枸杞多糖的提取纯化及组成分析

采用水提法从枸杞中提取分离枸杞多糖(LBP)用DEAE纤维素柱色谱和凝胶柱色谱进行分离纯化,采用GPC-LLS法、红外光谱和气相色谱等方法对其组成进行研究。结果表明LBP含有3个级分,LBP的分子质量约为1.497×105,由阿拉伯糖(Ara),鼠李糖(Rha),木糖(Xyl),甘露糖(Man),半乳糖(Gal)和葡萄糖(Glc)6种中性单糖组成。     

黄精多糖组成及其抗氧化活性分析

分离纯化湖南新化产黄精多糖,并对其组分、结构特征和抗氧化活性进行研究。本研究采用碱提法、Sevag法脱蛋白得水溶性粗多糖(PSP),并经DEAE-52和Sepharose CL-6B色谱柱分离纯化得黄精多糖分级组分。通过紫外、红外光谱和GC-MS进行初步结构分析,并检测其体内外抗氧化能力。结果 PSP经纯化得1个组分PSP-1a,不含蛋白质和核酸,具有典型多糖吸收峰,主要由半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、葡萄糖组成,其摩尔百分含量分别为0.18%、1.50%、97.25%、0.77%和0.3%。体外抗氧化活性研究表明:PSP和PSP-1a均具有一定抗氧化性能力,且随浓度(1~10 mg/L)增大而增强,PSP-1a的抗氧化能力优于PSP,但弱于VC。体内实验显示,PSP-1a改善了高脂膳食肥胖小鼠结肠匀浆组织的氧化应激状况。     

雪灵芝多糖的分离纯化及免疫活性评价

为分离纯化雪灵芝(Arenaria kansuensis)多糖,并对纯化组分进行分子量测定、单糖组分分析及免疫活性评价。实验采用水提醇沉法提取雪灵芝粗多糖(Arenaria kansuensis crude polysaccharide, AKCP);以DEAE-52纤维素柱对AKCP进行分离纯化,获得5个雪灵芝多糖组分AKP-1～AKP-5,进一步采用葡聚糖凝胶G-75柱对AKP-2进行分离纯化获得AKP-2a多糖组分。苯酚-硫酸法测定AKCP、AKP-2及AKP-2a的总糖含量分别为52%、70%和79%;凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射(GPC-MALS)法检测AKP-2a的重均分子量Mw为2.07×10~5Da、数均分子量Mn为9.838×10~4Da;HPLC法检测AKP-2a是由半乳糖醛酸、甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖10种单糖组成,其摩尔比为1∶0.25∶0.01∶0.20∶0.11∶0.25∶0.61∶0.07∶0.21∶0.12;以MTT法检测体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖,AKCP、AKP-2及AKP-2a各浓度组SI水平,均明显高于对照组(P<0.05)。经NO释放实验及IFN-γELISA检测,AKP-2a各浓度组小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中二者的水平,较对照组呈浓度依赖性增高(P<0.01)。综上结果,本研究通过分离纯化,获得了总糖含量较高的雪灵芝多糖AKP-2a组分,初步确定其分子量范围及单糖组成,并证实其具有激活淋巴细胞增殖、促进巨噬细胞功能的生物活性。     

猴头菌发酵液中抑制非酶糖基化反应物质的分离及分析

以体外非酶糖基化反应抑制率为考察指标,对猴头菌发酵液中抑制非酶糖基化反应的高活性物质进行分离并纯化,通过发酵液浓缩、二步醇沉、提取物冷冻干燥、C18层析柱等步骤进行分离,获得1种对非酶糖基化反应具有良好抑制作用的物质组分HE35,经液相色谱-质谱(LC-MS)分析后发现,HE35的相对分子质量为294,2mg/m L的HE35对体外非酶糖基化抑制率达到92.17%,半抑制质量浓度IC50为0.65 mg/m L。初步分析猴头菌发酵液中可能存在一种以上的活性物质,对体外非酶糖基化反应具有抑制作用。     

地木耳多糖的提取与纯化研究

对地木耳采用水提醇沉法获得的地木耳多糖粗提取物,采用Sevage法脱蛋白质、醇沉,干燥得粗多糖,进一步用DEAE-52纤维素柱层析分离纯化,用纸色谱和琼脂糖凝胶电泳对洗脱组分进行纯度鉴定。结果表明：Sevage法脱蛋白7次可脱除94%的蛋白质,多糖得率为13.75%。DEAE-52纤维素柱层析后得到10种组分,浓缩干燥后得到白色粉末状多糖组分,每个组分经过纯度鉴定后均为单一的多糖。选择水和NaC l溶液为洗脱剂的温和条件分离纯化多糖效果较好。     

苦豆子多糖的分离纯化及初步结构北大核心CSCD

本文研究了苦豆子多糖的分离纯化以及初步结构。采用水溶醇沉方法提取粗多糖,然后通过离子交换层析分离纯化,采用高效凝胶渗透色谱、气相色谱、紫外吸收以及红外吸收光谱对多糖组分进行分析研究。获得苦豆子多糖相对分子质量均一性组分SPN和SPA,测得其平均相对分子质量分别为1.217×106Da和4.412×105Da,二者均不含蛋白质,且都具有红外的多糖特征吸收峰,其单糖组成(质量比)分别为阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=7.90∶11.24∶86.24∶18.81∶16.89、鼠李糖∶阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=1.50∶5.80∶1.72∶20.10∶1.64∶27.20。本文为苦豆子多糖的进一步研究开发提供理论依据。     

苦豆子多糖的分离纯化及初步结构

本文研究了苦豆子多糖的分离纯化以及初步结构。采用水溶醇沉方法提取粗多糖,然后通过离子交换层析分离纯化,采用高效凝胶渗透色谱、气相色谱、紫外吸收以及红外吸收光谱对多糖组分进行分析研究。获得苦豆子多糖相对分子质量均一性组分SPN和SPA,测得其平均相对分子质量分别为1.217×106Da和4.412×105Da,二者均不含蛋白质,且都具有红外的多糖特征吸收峰,其单糖组成(质量比)分别为阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=7.90∶11.24∶86.24∶18.81∶16.89、鼠李糖∶阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=1.50∶5.80∶1.72∶20.10∶1.64∶27.20。本文为苦豆子多糖的进一步研究开发提供理论依据。     

蜈蚣肠道共生菌来源的吩嗪类化合物分离与鉴定

动植物共生菌是药物发现的重要来源之一。为了获取结构新颖且具有良好生物活性的微生物次生代谢产物,本文利用划线分离方法从蜈蚣肠道中分离获得一株共生菌WG4(未鉴定),经土豆液体发酵培养,发酵液经乙酸乙酯萃取、浓缩,获得次级代谢产物浸膏。浸膏经硅胶柱层析、高效液相色谱等分离方法反复纯化,获得3个化合物。通过核磁共振谱和低分辨质谱测试,3个化合物分别鉴定为1-羟基吩嗪(1)、吩嗪-1-甲酰胺(2)和吩嗪-1-羧酸(3)。据文献报道,吩嗪化合物具有抗菌、抗虫、抗病毒、抗肿瘤等生物活性,本实验证实了动植物来源的共生菌具有生产药源化合物的潜力。     

马齿苋多糖POPⅢa的分离纯化及其结构特征

经提取、分离和纯化等一系列步骤得到马齿苋多糖POPⅢa,用醋酸纤维薄膜电泳和Sephadex G-200葡聚糖凝胶过滤法鉴定,POPⅢa为均一性组分。由薄层色谱和核磁共振分析确定其单糖组成为阿拉伯糖和半乳糖醛酸。红外光谱分析表明POPⅢa具有典型的多糖吸收峰,结构中存在β-型糖苷键,同时根据NMR结果推断POPⅢa属果胶类多糖。     

宁夏不同地区灵武长枣果实多糖的单糖成分分析

以宁夏4个不同地区(灵武、中宁、青铜峡、银川)成熟期的灵武长枣果实为研究对象,经水提醇沉法提取,采用DEAE-cellulose52和HW-55S分离纯化,并利用GC-MS法进行多糖的单糖组成分析。结果表明:多糖提取率最高的是灵武地区,达到1.795%;分离纯化后,4个地区的长枣多糖各得到1个中性(Ju-0)和3个酸性组分(Ju-1、Ju-2、Ju-3),其中Ju-2含量最高;GC-MS分析可知灵武长枣多糖含有阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸10种单糖,不含果糖,以阿拉伯糖、核糖、半乳糖和2种糖醛酸为主,木糖含量最低。各地区多糖的单糖组成、含量各不相同,从各组分来看,四个地区多糖的Ju-0和Ju-1组分组成均以阿拉伯糖、核糖、半乳糖为主,四个地区多糖的组成差异主要在于Ju-2和Ju-3组分。从各地区单糖总量来看,灵武地区是阿拉伯糖含量最高,中宁、青铜峡、银川地区以葡萄糖醛酸含量为最高。     

肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的提取纯化及其对细胞免疫活性的影响

采用液体深层培养得肺炎克雷伯氏菌Kp9株发酵液,研究确立了菌体快速裂解条件:NP40 1%和胰蛋白酶25 0IUg菌体,50℃作用1h ,然后加入溶菌酶80μg/mL ,56℃作用1h ;裂解液经超滤浓缩和有机溶剂沉淀获得多糖粗品;多糖粗品先后经CTAB吸附分离,DEAE-SepharoseFastFlow离子交换和SephacrylS 30 0HR凝胶过滤纯化,得分子量分布相对均一的多糖纯品,产品得率为0.25 1g/L。采用淋巴细胞转化实验分别探讨了多糖粗品和纯品的免疫活性,研究显示荚膜多糖具有高效的体外细胞免疫活性,并具有典型的双向免疫调节作用。研究结论为肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的开发奠定了前期基础。     

应用超滤技术提取坛紫菜多糖的研究

以截留分子量为50 KD的超滤膜对坛紫菜粗多糖提取液进行超滤分离。结果表明,超滤对坛紫菜粗多糖提取液具有较好的脱色效果,脱色率达91.65%。超滤技术能很好地保留坛紫菜粗多糖中的生理活性物质,浓缩了坛紫菜粗多糖提取物,使粗多糖中总糖含量从超滤前的34.95%提高到52.07%,明显提高了坛紫菜粗多糖的糖含量,同时进一步纯化了样品。     

用杆状病毒-昆虫细胞系统表达、纯化重组的人源化氨基末端LBP

根据已有的资料显示LBP与LPS的结合位点位于其氨基末端的第 91～ 1 0 0个氨基酸残基。在体外构建含有人LBP与LPS结合活性部分的穿梭质粒pBacmidtLBP ,并且带上 6×his的标签 ,用此穿梭质粒转染sf2 1昆虫细胞 ,获得重组病毒。然后用重组病毒液感染对数生长期的sf2 1昆虫细胞 ,72h后收获含有这种截断型人源化氨基末端LBP-(NH-LBP)的培养上清。用金属亲和树脂纯化后 ,采用SDS-PAGE电泳以及Western-Blot鉴定所得到的纯化物。成功获得相对分子质量约为 30 0 0 0的NH-LBP。为进一步研究LBP在介导LPS活化靶细胞中的作用机制奠定了基础。     

红托竹荪菌托多糖的提取及抗肿瘤活性的初步研究

红托竹荪菌托经热水提取、酒精沉淀、脱蛋白后的粗多糖,其得率远大于其菌丝体和子实体的其他部位及香菇子实体。菌托粗多糖进一步用DEAE纤维素柱和Sephadex G-75分离纯化,得到两个组分DRVP1与DRVP2,对分离得到的主要多糖通过高效液相色谱（HPLC）、红外光谱（IR）等进行结构分析。DRVP1的相对分子质量（Mr）为1．47x10^4,红外光谱数据显示为β-型甘露糖苷。体外试验表明,红托竹荪菌托多糖的组分DRVP1对小鼠S180肉瘤有一定的抑制作用。     

黄芪多糖的分离及其免疫活性的研究

本文报道了黄芪多糖的分离纯化方法、理化性质、组成并进行免疫作用的研究,黄芪水提,经732(H~+)树脂初步纯化,得粗多糖,再经超滤,Sephadex G-150,透析等方法进一步纯化,得白色粉末状多糖M wt:37500。证明为α-糖甙键连接,水解多糖检出葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖,克分子比为:葡萄糖:半乳糖:阿拉伯糖=1:0.95:0.70。体外试验结果表明:(1)黄芪多糖可刺激小鼠脾细胞增殖,但与ConA联合刺激脾细胞时,未见有协同作用;(2)未见黄芪多糖有诱生脾细胞IL-2的作用;(3)黄芪多糖和IL-2均能增加人体LAK细胞活性,且两者合用,效果更佳,体内试验结果表明:(1)黄芪多糖可促使小鼠外周血白细胞数量增加,并且能完全纠正环磷酰胺引起的白细胞数量下降;(2)黄芪多糖对体内淋转无明显促进作用,但对CY所致免疫功能低下有一定的纠正作用;(3)黄芪多糖可增强NK细胞活性,并可完全纠正CY引起的免疫功能低下;(4)黄芪多糖可促进1g G的产生,与PWM无协同作用。     

芦荟多糖的分离纯化及性质研究

采用水提醇沉法提取芦荟多糖,经DEAE-C32柱层析分离,Sephades G-100进一步纯化,得AⅠ、AⅡ和AⅢ三种芦荟多糖。Sephadex G-100凝胶色谱表明,AⅠ组分为均一组分,其分子量约为3.8×10~4。借助气相色谱技术,研究了芦荟粗多糖和AⅠ组分的单糖组成。另外,红外光谱鉴定芦荟多糖主要为吡喃多糖。     

绿茶阿拉伯半乳糖蛋白的分离、纯化及肝脏靶向性的初步研究

目的:从绿茶中分离纯化阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs),对其肝脏靶向性进行初步研究.方法:将脱色后的绿茶粉末在80 7℃加水(1:20,w/v)浸提1.5 h,获得的上清浓缩后用乙醇沉淀,收集重新溶解后在离子交换色谱Q Sepharose Fast Flow柱(20 mm×60cm)和Sephadex G100柱(16mm×60cm)纯化,收集主要含糖组分,冷冻干燥后获得绿茶AGPs,对其进行单糖组成、氨基酸组成、蛋白含量、糖醛酸含量分析.分别以200、400和800 mg/kg.d 3种剂量的绿茶AGPs灌胃昆明小鼠,2周后处死.取肝脏测定湿重和肝糖元含量.结果:分离纯化获得的绿茶AGPs分子量约为100kDa,是一种主要单糖组成为阿拉伯糖和半乳糖、舍有一定量糖醛酸、蛋白含量低于10%的水溶性糖蛋白.初步研究发现绿茶AGPs与其它来源的AGPs一样具有肝脏靶向性.结论:绿茶AGPs的安全性和肝脏靶向性使其在药品输送上具有良好的应用前景.     

红托竹荪菌托多糖的提取及抗肿瘤活性的初步研究

红托竹荪菌托经热水提取、酒精沉淀、脱蛋白后的粗多糖,其得率远大于其菌丝体和子实体的其他部位及香菇子实体.菌托粗多糖进一步用DEAE纤维素柱和Sephadex G-75分离纯化,得到两个组分DRVP1与DRVP2,对分离得到的主要多糖通过高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(IR)等进行结构分析.DRVP1的相对分子质量(Mr)为1.47×104,红外光谱数据显示为β-型甘露糖苷.体外试验表明,红托竹荪菌托多糖的组分DRVP1对小鼠S180肉瘤有一定的抑制作用.     

猴头多糖分离纯化的初步研究

目的：确定适合于猴头多糖分离纯化的方法。方法：以液体发酵生产的猴头菌丝为材料,提取猴头菌丝多糖进行分离纯化,以得到多糖纯品。结果：猴头菌丝粗多糖采用Sevag法除蛋白的次数应该控制在5-8次,而且Sevag法除蛋白所得的HMP,经DEAE-纤维素柱层析初步纯化,多糖主要分布在蒸馏水洗脱部分,命名为HMPⅠ,其含量为67.5%;HMPⅠ经Sephadex G-100凝胶柱层析纯化,得到两个组分：HMPⅠa、HMPⅠb;HMPⅠa为多糖主要组分,含量为71.8%;HMPⅠa经纯度鉴定为多糖纯品。结论：DEAE-纤维素柱层析结合Sephadex G-100凝胶柱层析的纯化方法,可以获得猴头多糖纯品。     

红托竹荪菌托多糖的提取及抗肿瘤活性的初步研究

红托竹荪菌托经热水提取、酒精沉淀、脱蛋白后的粗多糖,其得率远大于其菌丝体和子实体的其他部位及香菇子实体。菌托粗多糖进一步用DEAE纤维素柱和Sephadex G-75分离纯化,得到两个组分DRVP1与DRVP2,对分离得到的主要多糖通过高效液相色谱（HPLC）、红外光谱（IR）等进行结构分析。DRVP1的相对分子质量（Mr）为1.47×104,红外光谱数据显示为β-型甘露糖苷。体外试验表明,红托竹荪菌托多糖的组分DRVP1对小鼠S180肉瘤有一定的抑制作用。