IGF—I及其受体,IGF结合蛋白—2和LH受体mRNA在卵泡中的表达

利用原位杂交和原位ＤＮＡ－３’末端标记的方法研究了胰岛素样生长因子－Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）,ＩＧＦ－Ｉ受体,ＩＧＦ结合蛋白－２,和促性腺激素受体的信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）在不同生长与闭锁阶段的大鼠卵巢卵泡中表达的变化,结果表明：ＩＧＦ－Ｉ主要在正常生长的初级卵泡,窦前卵泡和小窦状卵泡中表达。在各生长与成熟阶段的卵泡中都检测到ＩＧＦ－Ｉ受体ｍＲＮＡ,闭锁卵泡的ＩＧＦ－Ｉ受体表达降低,窦前与窦状的生长和闭锁     

IGF-Ⅰ及其受体、IGF结合蛋白-2和LH受体mRNA在卵泡中的表达

利用原位杂交和原位DNA－3’末端标记的方法研究了胰岛素样生长因子河（IG－I）、IGF－I受体、IGF结合蛋白－2、和促性腺激素受体的信使核糖核酸（mRNA）在不同生长与闭锁阶段的大鼠卵巢卵泡中表达的变化。结果表明：IGF－I主要在正常生长的初级卵泡、窦前卵泡和小窦状卵泡中表达。在各生长与成熟阶段的卵泡中都检测到IGF－I受体mRNA,闭锁卵泡的IGF－I受体表达降低。窦前与窦状的生长和闭锁卵泡均表达IGFBP－2。促卵泡激素（FSH）受体在窦前和小窦状卵泡的表达水平比其在大卵泡中的高。窦前与小窦状卵泡仅在膜细胞中表达黄体生成素（LH）受体mRNA,大卵泡的膜细胞与颗粒细胞均表达LH受体,在闭锁卵泡中仅在膜细胞中观察到LH受体的信号。综上结果,提示IGF－I,IGF－I受体和FSH受体在窦前和小窦状卵泡中的协同表达对卵泡的早期发育有重要作用。LH受体mRNA特异地在大卵泡的颗粒细胞中表达可能与优势卵泡选择相关。     

血管紧张素Ⅱ在小鼠卵泡闭锁中的作用

应用幼年小鼠经孕马血清促性腺激素（pregnant mares serum gonadotropin,PMSG)处理的动物模型,研究了卵泡从发育到闭锁动态变化过程中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的作用。结果表明：（1）24日龄小鼠给予PMSG（10IU/只）后6d时,卵巢中出现大量闭锁卵泡,颗粒细胞DNA琼脂糖电泳显示了梯形条带;（2）随卵泡闭锁发生,卵巢AngⅡ含量增加;（3）AngⅡ显著拮抗FSH刺激颗粒细胞雌二醇生成的作用。我们认为,AngⅡ参与了对小鼠卵泡闭锁的调节。     

闭锁卵泡中肾素—血管紧张素质系统的变化

目的：探讨卵巢局部的肾素－血管紧张素系统（RAS）在卵泡闭锁中的作用。方法：应用卵巢细胞双室培养,放射免疫测定（RIA）及免疫组化方法研究猪卵巢的健康卵泡和闭锁卵泡的颗粒细胞和卵泡内膜细胞与RAS的关系;观察了血管紧张素Ⅱ（AngⅡ)拮抗剂Saralasin及血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂Captopril的作用。结果（1）与健康卵泡相比较,闭锁卵泡的卵泡液及卵泡内膜细胞培养液中的AngⅡ浓度明显升高,肾素浓度则明显降低;而颗粒细胞培养液中的AngⅡ和肾素浓度均无明显改变;（2）闭锁卵泡切片的AngⅡ,2型血管紧张素Ⅱ受体（AT2）染色明显强于健康卵泡;AngⅡ和AT2水平在双室培养的闭锁卵泡的卵泡内膜细胞中明显强于健康卵泡的卵泡内膜细胞;健康和闭锁卵泡的颗粒细胞中的AngⅡ,AT2水平变化不大;（3）双室培养中加入Saralasin或Captopril培养48h后,（a)与健康卵泡相比,闭锁卵泡的卵泡内膜细胞培养液中的AngⅡ浓度显降低,肾素浓度明显升高;（b)健康和闭锁卵泡的卵泡内膜细胞AngⅡ和AT2免疫组化染色均呈现下降,（c)RIA结果显示,健康和闭锁卵泡的颗粒细胞培养液中的AngⅡ和肾素浓度无明显变化;免疫组化结果显示,颗粒细胞的AngⅡ,AT2水平亦无显改变。结论：卵泡闭锁与卵巢RAS密切相关,AngⅡ和AT2是卵泡闭锁的重要相关因子;卵泡闭锁过程中卵巢局部的RAS变化主要发生在卵泡内膜细胞;Saralasin和Captopril可能通过调节卵巢RAS而具有抑制卵泡闭锁的作用。     

猪分离卵泡体外培养过程中Fas/FasL对颗粒细胞凋亡的作用

从猪卵巢分离完整有腔卵泡,按质量分为3类：健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡。猪分离卵泡经眼观检查后再行石蜡切片和HE染色,形态学研究表明,眼观检查对于健康卵泡的判定准确率为92％。取健康卵泡按直径大小分为3组：直径＞5 mm大卵泡组、3～5 mm中卵泡组和≤3 mm小卵泡组。卵泡培养8、16和24 h,以Annexin-V FITC/PI双染流式细胞仪检测壁层颗粒细胞凋亡情况,结果发现培养卵泡颗粒细胞的总凋亡率（早期凋亡＋晚期凋亡）在8 h时就已达到70%以上,至24 h则为81.1%～94.6%。收集无血清培养0、8、16、24、48和72 h的卵泡颗粒细胞,用real time PCR SYBRgreen法检测各组卵泡颗粒细胞FasL和Fas mRNA相对表达量。各级卵泡颗粒细胞中FasL mRNA水平随培养时间显著增加,培养至24 h达最大值（P＜0.05）;小卵泡颗粒细胞FasL mRNA水平均高于大、中卵泡组。各级卵泡颗粒细胞Fas mRNA相对表达量在培养前（0 h）差异不显著,8 h时显著增加,48 h达最大值。该实验表明,所用无血清卵泡培养体系可有效诱导卵泡颗粒细胞的凋亡,细胞凋亡是卵泡闭锁的主要诱因,但卵泡闭锁程度可因卵泡大小而异,小卵泡似乎更容易发生闭锁。     

中国荷斯坦奶牛卵巢卵泡细胞的免疫组织化学研究

目的和方法应用七种特异性抗体(sGCα、sGCβ、nNOS、FOXO1、PDE4、PKB/Akt和Inhibinα)对中国荷斯坦奶牛卵巢卵泡细胞进行免疫组织化学定位。结果表明PKB主要存在于原始卵泡、腔前卵泡和有腔卵泡颗粒细胞,黄体细胞中没有检测到;FoxO1主要位于原始卵泡、腔前卵泡和有腔卵泡颗粒细胞;PDE4仅位于部分有腔卵泡的颗粒细胞;抑制素α、nNOS、sGCα和β存在于各级卵泡的颗粒细胞层,其中sGCα和β主要存在于原始卵泡和腔前卵泡的颗粒细胞。结论这七种蛋白的阶段和细胞特异性表达表明它们与中国荷斯坦卵巢卵泡的发育、闭锁和黄体化过程有着密切的关系。     

发情周期不同时期猪卵泡颗粒细胞凋亡的观察

为探讨猪发情周期不同时期卵泡发育和闭锁的规律及机理,本实验通过TUNEL原位标记,H,E．染色以及放射免疫测定等手段研究了猪发情周期不同阶段卵巢表面各类卵泡数量的变化。各类卵泡中颗粒细胞的凋亡比例,闭锁卵泡的形态变化以及发情周期各阶段血清孕酮及雌二醇水平的变化等问题。卵泡的总数在发情间期最多,为26．8个／卵巢,发情期最少,为7．4个／卵巢。小放泡的数量在发情间期最多。为15个／卵巢,在发性期数量最少,为5．7个／卵巢。中等卵泡数量在发情间蜞多,为8．5个／卵巢,在发情后期卵巢中无中等卵泡。大卵泡的数量在发情前期最多,为7．4个／卵巢,在发情后期最少,为0个。小卵泡的颗粒细胞凋亡比例（各时期平均21．03％）显著高于大卵泡,在发情后期显著降低。中等卵泡的颗粒细胞凋亡比例（平均16．6％）在发情前期显著低于其它各期。大卵泡的颗粒细胞凋亡比例（平均11．2％）在发情周期各阶段无显著差异,均显著低于中等卵泡和小卵泡。     

Annexin I在PCOS大鼠颗粒细胞中的表达及意义

目的：探讨膜联蛋白I（AnnexinI）在多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠卵泡颗粒细胞的表达及生物学意义。方法：采用免疫组织化学方法及灰度值测定AnnexinI在PCOS组和对照组的卵泡颗粒细胞中的表达。结果：AnnexinI在两组中的各级卵泡颗粒细胞中均有表达,PCOS组AnnexinI在窦状卵泡中表达显著高于对照组（P〈0．05）。结论：PCOS组AnnexinI在窦状卵泡颗粒细胞的表达上调,且PCOS中窦状卵泡颗粒细胞的凋亡增加,说明AnnexinI参与了卵巢颗粒细胞的凋亡过程,并且发挥了重要作用。     

大熊猫卵泡及卵母细胞发育的研究

本文用５只大熊猫卵巢作了连续切片观察,测量分析了卵泡、卵母细胞和透明带的生长发育与成熟过程,以及它们之间的相互关系：（１）大熊猫卵泡及卵母细胞具哺乳类动物双相生长的共同特点,在生长过程中,仅 极少数优势卵泡被确定下来,其余卵泡均在不同时期成为闭锁卵泡,特别在发情期闭锁卵泡黄体化及囊肿现象居多。（２）透明带出现在单层卵泡细胞呈低柱状至柱状期,随着卵泡及卵母细胞的增长,透明带缓慢增厚。     

促乳素抑制培养的大鼠颗粒细胞中卵泡素介导的组织纤溶酶原激活因子的表达

本文主要是观察促乳素（ＰＲＬ）是否曩体外培养的大鼠颗粒细胞中,组织纤溶酶原激活因子（ｔＰＡ）和Ｉ型纤溶酶原激活因子抑制因子（ＰＡＩ－Ｉ）基因表达间的协调作用。我们采用了多种方法,例如ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹等,来检测ＰＲＬ对ｔＰＡ和ＰＡＩ－Ｉ基因表达的作用。结果证实：（１）在离体条件下促乳素（ＰＲＬ）能刺激颗粒细胞（ＧＣ）中ＰＡＩ－Ｉ ｍＲＮＡ的合成,而ＦＳＨ无此作用。但ＦＳＨ可与ＰＲＬ协同增加