人端粒酶催化亚基(hTERT)基因及其表达调控

端粒酶是一种核糖核蛋白复合物 ,能引起染色体的末端结构端粒的完全复制。端粒作为一种保护性结构 ,是由短的重复ＤＮＡ序列组成。在人体中这种序列为ＴＴＡＧＧＧ ,其平均长度为 5～ 1 5ｋｂ[1] ,细胞每经过一次分裂端粒缩短 50～ 2 0 0ｂｐ ,这种分子侵蚀作用使得细胞的分裂次数有了生理限制 ,从而限制了体细胞的寿命。一种逃避这种限制的机制是端粒酶的激活 ,因为端粒酶能弥补端粒的缩短 ,因此端粒酶被认为与细胞的永生化、肿瘤发生和细胞衰老密切相关。近来 ,组成人端粒酶复合物的 3个主要成分已被鉴定。人端粒酶ＲＮＡ成分 (ｈＴＲ)提…     

人端粒酶催化亚基基因启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体

为获得端粒酶阳性肿瘤细胞特异表达载体用于癌症的基因治疗 ,克隆并构建了人端粒酶催化亚基 (hTERT)基因启动子调控的萤光素酶报告载体 .用脂质体转染法将其分别转染肿瘤细胞和正常细胞 ,检测其在肿瘤细胞和正常细胞中的转录活性 .hTERT启动子在所检测的 4种端粒酶阳性的肿瘤细胞中具有明显的转录活性 ,平均为阳性对照的 4 4 3% ;而在端粒酶阴性的正常人胚肺成纤维细胞中则无明显的转录活性 .提示hTRET启动子的转录活性在端粒酶阳性的肿瘤细胞中明显上调 ,由hTERT启动子构建的载体可能是一种新颖和有前景的肿瘤细胞特异性表达的基因治疗载体     

端粒酶逆转录酶基因的结构特点及转录调控

调节端粒酶活性的最主要成份是端粒酶逆转录酶（hTERT) ,它往往在肿瘤发生的早期巳表达,故对其研究具有重大的临床意义,近年hTERT基因启动子区巳克隆鉴定,研究发现在其核心启动子区含有多个转录因子结合位点,体内外的转录因子结合在这些位点和“CPG岛”甲基化、组蛋白去乙酰化以及hTERT转录变异体的自身调节等构成了对hTERT基因转录调控的复杂系统。研究hTERT基因的转录调控将对肿瘤的发生发展、诊断和治疗提供重要的帮助。     

中国人端粒酶催化亚基(hTERT)基因第六内含子VNTR多态性研究

端粒酶的激活在肿瘤发生、衰老以及细胞永生化过程中起重要作用,端粒酶催化亚基(hTERT)的表达是诱导端粒酶活性的限制性步骤,hTERT的表达受到复杂的调控。hTERT基因组全长40kh,包含16个外显子及15个内含子,其中,在第2和第6内含子中各存在2个可变数目串联重复(VNTR)多态性序列(VNTR2—1st、VNTR2—2nd以及VNTR6—1st和VNTR6—2nd),在第12内含子存在另一个单态性串联重复序列。通过对北京地区210例汉族健康人群hTERT基因第6内含子中36-bpVNTR6—1st的多态性进行调查研究．结果在调查人群中观察到18、20、21、22、23、26和35次重复共7种等位基因型以及14种基因型。基因型频率分布符合Hardy—Weinberg平衡。与韩国浦山地区调查人群类似,20、22及35次重复为最常见的等位基因型,这3种等位基因型频率占调查人群总数的94．76％。除了35次重复等位基因型频率与浦山地区人群存在差异外,其他基因型频率差异不显著。此外,除了在部分重复22次的等位基因型中VNTR5′端与浦山地区人群相同外,其他等位基因型中,北京地区汉族人VNTR6—1st5′端均存在53bD插入片段,显示出不同人种vNTR6—1st周边序列的差异性。北京地区汉族正常人群hTERT VNTR基因多态性资料为研究多态性与肿瘤或衰老的相关性提供了资料。     

基因表达的转录调控的研究进展

基因表达的转录调控的研究进展刘志毅,崔勤,刘耕陶（中国协和医科大学,中国医学科学院药物研究所北京１０００５０）基因表达调控是分子生物学研究的前沿和核心领域。基因表达可在不同水平上进行调控。其中,转录水平的调控是表达调控的关键环节,也是当前研究的重点。...     

肿瘤细胞中端粒酶催化亚基hTERT基因启动子结合因子的检测

为了研究端粒酶催化亚基ｈＴＥＲＴ基因在癌变细胞中组成型表达的调控机制,采用凝胶阻滞电泳（ＥＭＳＡ）实验方法检测人粒系白血病细胞ＨＬ－６０、人红系白血病细胞Ｋ５６２、人肺癌细胞Ａ５４９、人肝癌细胞ＨｅｐＧ２及正常人肺成纤维细胞２ＢＳ等体外传代的肿瘤和正常二倍体细胞核提取物中与ｈＴＥＲＴ启动子核心序列结合的核因子活性。结果在４种实验肿瘤细胞中均可检测出与ｈＴＥＲＴ基因启动子结合的核因子活性,而正常二倍     

HLA分子表达的转录调控及其意义

HLA分子是免疫应答过程中的重要分子,其表达受到多种因素的影响,调控HLA基因表达的主要环节在转录水平,转录起始点上游250bp中顺式作用元件和反式作用因子的相互作用是影响HLA基因转录的重要因素。了解HLA分子表达的复杂调控机制在免疫学中有着重要的理论和实用价值。     

人类β珠蛋白基因簇表达的转录调控

人类β珠蛋白基因簇的表达具有明显对空调控特征,即具有严格的红系组织特异性和不同发育阶段特异性,同时尚需精确调控,以使α／β珠蛋白链合成比趋向平衡并定量聚合成功能蛋白Ｋ血红蛋白,因此,它是研究真核基因表达调控及基因表达与细胞分化关系的理想模型,本文拟综述在转录水平人类β珠蛋白基因表达调控研究的进展,产对该领域的发展方向进行预测,以期逐步深入研究并最终阐明其表达调控机制,并籍此文报道近年来我们在此领域     

原核生物转录起始的负调控

原核生物转录起始是多个反应组成的动力学过程,每一个反应特别是其中一个或几个限速步骤往往成为转录因子的调节点,原核生物阻遏蛋白介导的负调控因启动子而异,包括抑制RNA聚合酶与启动子结合、抑制开放复合物形成、抑制启动子清空等多种机制,不同的阻遏机制与被调系统启动子自身的特性相适应。     

端粒酶催化亚基基因在小鼠 胚胎发育早期的转录活性

用 RT-PCR 引物分别扩增成年昆明 (KM) 小鼠睾丸、脾脏、肾脏、肝脏和胸腺组织的总 RNA 发现,端粒酶催化亚基基因 tert 在这些组织中都有转录,目标产物正确组装到 PMD 18-T 载体后测序,结果与已知 cDNA 序列一致 . PMSG/hCG 超数排卵方法获得 KM 小鼠成熟卵母细胞和 CZB 溶液体外培养的胚胎 (KM ♀× KM ♂ ) ,用酸性 Tyrode's 溶液消化透明带后,采用巢式 RT-PCR ,同时分析 tert 基因和持家基因 hprt 的转录发现,对于单个样品来说 , 全部卵母细胞 (15 h-post hCG , 10/10) 都存在 hprt 转录本,其中,只有 40% (4/10) 还同时存在 tert 转录本 . 原核形成初期 (20 h-post hCG , 6/6) 和原核晚期 (30 h post-hCG , 8/8) 的受精卵,以及发育至 2-C 早期的胚胎 (35 h-post hCG , 7/7) 都不转录 tert 基因,只有 hprt mRNA 存在; 2-C 晚期 (50 h-post hCG) 时,两个基因同时转录 (4/8) 和一个基因单独转录 (4/8) 的胚胎各占 50% ;从 4-C 阶段 (65 h-post hCG , 4/4) 开始,包括 8-C 阶段 (75 h-post hCG , 4/4) ,桑椹胚阶段 (93 h-post hCG , 4/4) ,直至囊胚阶段 (118 h-post hCG , 4/4) ,所有的胚胎都同时转录 tert 和 hprt 基因,而且转录水平明显升高 . 以 20 枚胚胎量为模板进行 RT-PCR 发现,原核早期,原核晚期的胚胎中仍然没有 tert 基因转录,只有 hprt mRNA ,但是,在 2-C 早期胚胎中同时检测到了 hprt 和 tert 两种 mRNA. 结果表明,持家基因 hprt 在成熟卵母细胞受精前后,以及胚胎早期发育过程中均存在转录本 . 40% 卵母细胞中存在的 tert mRNA 在受精后很快降解,检测不到;胚胎基因组在 2-C 早期开始转录 tert mRNA ,转录水平逐渐上升 . 结果暗示,小鼠胚胎的基因组 DNA 在 2-C 早期开始启动,功能基因 tert 也在此时开始转录,可能与胚胎发育初期的染色体保护有关 .     

高等植物中外源基因表达的转录后调控

转基因植物是研究高等植物中基因表达调控的重要手段和对象,高等真核生物中基因表达的灵活性多样性与转录后调控密切相关。本文着重阐述RNA的自身结构与代谢调控之间的关系,分别从5′端帽子结构、先导序列、3′末端序列及poly(A)尾巴、内含子序列、不稳定序列,使用的密码子等六个方面说明RNA的特定结构对其稳定性及翻译活性的影响。     

用生物信息学方法寻找肝癌特异性表达基因转录调控模式

为了对肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的分子发病机理进行研究,首先对肝癌基因表达谱数据用t-检验算法进行了分析,找到了肝癌中特异性表达基因(characteristicgenes).然后把这些基因结合已知的肝HNF家族转录因子染色质免疫共沉淀结合DNA启动子芯片(ChIP-chip)实验数据用SAEM算法进行分析,得到了肝癌特异性表达基因的转录调控关系,并寻找到了多个HNF家族转录因子调控单基因的转录调控模式.结果表明HNF家族转录因子对大量具有重要功能的肝癌特异性表达基因进行了转录调控,并且多个HNF家族转录因子调控单基因可以形成前馈环和多输入调控等模式.     

去乙酰化酶SIRT1的表达及活性调控机制

SIRT1是哺乳动物中重要的NAD+依赖性去乙酰化酶,参与许多重要的生理和病理过程,如衰老、细胞死亡和肿瘤发生。如何精确调节SIRT1的表达和活性对SIRT1执行其生物学功能至关重要。文章以基因表达的不同阶段为切入点,对调控SIRT1表达及活性的机制进行了论述。     

转录增强子对yellow基因发育特异性表达的调控

从果蝇基因组文库中分离和克隆了yellow基因上游调控区DNA.应用重组DNA技术在体外构建了一种含yellow基因和调控元件的载体,通过转基因技术将其整合入果蝇基因组中.进而用FIP / FRT和Cre/LoxP双重位点特异性重组体系,在基因组同一位置上完成两个重组反应, 获得两种yellow基因突变体,即两种yellow等位基因.等位基因的遗传学分析表明,转录增强子直接调控yellow基因的发育特异性表达.研究结果进一步表明了两种等位基因之间存在相互作用,这种作用明显影响了yellow基因的表达水平,而这种效应可能也是由转录增强子所介导的.     

端粒酶调控机制的研究进展

端粒酶在细胞中的主要生物学功能是通过其逆转录酶活性复制和延长端粒DNA来稳定染色体端粒DNA的长度。近年有关端粒酶与肿瘤关系的研究进展表明,在肿瘤细胞中端粒酶还参与了对肿瘤细胞的凋亡和基因组稳定的调控过程。与端粒酶的多重生物学活性相对应,肿瘤细胞中也存在复杂的端粒酶调控网络。通过蛋白质-蛋白质相互作用在翻译后水平对端粒酶活性及功能进行调控,则是目前研究端粒酶调控机制的热点之一。     

TERT对小鼠EL-4淋巴瘤细胞增殖调控的初步研究

为了研究端粒酶催化亚基TERT与细胞周期相关基因的调控关系及其在肿瘤细胞增殖中的调控作用,应用基因芯片及RT-PCR等技术,对靶向mTERT的RNA干涉后的小鼠EL-4淋巴瘤细胞进行细胞周期相关基因的表达谱分析,筛选到43个基因在TERT受抑制前后存在表达差异,并且全部为下调基因.表明在小鼠EL-4淋巴瘤细胞中内源性TERT的表达抑制,导致了调控G1期和S期进程的相关细胞周期相关基因的表达变化,并可能通过此途径影响肿瘤细胞的生长和增殖.     

c-Abl调控FHL2的转录活性

目的：研究c-Abl对FHL2转录活性的调控。方法：应用免疫共沉淀和免疫印迹验证c-Abl与FHL2的相互作用及c-Abl对FHL2的磷酸化作用,并用萤光素酶报告基因研究c-Abl对FHL2转录活性的调控。结果：c-Abl与FHL2结合并磷酸化FHL2,促进FHL2的转录活性,并与FHL2一起促进FHL2下游因子骨钙蛋白的基因启动子活性。结论：c-Abl能促进FHL2的转录活性。     

bcl—2基因的转录调控

许多不同的外界刺激,包括生长因子和细胞因子等都能诱导ｂｃｌ－２基因的表达,而且很显然,这种爱诱导表达的Ｂｃｌ－２对于细胞的存活是至关重要的。因此,为了对ｂｃｌ－２的转录调控研究有了初步的了解,将从转录水平和转录后水平两个层次上谈谈目前在该领域中的最新进展。