丹酚酸A的分离纯化工艺及其抗氧化活性的研究

研究优化聚酰胺树脂分离纯化白花丹参丹酚酸A的最佳工艺,并测试其提取物的抗氧化活性。以吸附量和解吸量为指标,利用静态吸附和动态吸附的方法,确定丹酚酸A的最佳分离纯化条件。结果表明聚酰胺树脂的最佳纯化工艺条件为:上样液丹酚酸A质量浓度为11 g/L,上样液体积流量为1.0 m L/min,上样量为150m L,洗脱溶剂为50%乙醇,洗脱体积流量为1.0 m L/min,洗脱体积为10 BV,纯化后丹酚酸A量可达40.36%。通过清除DPPH自由基和还原能力测定初步评判该工艺下的提取物的抗氧化活性,结果表明,该提取物具有良好的抗氧化活性。     

高速逆流色谱法分离制备丹酚酸B

采用高速逆流色谱法分离纯化丹参水溶性成分丹酚酸类物质,制备丹酚酸B化学对照品。分离采用的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-水-甲醇(1.5:5:5:1.5),上相做固定相,下相做流动相,流速为1.7 mL/min,仪器转速850 rpm,进样量80 mg,纯度用HPLC方法测定。结果表明:一次分离可制备63.4 mg丹酚酸B,其纯度为98.6%。该方法操作简单,可作为高纯度丹酚酸B化学对照品的制备分离方法。     

丹酚酸B水解生产丹参素的工艺优化

本文优选了碱水解丹参中的丹酚酸B生产丹参素的工艺。分别以水解前后丹参素和丹酚酸B的增长率和水解率综合评分为评定指标,以影响水解效率的碱(Na OH)浓度、水解时间、料液比和温度为考察因素,每个因素设置3个水平,采用正交试验法L9(34),确定出最优水解工艺为:采用浓度为0.6%的Na OH溶液,以1∶20(g/m L)的料液比,在100℃下水解1.0 h。结果显示,水解前后丹参素的平均增长率为1145.66%,丹酚酸B的水解率为98.94%,丹参素的含量由0.27%增加至3.36%。     

动态网络模块分析丹酚酸B治疗冠心病作用机制

丹酚酸B是丹参治疗冠心病的主要活性成分之一,具有良好的防治冠心病疗效.通过数据库检索及药效团筛选确定了丹酚酸B的作用靶点,根据靶点蛋白相互作用信息构建其静态蛋白相互作用网络,并整合冠心病表达谱构建疾病和正常状态下的共表达蛋白相互作用网络.采用基于边聚类的快速模块识别算法FAG-EC对疾病状态的共表达网络进行模块分析和GO富集分析,然后将获得的功能模块映射到正常状态下的共表达网络,获得相对应的功能模块,并对不同状态下的功能模块进行对比分析,揭示模块在不同状态下动态变化信息;基于模块功能分析,结果显示,丹酚酸B主要通过调节免疫/炎症反应、凝血、血液循环、花生四烯酸代谢、成纤维细胞生长因子受体信号传导途径、肾素-血管紧张素系统、脂质代谢以及基础代谢等途径达到治疗冠心病的效果.     

丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的提取与纯化工艺研究

建立了同时提取丹参中丹参酮ⅡA与丹酚酸B两种主要活性成分的方法及丹酚酸B的纯化工艺。以丹参酮ⅡA与丹酚酸B的含量为评价指标,采用正交实验优化提取工艺,所得最优提取工艺为:用8倍量70%乙醇回流提取3次,每次1 h。丹参酮ⅡA的提取率在90%以上,丹酚酸B的提取率在80%以上。提取物浸膏用热水溶解,过滤,滤液浓缩为1 m L含约0.5 g生药的溶液,取150 m L以2 BV/h的速度上D101大孔树脂柱;然后用6 BV的水洗脱,再以4 BV/h的流速用8 BV的30%乙醇洗脱除杂,以2 BV/h的流速10 BV60%乙醇富集,得到纯度大于75%丹酚酸B,验证实验表明该工艺稳定可行;最后经过洗涤和甲醇重结晶,得到纯度大于99%的丹酚酸B,总得率为2.86%(以干燥根茎计算)。     

丹酚酸B通过抑制线粒体功能增加胶质瘤细胞的放疗敏感性

目的:研究药用植物丹参的根茎提取成分丹酚酸B对人胶质瘤U251细胞的放疗增敏作用,并探讨其可能的分子机制。方法:使用1μM浓度的丹酚酸B处理胶质瘤U251细胞,并用等量PBS建立对照组,使用射线照射建立放射治疗模型。MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光染色检测活性氧ROS含量及线粒体肿胀程度。结果:丹酚酸B能够显著降低射线照射后U251细胞活力,并增加其凋亡(P0.05)。丹酚酸B能够显著增加射线照射后U251细胞活性氧ROS的产生,并增加线粒体的肿胀程度(P0.05)。结论:丹酚酸B能够通过诱导内源性凋亡增加胶质瘤细胞的放疗敏感性,这种作用可能是通过抑制线粒体功能而实现的。     

丹酚酸B对大鼠离体工作心脏血流动力学的影响

目的 研究丹酚酸B对离体大鼠工作心脏血流动力学的影响.方法 采用Langendorff离体心脏灌流的方法,以左室内压( LVSP)、左室舒末压(LVEDP)、室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、室内压最大下降速率(- dp/dtmax)、心率(HR)等血流动力学参数为指标,观察丹酚酸B对心肌收缩性能的影响.结果 不同剂量(10、5、2.5 mg/L)的丹酚酸B可使LVSP、±dp/dtmax明显升高,同时使HR减慢,并呈剂量依赖性,但对LVEDP无明显作用.结论 丹酚酸B对离体工作心脏有剂量依赖性正性肌力作用.     

一株促进丹参生长和提高丹酚酸含量的活性内生真菌

利用菌根接种技术,丹参幼苗接种固体培养的SMF34菌株后,在温室和试验田条件下栽培,比较处理组和对照组在表观性状、生物量、总酚酸和丹酚酸B含量间的差异,结果处理组丹参均优于对照组。该活性菌株经形态和分子鉴定为拟青霉属Paecilomyces sp.真菌。提示该活性菌对丹参生长发育和丹酚酸含量的提高具有促进作用,是一株具有很好应用和研究价值的真菌。     

丹酚酸B对高糖日粮小鼠消化系统自由基水平的影响

本文研究了丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对灌注及长期摄食高糖小鼠活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的影响.结果表明:灌胃高糖使小鼠全血ROS于1.5 h达到最大值,灌胃葡萄糖的ROS释放量显著高于蔗糖(P＜0.05);灌胃高糖使小鼠血糖浓度于0.5 h达到最高,灌胃葡萄糖的小鼠血糖浓度有高于灌胃蔗糖的小鼠血糖浓度的趋势(P＞0.05);添加Sal B后并没有改变灌胃高糖小鼠的全血ROS释放和血糖浓度变化趋势,但有降低血糖趋势(P＞0.05),显著减少了ROS的释放量(P＜0.05);添加Sal B后显著降低长期高糖膳食小鼠的全血、肝脏、胰腺、胃、十二指肠、空肠和回肠的ROS释放量.     

高山蓍中的萜类成分及其降糖活性研究CSCD

研究高山蓍Achillea alpina L.全草中萜类成分及其降糖活性。采用ODS、Sephadex LH-20柱色谱和pre-HPLC等方法分离纯化,采用NMR、MS等波谱技术鉴定化合物的结构。从高山蓍的二氯甲烷部位中分离纯化得到13个单体化合物,分别是[3S-[3α,3aα,4α(Z),6α,6aα,9α,9aα,9bβ]],2-butenoic acid,2-methyl-2,3,3a,4,5,6,6a,9,9a,9b-decahydro-6,6a,9-trihydroxy-3,6,9-trimethyl-2-oxoazuleno[4,5-b]furan-4-yl ester(1)、10β-hydroxyisodauc-6-en-14-al(2)、isodauc-6-ene-10β,14-diol(3)、aphanamol II(4)、ent-4(15)-eudesmene-1β,6α-diol(5)、12-羟基-α-香附酮(6)、1β-羟基-α-香附酮(7)、(E)-3,7,11-trimethyl-1,6,10-dodecatriene-3,5-diol(8)、2,6,10-trimethyl-3,6,11-dodecatriene-2,8,10-triol(9)、黑麦草内酯(10)、8-hydroxyphellandral(11)、(3R,6R,7E)-3-hydroxy-4,7-megastigmadien-9-one(12)、saniculamoid D(13)。化合物1~4、6、8和10~13为首次从该属植物中分离得到,化合物5、7和9为首次从植物高山蓍中分离得到。将化合物1~13在棕榈酸诱导的HepG2胰岛素抵抗细胞模型上进行细胞耗糖量的活性筛选,结果显示化合物5、9和10(50μmol/L)具有良好的逆转胰岛素抵抗活性。     

注射用丹酚酸A防治肝纤维化的实验研究

目的：探讨注射用丹酚酸A抗肝纤维化的作用,为丹酚酸A的临床应用提供理论依据。方法采用CCl4体外诱导肝细胞损伤,观察丹酚酸A对肝细胞活性及其细胞培养上清液ALT、AST、LDH水平和细胞裂解液中SOD活性和MDA含量的变化;另采用皮下注射CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,观察丹酚酸A对肝纤维化大鼠血清LN、HA、SOD和MDA含量的影响以及肝脏组织病理改变情况。结果与模型对照组比,丹酚酸A高、低剂量组和Vit E组的细胞存活率显著提高（P ＜0.01）,丹酚酸A高剂量组ALT、AST和LDH活性显著降低（P ＜0.01）,丹酚酸A高剂量组和Vit E组SOD活性明显升高（P ＜0.05）,MDA含量显著降低（P ＜0.05）;体内试验发现,与模型对照组比,丹酚酸A高剂量组纤维化大鼠的血清LN和HA水平显著降低（P ＜0.05）,高、低剂量组SOD活性显著升高（P ＜0.05, P ＜0.01）,MDA含量显著降低（P ＜0.01, P ＜0.05）,并能改善肝脏病理形态。结论注射用丹酚酸A可通过抗脂质过氧化作用,起到保护肝细胞,减轻肝纤维化的作用。     

Ca2+对水杨酸诱发的丹参幼苗丹酚酸B生物合成的影响

为研究Ca2+在水杨酸诱导丹参幼苗丹酚酸B生物合成过程中的作用,分别用激光共聚焦显微镜和高效液相色谱仪检测胞外Ca2+通道抑制剂Vp和LaCl3,胞内Ca2+通道抑制剂LiCl以及胞内钙调素拮抗剂TFP处理前、后水杨酸诱导丹参叶片保卫细胞内Ca2+荧光强度和丹酚酸B含量的变化。结果表明,水杨酸 (SA) 处理后6 min即可诱发丹参幼苗叶片保卫细胞内Ca2+迸发,持续时间为2~3 min,丹参幼苗丹酚酸B生物合成量亦显著增加,且丹酚酸B合成量的增加发生在Ca2+迸发之后。胞外Ca2+通道抑制剂,胞内Ca2+通道抑制剂以及胞内钙调素拮抗剂均可抑制水杨酸诱导的Ca2+迸发和丹酚酸B的生物合成。结果表明水杨酸诱发的Ca2+对丹参幼苗丹酚酸B生物合成具有重要的调控作用。     

丹酚酸B促进胎鼠大脑皮质神经干细胞增殖、突起生长和分化

丹参是一种常用于治疗脑卒中的传统中草药,丹酚酸B是其有效成份之一.但人们对丹酚酸B如何影响神经干细胞的生长还了解甚少.本研究用MTT、流式细胞术、免疫荧光和RT-PCR技术检测丹酚酸B对胎鼠大脑皮质神经干细胞增殖、突起生长和分化的作用.结果显示,20和40μg/mL丹酚酸B对促进神经干细胞增殖的作用相似,适量的丹酚酸B可促进神经干细胞增殖并形成较多的神经干细胞球,其促增殖作用通过提高G2/S期细胞的数量而实现.丹酚酸B还可促进神经干细胞球发出较多的突起并分化出较多的成熟神经元.分化开始时,tau,GFAP和nestin mRNA均有表达.但分化后的细胞与对照组比较,tau mRNA表达增多,而GFAP mRNA表达减少.说明外源性的丹酚酸B具有促进神经干细胞增殖并向神经元分化的作用,有望成为一种获取更多神经干细胞和促进神经干细胞分化的药物.     

丹酚酸B对高脂日粮小鼠抗氧化与淋巴细胞亚群免疫功能调节的研究

本文研究了丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对饲喂高脂日粮小鼠抗氧化及淋巴细胞亚群免疫功能调节的影响。选取4w龄雄性C57BL/6小鼠40只,随机平均分成4组:即正常对照组(正常日粮),高脂日粮组(高脂日粮),Sal B低剂量组(高脂日粮+0.002%Sal B)和Sal B高剂量组(高脂日粮+0.004%Sal B)。八周后测定血脂、全血和脾脏活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、抗氧化酶活性及MDA含量;采用FACSAria流式细胞仪分析小鼠外周血及脾脏淋巴细胞亚群。结果表明:Sal B可显著降低高脂日粮小鼠血脂水平,全血及脾脏ROS水平,提高抗氧化能力,提高CD4+/CD8+T细胞比例及CD19+细胞百分率(P0.05)。低剂量Sal B组抗氧化与免疫调节功能好于高剂量Sal B组。     

红花降糖活性成分谱效关系研究

红花为菊科植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花,具有活血通经,散瘀止痛等功能。为研究其降糖活性成分及谱效关系,本文确定了红花降糖活性部位;建立了HPLC指纹图谱,通过对照品指认其中7个主要成分后,用灰色关联度法和正交偏最小二乘法分析,揭示了这7个共有峰协同发挥蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B抑制作用,其中羟基红花黄色素A(HSYA,6号峰)和6-羟基山柰酚-3,6-二-O-葡萄糖基-7-O-葡萄糖苷(3号峰)是贡献最大的成分。含量测定显示10批红花中羟基红花黄色素A及山柰素的含量均在1.67%~1.94%和0.09%~0.12%之间,该研究为红花在糖尿病药物开发领域的应用提供了依据。     

维吾尔药毛菊苣提取物降糖活性的研究

本文利用糖尿病及其并发症治疗药物筛选中的关键靶点:PTP1B、α-葡萄糖苷酶和蛋白非酶糖化过程,对维吾尔药毛菊苣中提取分离后获得11个标准提取物进行降糖活性成分筛选。结果表明它们都具有PTP1B抑制剂作用,其中活性最好的组分IC50为5.8±0.15μg/mL,五种毛菊苣根提取物和一种毛菊苣籽(CGS-1)提取物具有α-葡萄糖苷酶抑制活力,仅CGS-1具有一定的抑制蛋白非酶糖化过程的能力,其他组分均未见此活力,最后在转染的CHO细胞上对CGS-1作用机理进行了初步探索,观察到CGS-1可使磷酸化AKT蓄积,提示该组分可能通过PI3K/AKT途径刺激GLU4的转运从而达到降糖的目的。     

豆渣水溶性多糖的精制及抗氧化活性研究

豆渣水溶性粗多糖经过脱脂、酶解工艺进行精制后,多糖纯度由74.60%提高到了87.45%;通过豆渣水溶性多糖对O-2·抑制作用、·OH清除能力以及还原力的测定,表明具有良好的抗氧化活性。     

基于化学相似性搜索的丹酚酸A潜在靶点预测研究

丹酚酸A是中药丹参中一种水溶性酚酸类化合物,具有较强的抗氧化性,发挥着多种药理作用。但其作用靶点仍需要进一步阐释。本文以Swiss Target Predicition在线服务器为工具,以SAA为研究对象,采用化学相似性搜索其作用靶点。实验结果显示Fyn、Src等Src酪氨酸家族蛋白是SAA作用的潜在靶点,正向分子对接也显示了SAA与Fyn的核心氨基酸有相互作用。综上,Fyn、Src等Src酪氨酸激酶家族蛋白可能是SAA的潜在靶蛋白之一。     

响应面法优化金莲花总酚酸的提取工艺及其美白活性研究CSCD

采用响应面分析法中Box-Behnken设计实验优化乙醇回流提取金莲花总酚酸的工艺条件,同时研究了金莲花总酚酸对DPPH自由基、羟基自由基的清除能力、还原能力及其对酪氨酸酶的抑制作用。结果表明,金莲花总酚酸的最佳提取工艺为乙醇浓度60%,回流时间90 min,回流温度60℃,液料比40∶1(mL/g);在此条件下金莲花总酚酸得率为92.245 mg/g。此外,其对DPPH自由基、羟基自由基具有一定的清除能力和还原能力,并且能够显著性地抑制酪氨酸酶活性。本研究所得的提取工艺稳定可靠,金莲花总酚酸具有一定的体外抗氧化活性和酪氨酸酶抑制作用,为进一步科学合理开发利用金莲花奠定基础。