虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅰ突变体K3A—HWTX—I的化学合成与生理活性分析

采用固相Ｆｍｏｃ法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了春第３位赖氨酸被丙氨酸取代的虎纹捕鸟蛛毒素－Ｉ的突变体Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ｉ。合成的突变体用Ｅｄｍａｎ降解和电雾质谱进行鉴定。Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ｉ经谷胱甘肽系统进行氧化复性后通过离子交换和反相ＨＰＬＣ纯化。     

虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ突变体A1Y-HWTX-Ⅰ的固相合成和生物学活性测定

用芴甲氧羰基 (Fmoc)固相多肽合成的方法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了用酪氨酸 (Y)替代虎纹捕鸟蛛毒素 - (HWTX- )第一位丙氨酸 (A1 )的突变体 A1 Y- HWTX- .合成的突变体用 Edman降解和电喷雾质谱法进行鉴定 .活性分析结果证明 ,合成的 A1 Y- HWTX- 在含有谷胱甘肽的缓冲体系中氧化折叠后显示出与天然 HWTX- 完全相同的生物学活性 ,提示 Y替代 HWTX- 的 A1后并不明显影响 HWTX- 的活性部位和空间构象 ;A1与 HWTX- 生物学活性无关 .此外 ,将 Y引入 HWTX- 分子有助于利用碘标记方法研究 HWTX- 的作用机制     

蛋白质及多肽的C端分析

本文采用（异）硫氰酸化学法,以乙酸酐为活化试剂,四丁铵硫氰酸为偶联试剂,溴甲基萘为烷化试剂,将蛋白质或多肽的Ｃ端依次转化并裂解为ＡＴＨ－氨基酸,在２５４ｎｍ进行检测。分析了若干种天然的、基因工程表达的蛋白质或多肽,测定了不同长度的Ｃ端序列,并确证了Ｃ端的修饰及突变情况。为蛋白质和多肽的完整性、均一性,基因工程产品及合成多肽的质控提供了重要的Ｃ端信息。目前,可在１￣２ｎｍｏｌ水平上测定了３￣５个Ｃ端     

羧肽酶Y标记蛋白质羧基端方法的优化及应用（英文）

蛋白质水解是一种重要的翻译后修饰,它在许多生化过程(如细胞凋亡和肿瘤细胞转移等)中起着极其重要的作用。鉴定蛋白质水解位点可以进一步加深我们对这些生化过程的认识。尽管蛋白质氨基端标记方法和蛋白质组学在复杂生物体系中鉴定获得了许多蛋白质的水解位点,但这种方法存在固有的缺陷。羧基端标记方法是另一种可行的鉴定蛋白质水解位点的方法。本文优化了蛋白质羧基端生物酶标记方法,提高了亲和标记效率,从而可以更好地利用正向分离方法对蛋白质羧基端多肽进行分离并用质谱鉴定。我们用优化后的羧基端标记方法来标记大肠杆菌Escherichia coli复杂蛋白样品后鉴定到了120多个蛋白质羧基端多肽和内切多肽。在其所鉴定的蛋白质水解位点中,我们发现了许多已知和未知的位点,这些新的水解位点有可能在正常生化过程的调控中发挥着重要的作用。该研究提供了一个可以与蛋白质氨基端组学互为补充、可在复杂体系中鉴定蛋白质水解的方法。     

羧肽酶Y标记蛋白质羧基端方法的优化及应用

蛋白质水解是一种重要的翻译后修饰,它在许多生化过程 (如细胞凋亡和肿瘤细胞转移等) 中起着极其重要的作用。鉴定蛋白质水解位点可以进一步加深我们对这些生化过程的认识。尽管蛋白质氨基端标记方法和蛋白质组学在复杂生物体系中鉴定获得了许多蛋白质的水解位点,但这种方法存在固有的缺陷。羧基端标记方法是另一种可行的鉴定蛋白质水解位点的方法。本文优化了蛋白质羧基端生物酶标记方法,提高了亲和标记效率,从而可以更好地利用正向分离方法对蛋白质羧基端多肽进行分离并用质谱鉴定。我们用优化后的羧基端标记方法来标记大肠杆菌Escherichia coli复杂蛋白样品后鉴定到了120多个蛋白质羧基端多肽和内切多肽。在其所鉴定的蛋白质水解位点中,我们发现了许多已知和未知的位点,这些新的水解位点有可能在正常生化过程的调控发挥着重要的作用。该研究提供了一个可以与蛋白质氨基端组学互为补充、可在复杂体系中鉴定蛋白质水解的方法。     

虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ突变体K3A-HWTX-Ⅰ的化学合成与生理活性分析

采用固相Ｆｍｏｃ法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了其第３位赖氨酸（Ｋ３）被丙氨酸（Ａ）取代的虎纹捕鸟蛛毒素－Ⅰ的突变体Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ⅰ．合成的突变体用Ｅｄｍａｎ降解和电喷雾质谱进行鉴定．Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ⅰ经谷胱甘肽系统进行氧化复性后通过离子交换和反相ＨＰＬＣ纯化．活性分析结果表明,Ｋ３被Ａ取代后ＨＷＴＸ－Ⅰ的生物活性下降了８０％,提示Ｋ３与ＨＷＴＸ－Ⅰ的生物活性有一定的相关性     

酵母细胞外蛋白质和多肽的产生及分泌

白地霉(Geotrichum candidum)AS 2．198的突变株NX47和橙黄红酵母(Rhodotoru-ta aurantiacam)AS 2．280蛋白质的合成与分泌和多肽的合成均在培养前期与细胞生长同步进行。合成的蛋白质全部或大部分贮存在胞周间,并随即通过细胞壁从胞周间分泌到细胞外,培养基的组成和培养时间对蛋白质的组份无显著的影响。合成的多肽全部贮存在细胞内。突变株NX47缓慢地分泌蛋白质,快速分泌多肽。其分泌能力取决于分为三层的细胞壁结构。多肽在培养前期不分泌,直到进入对数生长后期,才通过原生质膜和细胞壁由细胞内迅速地分泌到细胞外。分泌时间比其合成滞后一天以上。菌株AS 2．280的细胞壁没有三层结构,却能快速分泌蛋白质,但不分泌多肽。     

七十述怀

钮经义教授是我国著名的生物化学家,中国科学院学部委员。主要从事蛋白质化学及多肽合成的研究,成绩卓著。50年代,钮教授在美国首创的部分肼解和酶解结合,解决了卵白蛋白、核糖核酸酶和烟草花叶病毒蛋白亚基C端排列次序问题,肯定了植物病毒中蛋白亚基的存在。回国后,开展多肽研究,在胰岛素人工合成中作出了重要贡献。他应本刊特约,撰文述怀。他对科研的执著追求及锲而不舍的顽强态度,给我们以激励与启发。     

质量肽谱在蛋白质结构研究中的应用

蛋白质的一级结构始终是生物学家关心的一个焦点,他们通常使用肽谱分析的方法测定蛋白质的一级结构。肽谱是一种技术,它使用特异性的酶或化学的方法,将蛋白质降解成小肽,然后进行分离和分析[1]。肽谱在蛋白质研究中起着重要的作用,它可以确证蛋白质的序列,用于蛋白质鉴定;鉴定翻译后的修饰及体外的化学修饰;检测单个氨基酸的变异(即突变);鉴定不同的蛋白构型;也可用于产生核苷酸探针检测ＤＮＡ文库;合成多肽诱导...     

盐胁迫下苜蓿中盐蛋白的诱导产生

盐胁迫下苜蓿叶片中蛋白质的合成受到抑制,而其离体叶绿体中蛋白质合成增强,ABA阻碍了后者的蛋白质合成。NaCl胁迫下,“松江”和“肇东”两品种的根和叶中均无新多肽出现。在盐敏感的“松江”品种离体叶绿体中,NaGl诱导70,65,60和43kD4种多肽产生,ABA诱导60和17kD两种多肽产生;在较抗盐的“肇东”品种离体叶绿体中,NaGl诱导83,80kD和43kD3种多肽产生,但100mmol/L NaCl并不诱导83kD多肽出现,ABA无明显作用。两品种的43kD多肽和肇东品种的80kD多肽都存在于类囊体膜上,而松江品种的60kD多肽则存在于叶绿体间质中。     

多肽向叶绿体的输入

绝大部分的叶绿体蛋白组份是在细胞器外合成后输入叶绿体的。它们是以含氨基端延长肽的前体形式合成的。近来的实验已证明,外源多肽与这些氨基端延长肽融合后也能被输入到叶绿体内,从而为利用遗传操作的方法改良重要的经济植物提供了令人兴奋的可能途径。 和线粒体一样,叶绿体也含有自己的遗传信息并足以进行蛋白质合成,但大多数的叶绿体蛋白是核DNA编码并在叶绿体外的细胞质核糖体上合成的(见参考文献1的综述)。实际上,叶细胞质蛋白合成的主要产物是叶绿体蛋白质的两种多肽组份即核糖-1,5-二磷酸羧化酶(rbe S)的小亚基和光捕获叶绿素a/b蛋白复合体(CAB)的组成多肽。在本篇综述中,我们将讨论目前已知的关于细胞质合成多肽输入叶绿体的机理以及最近一些证明外源多肽输入叶绿体的实验;另外还将讨论这种使外源多肽输入叶绿体能力的可能应用。     

抗溶葡萄球菌酶N端合成多肽抗体的制备与鉴定

为了制备抗溶葡萄球菌酶N端合成多肽抗体,合成了溶葡萄球菌酶(lysostaphin)分子的3-13位的11个氨基酸的多肽(THEHSAQWLN),并利用戊二醛双功能试剂将人工合成多肤成功地与KLH进行偶联.免疫新西兰兔制备抗lysostaphin合成多肽的抗体,并经亲和层析进行了纯化.对此抗体进行鉴定的结果表明,抗溶葡萄球菌酶合成多肽抗体可与重组溶葡萄球菌酶分子发生特异性反应,并可用于蛋白免疫印迹.该抗体的制备为使用亲和层析纯化溶葡萄球菌酶提供了有用的配基.     

新型人白细胞介素－2突变点的分析鉴定

对新型人白细胞介素-2(IL－2－ser－125)进行了精制和纯度指标的鉴定。蛋白质N端序列分析表明产品中l／3部分N端缺失Met,这种微观不均一性在等电聚焦和毛细管电泳中有所反映。此外,对新型人IL－2的含点突变残基的多肽进行氨基酸序列分析,证实确由Cys－125突变成ser。     

序列搜索算法在多肽质谱解析中的应用

序列搜索算法由三部分组成：搜索过程、搜索得到多肽的各氨基酸残基的评分及两端（N端、C端）搜索得到的多肽的合并过程.通过若干实际多肽质谱的解析,结果表明,该算法对多种序列专一性离子并存的未知多肽质谱的解析,可获得较满意结果.尤其是它的评分方式及标准,比较适合多肽质谱图的实际情况,可最大限度地判断解析结果的准确度,为从事用质谱测定多肽一级结构的分析工作者提供了一比较简便且可靠的手段.也为质谱法快速测定蛋白质或多肽序列及其在生物学中的普及提供了一条方便之路.     

植物中的“多肽激素”

植物激素是指在植物体的某一组织内合成后、转运到作用部位并对生长发育起调节作用的一类微量有机物质。目前公认的植物激素有５大类,即生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类、脱落酸和乙烯。此外,油菜素内酯类、多胺类也被认为是新型的植物激素。在化学结构上,上述几类植物激素都不是蛋白质或多肽。但近年来,在植物体内相继发现了一些具有调节植物生理过程和传递细胞信号功能的活性多肽,称其为“多肽激素”,本文简要介绍以下４种。１　系统素系统素（ｓｙｓｔｅｍｉｎ）是从受伤的番茄叶片中分离的一种由１８个氨基酸组成的多肽,它是植…     

用有限酶切法分析蛋白质的氨基酸序列

报道了一个通过有限酶切蛋白质产生多肽片段的方法.蛋白质经单向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离和用考马斯亮蓝短暂染色后,切下所需的蛋白质带,将其放入另一个SDS-PAGE凝胶的样品槽内,在电泳过程中该蛋白质被蛋白酶如蛋白酶V8降解,所产生的多肽片段随之被分离.电泳结束后,将多肽片段电印迹至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene difluoride,PVDF)膜上.这些多肽片段从PVDF膜上切下后可以直接被用于分析氨基酸序列.该方法能广泛适用于分析一般蛋白质和N端被修饰蛋白质的氨基酸序列.     

随机RNA库筛选技术的发展与展望

随着分子生物学的发展，人们对体外分子进化有了进一步认识，把组合化学策略与模拟进化思想结合起来，构建了由各种各样合成分子组成的数目庞大的组合库（包括多肽、氨基酸、蛋白质、寡核苷酸），这些组合库的构建及筛选不仅适合于筛选药物先导化合物，而且适用于研究、诊...     

小蛋白质富集法鉴定酿酒酵母“漏检蛋白”

小蛋白质 (Small proteins,SPs) 是由小开放阅读框 (Short open reading frames,sORFs) 编码长度小于100个氨基酸的多肽。研究发现小蛋白质参与了基因表达调控、细胞信号转导和代谢等重要生物学过程。然而,生命体中大多数的已注释小蛋白质尚缺少蛋白水平存在的实验证据,被称为漏检蛋白 (Missing proteins,MPs)。小蛋白质的高效鉴定是其功能研究的前提,也有助于挖掘“漏检蛋白”。文中采用小蛋白质富集策略鉴定到72个酵母小蛋白质,验证9个“漏检蛋白”,发现低分子量、高疏水性、膜结合、弱密码子使用偏性及不稳定性是蛋白漏检的主要原因,对进一步的技术优化具有指导意义。     

多肽固相合成的研究进展

多肽固相化学合成法是蛋白质研究领域非常重要的研究方法之一,主要可以分为Boc方法和Fmoc方法,在生物药物、蛋白质工程、免疫学等研究中得到了广泛的应用。该文论述了多肽固相合成法的原理,比较了两种典型合成方法的优缺点,介绍了适用于该方法的多肽种类,提出了多肽合成过程中存在的问题与解决策略,最后展望了多肽合成法的应用前景,以供相关领域的研究人员参考。     

上海生化所刘新垣课题组获重要成果 白细胞介素—2研制通过鉴定

中国科学院上海生物化学研究所刘新垣课题组,最近在基因工程多肽药物研究领域获重要成果。他们承担的“七五”科技攻关与“八六三”高科技项目——“天然及新型白细胞介素—2”,近期完成实验室研制工作,并在中国科学院主持的院级鉴定会上,获得来自全国各地专家们的高度评价。白细胞介素是一类能刺激或促进白细胞增殖的蛋白质.其中白细胞介素—2能增强免疫系统中某些细胞的活性,具有很强的抗肿瘤与抗病毒作用,成为当今国际上极为“热门”的研究对象。少数发达国家已用生物基因工程手段生产出新型白细