２ｍｇ／Ｌ浓度的肝素培养第３天,其ＡｇＮＯＲｓ数量为对照值的２．７倍;（３）进一步分析肝素对成纤维细胞ＤＮＡ和Ⅲ型胶原合成的影响,结果表明,加入０．２ｍｇ／Ｌ肝素培养第３天,Ｓ期成纤维细胞和Ⅲ型胶原阳性细胞数分别为对照值的２．７倍和１．８倍。上述实验结果为探讨肥大细胞分秘的活性介质参与器官纤维化作用的机理进而采取相应的对抗措施提供了依据     

从癌性腹水中分离Ⅲ型前胶原氨基末端肽

采用(NH₄)₂SO₄沉淀,二次不同pH的DEAE-Sephacel离子交换柱层析及Sephacryl S-200分子筛柱层析从人癌性腹水中分离并纯化了PⅢP,并制备了抗血清。经SDS-PAGE鉴定为均一蛋白带,分子量约为47kD。经西德药盒测定,与西德、芬兰PⅢP抑制曲线平行关系良好。氨基酸组成测定亦与文献报道基本一致。抗血清效价较高,特异性强。本研究在方法学上有一定创新,提纯方法简便易行。     

牛Ⅲ型前胶原的提取及抗血清的制备

 在中性pH和蛋白酶抑制剂的存在下,从新生小牛皮肤中提取Ⅲ型前胶原。利用反复盐析法将Ⅰ型胶原和前胶原与Ⅲ型胶原和前胶原分开,再经DEAE纤维素层析分离出Ⅲ型前胶原。 用提取的Ⅲ型前胶原免疫家兔,获得抗血清,用酶联免疫法测定效价达1:10O,000。经与国外标准品鉴定该提取物为Ⅲ型前胶原。     

实验性石棉肺病变中Ⅰ型及Ⅲ型胶原基因表达的研究

以斑点杂交法测定染溫石棉尘后30天与60天大鼠肺组织中前胶原mRNA的水平,即proα_1(Ⅰ)、proα_2(Ⅰ)、proα_1(Ⅲ)mRNA的水平,并与正常大鼠肺组织对比,结果显示,染石棉尘的肺组织中这三种mRNA显著地高于正常对照组。在染尘后60天时Ⅰ型胶原的两种mRNA仍呈上升趋势,而Ⅲ型胶原的mRNA则呈稳定状态。体外实验的结果表明溫石棉及青石棉纤维都可以刺激2BS细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达。矽肺组织来源的致纤维化因子与石棉纤维都具有促进胶原基因表达的作用,其共同作用效果更強。证明这两种因素都参与调节石棉肺的纤维化作用。     

HBV感染者肝纤维化四项指标检测值与Fibroscan检测值的相关性分析

目的分析HBV感染者四项肝纤维化血清学指标检测值与Fibroscan检测值之间的相关性。方法选择大连市第六人民医院211例HBV感染者,按肝影像学Fibroscan检测值将患者分为肝硬化组和非肝硬化组,非肝硬化组患者再根据Fibroscan分期分为无肝纤维化组、轻度肝纤维化组、中度肝纤维化组和重度肝纤维化组。所有患者均采集其相近时间内Fibroscan及Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)检测数据。结果运用SPSS 17.0软件进行统计学分析。结果 PCⅢ、C-Ⅳ、HA、LN检测值与Fibroscan检测值之间均具有良好的相关性(r=0.404、0.445、0.557、0.470,P0.01),其中以HA检测值与Fibroscan检测值之间的相关性最高(r=0.557,P0.01)。结论肝纤维化四项血清学指标检测值与Fibroscan检测值之间相关性显著。肝纤维化四项血清学指标检测在肝纤维化程度较重时的准确性更高。     

氧化苦参碱对阿霉素所致大鼠心肌损伤的保护作用研究

目的：研究氧化苦参碱对阿霉素致大鼠心肌损伤的保护作用。方法：SD大鼠随机分成4组,阿霉素级（adriamycin,ADM）、阿霉素＋氧化苦参碱组（oxymatrine,OMT）,氧化苦参碱组,正常对照组。免疫组化染色法检测大鼠心肌Ⅰ Ⅲ型胶原的表达,用光镜及电镜观察心肌组织的病理改变及超微结构变化。结果：ADM组中大鼠心肌Ⅰ Ⅲ型胶原的表达显著增加,ADM＋OMT组也有相似改变,但较ADM组有显著下降,两组之间有显著差异（P〈0．05）;正常对照组与OMT组无变化。光镜及电镜结果显示ADM组与ADM＋OMT组大鼠心肌组织,均有损伤,但ADM＋OMT组较ADM组损伤明显减轻。OMT组动物未观察到心肌组织病理变化。结论：氧化苦参碱对阿霉素所致大鼠心肌损伤具有保护作用。     

贵州四个山羊品种mtDNA多态性及起源分化

采用１５种限制性内切酶,研究贵州省４个山羊品种共９３只个体的线粒体ＤＮＡ多态性。其中ＢｏｍＨＩ、ＨｉｎｄⅢ和ＳａｌⅠ３种酶的酶切类型存在多态。共检测到１８种限制性态型,归结为３种ｍｔＤＮＡ单倍型。单倍型Ⅰ、Ⅱ在贵州山羊４个品种分布频率较高,分别为７７．４２％和２１．５０％,单倍型Ⅲ分布频率较低（１．０８％）;品种间亲缘关系聚类分析表明白山羊和黑山羊亲缘关系最近,其次为黔林羊,而与小香羊的亲缘关系最     

肺动脉管壁Ⅰ.Ⅲ型胶原变化在慢性低O2高CO2肺动脉高 …

目的：探讨管壁胶原及Ⅰ、Ⅲ型胶原变化在慢性低Ｏ２高ＣＯ２性肺动脉高压形成中的作用。方法：采用透射电镜、图像分析及免疫组化等方法,研究四周低Ｏ２高ＣＯ２对大鼠肺动脉压力和管壁胶原及Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响,肺动脉壁Ⅰ和Ⅲ型胶原的平均积分吸光度值作为Ⅰ、Ⅲ型胶原的相对含量。结果：①低Ｏ２高ＣＯ２组（Ｂ组）大鼠肺动脉平均压９ＭＰＡＰ）显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）,颈动脉平均压（ＭＣＡＰ）无明显变化（Ｐ〉０．     

化学发光双抗夹心酶免法测定血清Ⅳ型胶原

以免疫家兔制备的抗人Ⅳ型胶原多抗包板,采用改良过碘酸钠法辣根过氧化物酶标记抗人Ⅳ胶原单抗,建立了一种血清Ⅳ型胶原的增强化学发光双抗夹心酶免测定法.实验结果表明方法较为灵敏、准确、稳定、特异,其最低检测限为30 μg/L,平均回收率为94.5％,批内和批间变异系数分别≤6.0％和11.6％.测定60例健康人,其参考值为160 μg/L,与进口的日本试剂盒相关性良好,因此可以作为临床血清Ⅳ型胶原放免测定法的参考替代方法.     

针对Ⅰ型及Ⅲ型前胶原基因的二联核酶的构建及体外活性研究

增殖性瘢痕组织中胶原蛋白的合成显著增加从而导致胶原的过度沉积。利用核酶特异地抑制前胶原基因的表达可减少胶原蛋白的合成,为瘢痕的研究和防治提供了新的思路。为研究用核酶抑制前胶原基因表达的可能及效果, 设计并构建了针对α₁(Ⅰ)型及α₁(Ⅲ)型前胶原基因的二个单价核酶串联的二联核酶基因真核表达载体,并对其体外切割活性进行研究。结果表明该二联核酶的切割效果明显,均能有效地切割底物,为进一步研究核酶对前胶原基因表达的抑制作用以及利用核酶防治瘢痕产生打下基础。      

人抗凝血酶Ⅲ转基因羊的外源基因漂移风险分析

目的:研究转基因羊发生基因漂移的可能性.方法:利用实时荧光定量PCR技术检测人抗凝血酶Ⅲ转基因羊及与其密切接触的野生型山羊、转乙肝表面抗原基因羊、转β-干扰素转基因羊、狗、鸡和鹅的血样中人抗凝血酶Ⅲ基因的含量.结果:人抗凝血酶Ⅲ转基因只在人抗凝血酶Ⅲ转基因羊血液中检测呈阳性.结论:人抗凝血酶Ⅲ基因没有在转基因羊和非转基因羊及其它动物间发生漂移,提示转基因羊对于环境是安全的.     

转基因克隆奶山羊大量生产重组人的抗凝血酶III蛋白质(rhATIII)

利用转基因克隆奶山羊乳腺生物反应器大量生产重组人的抗凝血酶III(rhATIII)蛋白质。其中包括: 筛选出人的抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的cDNA序列; 利用山羊的b－酪蛋白基因的启动区, 终止信号和Enterokinase蛋白酶酶切DNA序列, 构建在乳腺中特异表达rhATⅢ的表达载体。同时在转基因载体的末端连接一个新酶素筛选基因(Neomycin)。再以细胞转染、G418筛选和体细胞核移植(动物克隆)等过程, 最后获得含有人的抗凝血酶Ⅲ基因的转基因克隆奶山羊。我们共获得了5个原代转基因公羊。第一只克隆羊在出生后78 d死亡, 解剖表明: 羊的肺部和肾脏等器官有异常。其它克隆公羊经过与崂山种母羊交配, 得到转基因后代, 其中两个原代转基因羊的后代母羊已成熟、所获得的奶经蛋白质电泳证明: 转基因克隆羊后代奶中含有约60 kD大小的rhATⅢ糖蛋白; 经Elisa检测表明: 在奶中含有大量活性的rhATⅢ, 在来源于两个不同克隆公羊的后代母羊奶中的rhATⅢ含量分别为0.4 mg/L和3 g/L。此研究证明: 转基因奶山羊可以大量地生产具有很高活性的rhATⅢ。用这种方法生产的rhATⅢ通过蛋白质提纯, 制成注射针剂, 将可用于人的抗凝血酶III缺乏症的治疗、预防血栓和重大手术过程中的止血的作用等。