箬叶多糖的分离纯化及其理化性质的研究

采用分步提取的方式从中药箬叶中分离得到８种多糖组分：酸性杂多糖ＦＳ、ＦＥ、ＦⅠ,β－Ｄ－葡萄糖醛酸聚糖ＦⅡ和四种半纤维素多糖α－Ｄ－木聚糖ＦⅢ－ａ、ＦⅢ－ｂ、ＦⅣ－ａ及ＦⅣ－ｂ．紫外光谱、红外光谱、凝胶色谱、元素分析等结果表明８种箬叶多糖为纯品．并采用纸层析,气相色谱分析确定其单糖组成．采用高效凝胶渗透色谱ＧＰＣ法测定了４种箬叶多糖ＦＥ、ＦⅠ、ＦⅢ－ａ及ＦⅣ－ａ的重均分子量Ｍｗ、数均分子量Ｍｎ,均为大分子,分子量分布较窄,纯度较高．     

箬叶多糖及其化学修饰物、亚硒酸钠和GSH对Cu~(2+)诱导的LDL氧化修饰的保护作用

研究了箬叶多糖ＦⅢ－ａ及其化学修饰物、亚硒酸钠和ＧＳＨ对Ｃｕ２＋诱导的低密度脂蛋白氧化修饰的保护作用．其结果表明箬叶多糖、硫酸酯多糖、硒酸酯多糖可显著抑制脂质过氧化产物（ＴＢＡＲＳ）及荧光物质的生成,彼此之间无明显差异．但对ＶＥ的消耗有着不同的保护作用,其顺序是ＦⅢ－ａ＞Ｓ－ＦⅢ－ａ＞Ｓｅ－ＦⅢ－ａ,并且具有明显的量效关系．硒或ＧＳＨ对Ｃｕ２＋诱导的ＬＤＬ氧化修饰无明显的抑制,但联合使用在０．１２５ｍｍｏｌ／ＬＮａ２ＳｅＯ３和０．２ｍｍｏｌ／ＬＧＳＨ及１２．５μｍｏｌ／ＬＮａ２ＳｅＯ３和０．０２ｍｍｏｌ／ＬＧＳＨ的浓度下能强烈地抑制ＴＢＡＲＳ的生成,甚至比正常的ＬＤＬ还要低．但是对ＶＥ的消耗只有较弱的保护作用,硒酸酯多糖与此相似．Ｎａ２ＳｅＯ３在０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ时可以明显抑制荧光物质的生成．     

羊肚菌多糖的分离纯化及组成结构分析

液体深层发酵所得的羊肚菌（Ｍｏｒｃｈｅｌｌａ ｅｓｓｕｌｅｎｔａ Ｌ．）营养液经超过滤法去掉小分子量组分,脱脂,脱色,脱蛋白质,减压低温浓缩,用超速离心法分离提纯,再用乙醇沉淀法反复多次将所要的多糖沉淀提纯,得到羊肚菌多糖（ＭＥＰ）。对其中分子量为１００００￣１０００００的多糖（ＭＥＰ－ＳＰ）,采用ＤＥＡＥ－纤维素离子交换柱,以不同浓度ＮａＣｌ为洗脱液,进行纯化分离,再经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－     

天麻多糖提取纯化方法及性质的初步研究

目的:探讨天麻多糖的最佳提取、纯化方法,分析天麻多糖性质,为深入研究天麻多糖提供技术方法。方法:采用水提醇沉法提取出水溶性粗多糖,经Sevag法脱蛋白和活性炭去色素,过DEAE-纤维素柱,盐洗脱得到天麻多糖。进行天麻多糖理化性质分析、紫外光谱和红外光谱检测分析。结果:以10%乙醇50℃恒温回流提取2 h,重复三次,是天麻多糖提取的最佳方法。天麻多糖为白色粉末状固体,其水溶液呈透明粘稠状,pH弱酸性。结论:天麻多糖为非淀粉类非还原性多糖,可能是含有α-D-木吡喃糖、D-吡喃葡萄糖等单糖的非均一组分构成的多糖。     

黑木耳多糖的提取与纯化

黑木耳干子实体经复合酶解结合热水浸提法提取,超过滤,鞣酸法去蛋白,DEAE-52和Sephacryl S-400分子筛柱层析纯化得到精美糖(AAP1)。其含糖量为89．5％。经薄板层析得到单一斑点,经琼脂糖凝胶电泳得到单一区带,表明为分子大小均一的单一组分多糖。     

食用菌多糖的提取纯化及生物活性研究进展

食用菌多糖因具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂等生物活性而备受关注。食用菌多糖的结构影响其生物活性,具有(1→3)、(1→4)、(1→6)及混合糖苷键的β-D-葡聚糖是高活性食用菌多糖的结构特征之一,展现出提高抗氧化酶活性、促进分泌抗癌因子、刺激脾脏和胸腺细胞增殖等不同功能。酸碱、超声波及微波、Sevag法、树脂法、亲和层析等不同提取纯化方法会影响食用菌多糖得率,同时会改变食用菌多糖结构,影响其生物活性。详述食用菌多糖的提取纯化方法及其对结构与活性的影响,食用菌多糖的组成结构和构效关系,以及食用菌多糖在抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、降血糖和降血脂等方面的功能、结构特征及生物活性,并提出了食用菌多糖形成的分子机制、多糖活性位点修饰、多糖代谢动力学等未来研究方向。     

食用菌多糖的提取纯化及生物活性研究进展

食用菌多糖因具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂等生物活性而备受关注.食用菌多糖的结构影响其生物活性,具有(1→3)、(1→4)、(1→6)及混合糖苷键的β-D-葡聚糖是高活性食用菌多糖的结构特征之一,展现出提高抗氧化酶活性、促进分泌抗癌因子、刺激脾脏和胸腺细胞增殖等不同功能.酸碱、超声波及微波、Sevag法、...     

千斤拔多糖的提取纯化及其结构鉴定

利用正交试验考察千斤拔多糖的提取工艺,并比较脱蛋白方法中的Sevag法和三氯乙酸法的纯化效果,总糖含量测定采用苯酚-硫酸法,蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法;采用DEAE-52纤维柱法来分离多糖,并运用HPLC色谱来分析千斤拔多糖中的单糖成分。结果表明:经正交试验得出千斤拔多糖的最佳提取条件为时间2.5 h,料液比为1∶30,温度80℃,其多糖得率为8.558%。对比两种脱蛋白的方法,Sevage法萃取3次时蛋白的脱除效果最好。经DEAE-52纤维柱来分离多糖共分得7个组分。经HPLC色谱鉴定出有葡萄糖,甘露糖和阿拉伯糖,主要单糖成分为葡萄糖。     

人参叶水溶性多糖——杂多糖P_N的纯化与结构初步确定

 从人参叶中提取的水溶性多糖经分离纯化得杂多糖P_N。P_N的分子量约为190万,单糖组成为阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖及少量未知糖,单糖的摩尔比依次为8.1:0.8:1.0:1.6:12.5:4.1(未知糖除外)。经超离心分析,琼脂糖4B柱分析,玻璃纤维纸电泳和醋酸薄膜电泳鉴定等证明P_N为均一组份。经果胶酶降解,部分酸水解,高碘酸盐氧化,Smith降解,甲基化及其产物气相色谱(GLC)、气相色谱-质谱联用(GLC-MS)等结构分析表明P_N为多分支结构,分子的主链主要是由β-(1→3)连接的半乳糖组成,并在4—0和6—0上带有分支,平均每三个半乳糖有二个分支。     

米糠多糖的提取纯化及其成分结构和活性分析

研究米糠多糖（ｒｉｃｅ ｂｒａｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＲＢＳ）的提取纯化方法,并对其进行组成成分,化学结构和物理性质分析以及活性测定,热水抽提法从稻糠中制取粗制ＲＢＳ多糖,层析分离纯化得到精制多糖,对精制多糖进行元素分析、糖和蛋白含量测定、红外特征吸收光谱测定和碳谱磁共振测定,以及对Ｂａｌｂ／ｃ小鼠同源Ｍｅｔｈ－Ａ纤维肉瘤抑瘤活性测定等。测定结果显示ＲＢＳ多糖为一种以α－１,４和α－１,     

大花地不容块根生物碱成分的研究

为研究大花地不容块根的生物碱成分,该研究采用酸提碱沉法从大花地不容块根中提取出总生物碱,通过硅胶柱色谱法和制备液相色谱技术对大花地不容块根的总生物碱提取物进行分离纯化,并利用波谱学手段对化合物进行结构鉴定。结果表明:(1)从总生物碱提取物中分离得到11个化合物,分别鉴定为青藤碱(1)、青风藤碱(2)、斯帝酚灵碱(3)、瑞枯灵(4)、异紫堇定(5)、紫堇单酚碱(6)、巴婆碱(7)、sukhodianine(8)、荷包牡丹碱(9)、7-氧代克班宁(10)和巴马汀(11)。(2)体外细胞毒性测试显示,大花地不容总生物碱和其主成分青藤碱对人类肺癌细胞A549的IC₅₀值分别为7.5×10^-4 g·mL^-1和6.59×10^-9 g·mL^-1。化合物2、3、4、7、8、9和10系首次从大花地不容中分离得到。大花地不容块根中含有吗啡烷、原阿朴啡、阿朴啡、苄基四氢异喹啉和原小檗碱5种类型的生物碱。     

黑曲霉产木聚糖酶的分离纯化与鉴定研究

木聚糖酶的分离纯化是对其进行酶学研究和分子改良研究的基础。利用实验室选育的黑曲霉菌株Aspergillus niger SM24/a进行木聚糖酶发酵,粗酶液经过(NH_4)_2SO_4分级沉淀Bio-Gel P6除盐、UNO sphere Q阴离子交换和Enrich SEC70凝胶色谱层析四个步骤的分离纯化,成功获得了3种木聚糖酶蛋白定义为X-Ⅰ、X-Ⅱ和X-Ⅲ。随着纯化步骤的增加,各组分酶比活力得到显著提高,其数值分别为37.41、34.56和53.96 U/mg,纯化倍数分别为3.96、3.66和5.72。经质谱分析和蛋白氨基酸序列比对,初步认定X-Ⅰ属于糖基水解酶第十家族内切-β-1,4-木聚糖酶,X-Ⅱ和X-Ⅲ均属于糖基水解酶第十一家族木聚糖酶。     

Morganella morganii J-8羰基不对称还原酶的分离纯化及性质研究

由本实验室筛选得到的摩尔摩根氏菌J-8菌株可将底物1-苯基-2-甲氨基丙酮专一性地转化为d-伪麻黄碱。以M. morganii J-8为出发菌株,菌体超声破碎后,经硫酸铵沉淀、Phenyl Superose疏水柱层析、DEAD阴离子柱层析和非变性凝胶电泳四步纯化获得电泳纯羰基不对称还原酶。亚基分子质量为42.5 kD,高效液相色谱分析酶的分子质量约为84.1 kD,初步认为该酶为二聚体蛋白。对所得到的部分纯化酶的酶学性质做了初步研究,纯酶进行基质辅助激光解析电离-飞行质谱分析,比对结果显示为与亮氨酸脱氢酶蛋白有很高相似性。     

陕甘花楸果实多糖的结构表征及抗氧化活性研究

陕甘花楸(Sorbus koehneana)是我国西北地区特有的灌木之一,主要被用于观赏和制作家具,但对其有效成分的研究却鲜见报道,从而限制了陕甘花楸产业的进一步开发和利用。该研究以陕甘花楸果实为原料,经石油醚脱脂后,采用超声辅助水提醇沉法提取、Sevag法脱蛋白,得到了较纯的花楸果实多糖(SSP),并对其进行结构表征和抗氧化活性研究。结果表明:(1)经苯酚-硫酸法测得多糖纯度为65.8%;FT-IR检测官能团,发现在3 420 cm~(-1)、2 929 cm~(-1)和1 733 cm~(-1)处存在多糖的典型吸收峰;用SEC-LLS测得重均分子量(Mw)为1.739×105,数均分子量(Mn)为5.052×104,多分散系数为3.443,表明分子量分布较为均一;经三氟乙酸酸解、糖腈衍生化等处理及气相-质谱联用法测定SSP的单糖组成,表明SSP由甘露糖、葡萄糖和未知单糖等3种单糖组成,摩尔比为2.2∶1.4∶6.4。(2)体外抗氧化活性实验表明:SSP具有很好的DPPH清除活性、超氧阴离子清除活性以及较强的还原力;当SSP浓度为2 mg·mL-1时,SSP对DPPH自由基的清除能力相当于BHT的96%,对超氧阴离子自由基清除能力为Vc的76.07%,还原能力等价于Vc的92%。以上表明该多糖可以用于抗衰老和抗炎等方面,是一种优良的天然抗氧化剂,为花楸资源的进一步开发利用提供了更为广阔的前景。     

Morganella morganii J-8羰基不对称还原酶的分离纯化及性质研究

由本实验室筛选得到的摩尔摩根氏菌J-8菌株可将底物1-苯基-2-甲氨基丙酮专一性地转化为d-伪麻黄碱。以M. morganii J-8为出发菌株,菌体超声破碎后,经硫酸铵沉淀、Phenyl Superose疏水柱层析、DEAD阴离子柱层析和非变性凝胶电泳四步纯化获得电泳纯羰基不对称还原酶。亚基分子质量为42.5 kD,高效液相色谱分析酶的分子质量约为84.1 kD,初步认为该酶为二聚体蛋白。对所得到的部分纯化酶的酶学性质做了初步研究,纯酶进行基质辅助激光解析电离-飞行质谱分析,比对结果显示为与亮氨酸脱氢酶蛋白有很高相似性。     

日本蛇根草DFR3基因的克隆分析及其编码蛋白的分离纯化

二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)作为花色苷代谢途径下游的关键酶,对植物花色苷的合成具有重要调控作用。该研究以日本蛇根草(Ophiorrhiza japonica)为材料,采用RT-PCR方法克隆获得一个DFR基因(OjDFR3),利用生物信息学方法对OjDFR3蛋白的性质进行了分析,通过实验完成该基因原核表达载体的构建及其重组蛋白的制备与纯化,为深入揭示日本蛇根草DFR基因的功能以及花色苷的合成与调控研究奠定基础。结果表明:(1)成功克隆获得一个DFR基因(OjDFR3);序列分析显示,OjDFR3基因cDNA全长为1 071 bp,可编码356个氨基酸,蛋白分子量为39.52 kD。(2)生物信息学分析表明,OjDFR3基因编码形成的蛋白由20种氨基酸组成,其中亮氨酸含量最多,不存在信号肽,是一种亲水性蛋白,定位在细胞质的可能性最大,三级结构由α螺旋、延伸链、无规则卷曲组成。(3)原核表达分析显示,重组质粒pET32a-OjDFR3可在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,其最佳诱导表达条件为37℃、4 h、IPTG浓度为0.8 mmol/L,同时在100和200 mmol/L咪唑洗脱下的蛋白纯度最好。(4)按照上述最佳条件,制备并获得了大量浓度和纯度较好的蛋白。     

Purification, Properties, and N-Terminal Amino Acid Sequence of a Kallikrein-like Enzyme from the Venom of Lachesis muta rhombeata (Bushmaster)

Pit viper venoms contain multiple proteinases which cause considerable damage in tissues and systemic effects after envenomation. A proteinase, kallikrein-like enzyme, belonging to the serine group must play a very important role on systemic effects. The corresponding enzyme from Lachesis muta rhombeata venom was purified to homogeneity by a combination of isoelectrofocusing fractionation followed by one step of gel filtration HPLC. The enzyme focused with pI 5.0–6.5, it had a molecular mass of 32 kDa by gel filtration HPLC, had edematogenic activity, and induced a hypotensic effect in anesthetized rats. It exhibited strong N--tosyl-L-Arg methyl esterase (955.38 units/mg) and N-BZ-DL-Arg-pNA amidolytic (233.02 units/mg) activities, hydrolyzed tripeptide nitroanilide derivatives weakly or not at all, and cleaved selectively the A- and B- chains of fibrinogen, apparently leaving the Y-chain unaffected. The 30 N-terminal amino acid sequence of the L. m. rhombeata protein showed greatest identity (74% in 26 amino acids) with Crotalus viridis kallikrein-like protein, but significant similarities in sequence were observed with enzymes from other snake venoms and pig pancreatic kallikrein.     

拟草果总黄酮制备纯化及抗炎活性研究

该文在前期研究的基础上,以拟草果的甲醇粗提液为原料,研究拟草果总黄酮成分的纯化方法以及考察拟草果总黄酮的抗炎活性。结果表明:通过静态吸附-洗脱试验,筛选出HP-20为纯化拟草果总黄酮的最佳大孔吸附树脂;以吸附率、解吸率等参数为指标,考察上样液和洗脱液的质量浓度、体积、流速等因素对纯化工艺的影响,确定最佳工艺条件为上样液质量浓度0.5 mg·m L^-1、上样体积流量4 m L·min^-1、上样体积15 BV、洗脱剂乙醇浓度70%、洗脱流速2 m L·min^-1、洗脱剂用量10 BV,在此条件下纯化的总黄酮保留率为65.48%;通过检测获得的拟草果总黄酮对脂多糖刺激的小胶质BV2细胞中白介素(IL)-6水平的影响,发现其可显著下调炎症因子IL-6的表达,具有一定的抗炎活性。     

大肠杆菌冷休克蛋白CspC的分离纯化及部分性质测定

经Sepharose Q Fast Flow阴离子交换层析和Superdex 30凝胶过滤层析,从大肠杆菌（Escherichia coli）细胞内分离纯化了一种小分子蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)纯度鉴定为单一条带，经质谱分析、N端测序、同源序列比较，确定该蛋白质为大肠杆菌冷休克蛋白CspC.在此基础上，用圆二色光谱测定了其二级结构含量，初步探索了其热稳定性及与单链DNA结合后的构象变化.     

间隔子长度对美丽箬竹克隆分株水分生理整合效应的影响

克隆植物分株间隔子长度(即相邻分株间距离)可能对生理整合产生显著的影响,其抗氧化系统与光合色素的变化可能影响植物对水分异质性的响应能力。该研究以克隆植物美丽箬竹(Indocalamus decorus)为材料,设高[H,(90±5)%]、中[M,(60±5)%]和低[L,(30±5)%]3个基质相对含水率和2个水势梯度(H-L和M-L),测定了3种间隔子长度(10、25和40cm)根状茎相连克隆分株叶片抗氧化酶活性、相对电导率以及丙二醛(MDA)、可溶性蛋白质和光合色素含量,分析美丽箬竹水分生理整合的水分梯度效应、间隔子长度效应与时间效应。结果显示:(1)随处理时间的延长,分株叶片CAT活性、相对电导率及MDA含量均先升高后降低,而叶片SOD活性则与之相反;叶片POD活性和光合色素含量总体上呈"N"型变化,而可溶性蛋白质含量的变化趋势与POD活性呈倒"N"型。(2)水分梯度和间隔子长度均会对美丽箬竹分株间水分生理整合产生影响,随分株间隔子长度增大和水势梯度差减小,低水势受体分株叶片抗氧化酶活性、可溶性蛋白质含量和光合色素含量明显降低,而其相对电导率和丙二醛(MDA)含量明显升高;供体分株水势越高,分株间间隔子越长,供体分株叶片抗氧化酶活性、可溶性蛋白质和光合色素含量越高,而其相对电导率和MDA含量明显降低。研究表明,在异质水分环境下美丽箬竹克隆系统发生了从高水势向低水势分株的水分转移,分株间水势梯度差越大、间隔子长度越短,水分传输的整合强度越高,低水势受体分株获益越明显;随着处理时间的延长,分株间水分生理整合强度在处理前期增强,而在处理后期减弱,反映出供体分株与受体分株间损耗-受益在时间序列上是有变化的,且处理前期损耗-受益表现更为明显。