牛泡沫病毒反式激活因子在内部启动子上应答元件的研究

泡沫病毒的基因转录依赖至少两个不同的启动子：ＬＴＲ调节病毒结构蛋白的表达,而内部启动子（ＩＰ）则起始调节蛋白ｍＲＮＡ的转录。牛泡沫病毒（ＢＦＶ）在ｅｎｖ与３’ＬＴＲ之间有两个重叠的开放阅读框架ｏｒｆ－１和ｏｒｆ－２,分别编码ＢＦＶ ＯＲＦ－１、ＯＲＦ－２等多种调节蛋白。这此蛋白中ＢＦＶ ＯＲＦ－１为转录激活因子,称为Ｔａｓｏ Ｔａｓ对ＬＴＲ及ＩＰ均有反式激活作用。ＢＦＶ中第二类启动子ＩＰ的存在反映     

牛泡沫病毒两类启动子活性的比较和机制探讨

牛泡沫病毒 (Ｂｏｖｉｎｅｆｏａｍｙｖｉｒｕｓ,ＢＦＶ)属反转录病毒科泡沫病毒属。其基因组两端为长末端重复序列 (Ｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ,ＬＴＲ) ,中间部分除ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ三个结构基因外 ,还有两个重叠的读码框ＯＲＦ 1、2 ,起始于ｅｎｖ基因 3′端 ,终止于 3′ＬＴＲ ,编码Ｂｏｒｆ 1、Ｂｏｒｆ 2等多种调节蛋白[1～ 3 ] 。其中Ｂｏｒｆ 1为ＢＦＶ的反式激活因子 ,可显著激活ＢＦＶＬＴＲ启动子起始的基因表达。近年来 ,在泡沫病毒家族成员人泡沫病毒 (Ｈｕｍａｎｆｏａｍｙｖｉｒｕｓ,ＨＦＶ)和猴泡沫病毒(…     

牛免疫缺陷病毒长末端重复序列(BIV一LTR)在大肠杆菌中的启动子功能

牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）的长末端重复序列（ＬＴＲ）含有病毒的启动子,调控病毒在真核细胞中的表达。我们将ＢＩＶＬＴＲ与萤火虫荧光素酶基因连接构建成重组质粒ｐＢＩＶ一Ｌｕｃ,该质粒能在Ｅｃｏｌｉ中有效地表达出荧光素酶的活性,从而证明ＢＩＶＬＴＲ在大肠杆菌中也具有启动子功能。Ｍｕｎｇｂｅａｎ核酸酶作图分析发现,ＢＩＶＬＴＲ在Ｅｃｏｌｉ中的转录起始位点位于Ｕ_３区,而不是在真核细胞中的Ｕ＿３一Ｒ交界处。同时我们也证实了ＢＩＶＬＴＲ在Ｅ,ｃｏｌｉ中仍可被ＢＩＶｔａｔ蛋白特异性地反式激活,为研究ｔａｔ蛋白的作用机制提供了一条新的途径。     

牛免疫缺陷病毒长末端重复序列（BIV—LTR）在大肠杆菌中的启动子功能

牛免疫缺陷病毒的长末端重复序列含有病毒的启动子,调控病毒在真核细胞中的表达。我们将ＢＩＶ ＬＴＲ与萤火虫荧光素酶基因连接构建成重组质粒ｐＢＩＶ＝Ｌｕｃ,该质粒能在Ｅ．ｃｏｌｉ中有效地表达出荧光素酶的活性,从而证明了ＢＩＶ ＬＴＲ在大肠杆菌中也具有启动子功能。     

泡沫病毒的基因内部启动子

泡沫病毒的基因内部启动子刘佳建耿运琪（南开大学生命科学学院,天津３０００７１）关键词泡沫病毒内部启动子反式激活因子泡沫病毒在分类上属反转录病毒科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）的泡沫病毒属（Ｓｐｕｍａｖｉｒｕｓ）,因其感染细胞后可诱导产生类似泡沫的大量空...     

棉花曲叶病毒反式作用因子AC2的功能初探

有关非洲木薯花叶病毒（ACMV）、番茄金色花叶病毒（TGMV）的研究表明,双生病毒编码的反式作用因子AC2反式激活病毒链基因启动子的瞬时表达。以棉花曲叶病毒（CLCuV)侵染的烟草叶片组织总的DNA为模板,通过聚合酶反应扩增CLCuV的AC2基因片段并插入克隆载体。将AC2置于CaMV35S启动子下构建了瞬时表达载体。通过基因他法将质粒载体导入烟草（Nicotiana tabacumL.)和棉花（Gossypium hirstumL.)叶片细胞中进行瞬时表达,结果表明,在反式作用因子AC2的激活下,病毒链基因启动子驱动的GUS活性明显增强,然而激活后的病毒链基因启动子的活性仍低于互补链基因方向启动子;其表达方式与互补链基因启动子相似,即在叶肉及叶脉维管组织均有较高的活性。还探讨了AC2在土壤杆菌介导的转基因植物中的表达行为。     

家蚕核多角体病毒解旋酶基因启动子功能区域缺失分析

杆状病毒DNA解旋酶是病毒复制所必需的。瞬时表达分析显示 ,家蚕核多角体病毒解旋酶基因启动子属于延迟早期基因启动子。通过PCR技术在该启动子区产生的一系列缺失分析表明 ,解旋酶基因启动子的基础转录调控区主要位于ATG上游 - 5 1 0～ - 4 1 0bp之间。当只保留ATG上游 98bp区段时 ,仍可测到该启动子的基础活性。在病毒因子存在下 ,将启动子区域删除到ATG上游 - 4 1 0bp时 ,对启动子活性影响不大 ;若继续删除 ,则其活性显著下降。据此推测对病毒因子响应的启动子区段应主要位于ATG上游 - 4 1 0～ - 30 9bp之间     

蟑螂浓核病毒(pfDNV)非结构基因启动子的活性研究

为了研究蟑螂 Periplaneta fuliginosa 浓核病毒(pfDNV)非结构基因转录调控的机制,用 PCR 的方法从蟑螂浓核病毒基因组 DNA 中扩增了非结构蛋白基因 ns3 翻译起始密码子上游 325 bp 的启动子序列;并进一步以其作为模板,利用聚合酶链式反应技术,得到 6 个不同长度的启动子片段和两个定点突变体片段,构建由其驱动的萤火虫荧光素酶基因报告质粒,在 脂质体介导下转染多种昆虫细胞,体外分析了该启动子的活性。结果表明：该 325 bp DNA 片段在 Sf9,S2,Tn368 及 Ld652 细胞中均具有较高的启动子活性;其转录起始基序 CAGT 对维持该启动子的基本转录活性而言是必需的,而 TATA 盒对此则是非必需的,但它的存在可显著提高启动子的转录活性。同时,我们还发现,病毒非结构蛋白 NS1 对该启动子具有反式激活作用,并且这种激活作用的大小取决于 NS1 蛋白在细胞中的浓度。     

杆状病毒囊膜糖蛋白gp64基因启动子活性分析

GP64是杆状病毒在其发育循环第一时相所产生的芽生型病毒粒子（budded voirus,BV)的特异性囊膜糖蛋白。它在病毒入侵细胞过程中具有重要作用。为了探明杆状病毒gp64基因的表达调控。从所克隆的BmNPV和AcMNPVgp64基因ATG上游437-439bp启动子的序列分析发现。该启动子同时具有早期和晚期转录模体,将所构建的该启动子控制下荧光素酶报告基因（Luc)的非融合表达质粒分别转染Bm-N和Sf-21细胞进行瞬间表达分析,BmNPVgp64启动子能被允许宿主Bm-N细胞RNA聚合酶Ⅱ所识别,AcMNPVgp64启动子既能被允许宿主Sf-21又能被非允许宿主Bm-N细胞RNA聚合酶Ⅱ所识别,同时,这两个启动子的转录活性在各自的允许宿主细胞中被相应的病毒因子所反式激活2.4-4倍。将家吞核多角体病毒同源重复序列3（BmNPV homologous region-3,hr3)克隆到该启动子控制下的Luc报告基因下游,用所构建的质粒分别转染细胞,瞬间表达分析结果表达,BmNPVhr3能分别增强该启动子在Bm-N和Sf-21细胞中的转录活性13-22倍和7000-14000倍以上,同时,相应的病毒因子能反式激活插入了hr3的gp64启动子在各自允许宿主细胞中转录活性73-78倍,这暗示着BmNPVhr3除了具有病毒DNA复制原点和增强子的功能外,它在病毒的反式激活过程中起着重要的作用。     

猴泡沫病毒SFV-1前病毒pol基因克隆及序列分析

采用nested-PCR从猕猴肾组织细胞中获得同源性较高、具有高度保守序列的、长度为465 bp 大小的猴泡沫病毒SFV-1的 pol 基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T载体中,并对其进行序列分析,分析结果表明所克隆的基因片断为猴泡沫病毒SFV-1 pol 基因片段,与文献中已发表的来源于灵长类动物SFV-1、SFV-1A、SFV-1B、SFV-2、 SFVmac、SFVkm的 pol 基因核苷酸序列进行比对,显示SFVkm1与上述病毒 pol 基因核苷酸同源性分别为91.06%、90.59%、90.82%、90.21%、89.41%、91.53%.对 pol 基因克隆和序列分析是了解和掌握SFV病毒分子流行病学及其变异趋势的重要手段,7 种不同基因型的泡沫病毒的系统进化树分析显示了SFVkm1与它们之间的相互联系.     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Principles of organization and evolution of systems of regulation of functions

Evolution of living organisms is closely connected with evolution of structure of the system of regulations and its mechanisms. The functional ground of regulations is chemical signalization. As early as in unicellular organisms there is a set of signal mechanisms providing their life activity and orientation in space and time. Subsequent evolution of ways of chemical signalization followed the way of development of delivery pathways of chemical signal and development of mechanisms of its regulation. The mechanism of chemical regulation of the signal interaction is discussed by the example of the specialized system of transduction of signal from neuron to neuron, of effect of hormone on the epithelial cell and modulation of this effect. These mechanisms are considered as the most important ways of the fine and precise adaptation of chemical signalization underlying functioning of physiological systems and organs of the living organism