重组人GM－CSF／MCAF融合蛋白抗血清的制备与鉴定

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）融合蛋白经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５和ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ两步柱层析,获得了电泳纯的ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ融合蛋白。为进一步研究其结构与功能,我们以纯化的该融合蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清。ＤｏｔＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验表明,该抗血清效价高、特异性好,可分别与ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ、ＧＭ－ＣＳＦ和ＭＣＡＦ发生反应。     

重组人GM－CSF／MCAF融合蛋白抗血清的制备与鉴定

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）融合蛋白经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５和ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ两步柱层析,获得了电泳纯的ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ融合蛋白。为进一步研究其结构与功能,我们以纯化的该融合蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清。ＤｏｔＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验表明,该抗血清效价高、特异性好,可分别与ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ、ＧＭ－ＣＳＦ和ＭＣＡＦ发生反应。     

GM3对重建Gs与AC偶联功能的影响

将神经节苷脂ＧＭ３（Ｍｏｎｏｓｉａｌｏｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ－ＧＭ３）通过保温法掺入到含激活型Ｇ蛋白（ＳｔｉｍｕｌａｔｏｒｙＧＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,Ｇｓ）与腺苷酸环化酶（ＡｄｅｎｙｌｙｌＣｙｃｌａｓｅ,ＡＣ）的脂酶体中,研究了ＧＭ３对Ｇｓ和ＡＣ偶联功能的影响。实验结果表明,在４－１０μｍｏｌ／Ｌ浓度范围的ＧＭ３增加ＡＣ的基础活力;在高于４μｍｏｌ／Ｌ时,ＧＭ３可显著抑制Ｇｓ激活ＡＣ的能力;而在ＧＭ３浓度高于１００μｍｏｌ／Ｌ的条件下,Ｇｓ结合ＧＴＰγＳ（Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ５＇－Ｏ－（３－ｔｈｉｏｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ））的活力受到明显抑制。随外源ＧＭ３浓度的增加,ＧＭ３对Ｇｓ激活ＡＣ的能力与对ＡＣ基础活力的影响似乎并不完全一致。这些结果提示,Ｇｓ与ＡＣ的解偶联对较低浓度的ＧＭ３的影响更加敏感。用荧光探剂ＭＣ５４０标记脂酶体,测量其荧光光谱的结果显示,随着ＧＭ３浓度增加,ＭＣ５４０的荧光强度增强,这说明外源性的ＧＭ３的掺入使膜脂质分子头部的堆积变得更加疏松。这可能提示,ＧＭ３介导的膜脂物理状态的变化是调节Ｇｓ与ＡＣ偶联功能的重要因素之一。     

外源性神经节苷脂GM3影响人肝癌细胞生长的可能机制的初步研究

通过苔酚蓝染色细胞发现,外源性ＧＭ３能明显抑制人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长,在ＧＭ３处理３ｄ时,出现明显差异,通过ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ分析发现,外源性ＧＭ３可明显影响人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ四种癌基因的ｍＲＮＡ表达,未经ＧＭ３处理的细胞中没有检测到ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ,但ｃ－ｊｕｎ微量表达,并有ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ的高     

外源性GM3／GD3对人肝癌培养细胞原癌基因表达的研究

应用原位分子杂交技术及细胞图像分析证实了人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１细胞经１０μｇ／ｍｌ的ＧＭ３／ＧＤ３处理后,ＧＤ３处理组织内Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号弥漫分布于整个细胞,而经ＧＭ３处理组和对照组阳性信号集中于核模,ＧＭ３／ＧＤ３处理组及对照组ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号均集中核膜,但ＧＭ３处理组信号强度最大,上述结果提示,ＧＤ３可使某些肿瘤细胞向更加恶性的方向发展,而ＧＭ３则可使某些     

孟山都公司将重组作物、食品的检测技术的开发销售权转让给SDI公司

《日经生物技术》１９９９年４月２６日第１５页报道：正在销售用基因重组技术开发的农作物和食品（ＧＭＯ：ＧｅｎｅｔｉｃａｌｌｙＭｏｄｉｆｉｅｄＯｒｇａｎｉｓｍｓ）检测试剂盒的美国ＳｔｒａｔｅｇｉｃＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（ＳＤＩ）公司宣布,４月１４日同美国孟山都公司签定了关于ＧＭＯ检测技术的开发及技术转让合同。按着合作协议,ＳＤＩ公司获得了使用孟山都公司所具有的技术开发ＧＭＯ检测试剂盒的权利。ＳＤＩ公司决定今后开发和销售面向食品加工企业和原料供给业者的ＧＭＯ检测试剂盒。日本和欧美有很多对食品原料进行Ｇ…     

外源性GM_3／GD_3对人肝癌培养细胞原癌基因表达的研究

应用原位分子杂交技术及细胞图象分析证实了人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１细胞经１０μｇ／ｍｌ的ＧＭ_３／ＧＤ_３处理后,ＧＤ_３处理组细胞内Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号弥漫分布于整个细胞,而经ＧＭ_３处理组和对照组阳性信号集中于核膜。ＧＭ_３／ＧＤ_３处理组及对照组ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ的阳性信号均集中于核膜,但ＧＭ_３处理组信号强度最大。上述结果提示,ＧＤ_３可使某些肿瘤细胞向更加恶性的方向发展,而ＧＭ_３则可使某些肿瘤细胞向正常方向转化。     

颗粒子宫腺细胞的分离、纯化与细胞化学研究

胰蛋白酶消化小鼠子宫腺细胞区,制成单细胞悬液,滴片后进行细胞学及细胞化学研究。结果：有多种类型细胞存在于悬液中,其中中等大小细胞（直径２０μｍ左右）大部分为颗粒子宫腺细胞（ＧｒａｎｕｌａｔｅｄＭｅｔｒｉａｌＧｌａｎｄＣｅｌｌｓ,ＧＭＧｃｅｌｌｓ）。ＧＭＧ细胞约占所有细胞的５０％。利用Ｐｅｒｃｏｌｌ非连续性密度梯度离心可以提高ＧＭＧ细胞的纯度,使之达８０％以上。细胞化学研究显示ＧＭＧ细胞含ＡＣＰ,ＮＳＥ,ＬＮＡｓｅ及糖蛋白成份。     

MPF Induction of Microtubule Assembly at Interphase Kinetochore of CHO Cells

ＭＰＦＩｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆＭｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅＡｓｓｅｍｂｌｙａｔＩｎｔｅｒｐｈａｓｅＫｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅｏｆＣＨＯＣｅｌｌｓＦＥＮＧＭｅｉ;（冯梅）ＺＨＡＮＧＨｕａｎ－ｘｉａｎｇ;（张焕相）ＷＡＮＧＹｏｎｇ－ｃｈａｏ;（王永潮）ＷＡＮＧＹｕｅ...     

吸血蠓群落的地理分布

吸血蠓群落的地理分布ＧＥＯＧＲＡＰＨＩＣＡＬＤＩＳＴＲＩＢＵＴＩＯＮＯＦＢＬＯＯＤ－ＳＵＣＫＩＮＧＭＩＤＧＥＣＯＭＭＵＮＩＴＩＥＳ关键词吸血蠓群落,聚类分析,地理分布ＫｅｙｗｏｒｄｓＢｌｏｏｄ－ｓｕｃｋｉｎｇｍｉｄｇｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ,Ｃｌｕｓ...     

O^6—甲基鸟嘌呤—DNA—甲基转移酶与肿瘤预见性化疗

以中国人肿瘤株和活检组织为材料,观察了Ｏ^6－甲基鸟嘌呤－ＤＮＡ－甲基转移酶（ＭＧ ＭＴ）酶活性与亚硝脲药物耐药笥之间的关系,证明ＭＧＭＴｍＲＮＡ高表达是产生耐药笥的原因;体外和临床实验证明链脲菌素和苄基鸟嘌呤可以抑制ＭＧＭＴ酶活笥,克服耐药性;体外实验证明反义寡聚核苷酸可以调节ＭＧＭＴ基因表达,逆转录病毒介导的反义ＲＮＡ可以调节ＭＧＭＴ     

反义RNA调节肿瘤细胞O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶活性

报道了逆转录病毒载体介导的反义ＲＮＡ对肿瘤细胞Ｏ６－甲基鸟嘌呤－ＤＮＡ甲基转移酶（ＭＧＭＴ）活性的调节作用．构建了三个表达ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ的逆转录病毒载体并用它们转染ＨｅＬａＳ３肿瘤细胞,观察细胞在转染前后ＭＧＭＴｍＲＮＡ水平、ＭＧＭＴ活性及其对ＡＣＮＵ抗药性的变化．发现针对ＭＧＭＴｍＲＮＡ５’端的反义ＲＮＡ能够有效地降低ＭＧＭＴｍＲＮＡ水平和ＭＧＭＴ活性并使细胞对ＡＣＮＵ的敏感性提高４．６倍;针对ＭＧＭＴｍＲＮＡ全长的反义ＲＮＡ也能在一定程度上调节细胞的ＭＧＭＴｍＲＮＡ水平和ＭＧＭＴ活性并增加细胞对ＡＣＮＵ的敏感性,而针对３’端序列的反义ＲＮＡ对ＭＧＭＴ活性没有调节作用．     

植被类型图的绘制——以西藏植被图为例

植被类型图的绘制———以西藏植被图为例田新智（中国科学院植物研究所,北京１０００９３）ＭＥＴＨＯＤＳＩＮＤＲＡＷＩＮＧＭＡＰＯＦＶＥＧＥＴＡＴＩＯＮＴＹＰＥＴｉａｎＸｉｎｚｈｉ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ,ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳ...     

黄脊蛇肺微血管的扫描电镜观察

黄脊蛇肺微血管的扫描电镜观察ＥＭＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＯＮＴＨＥＬＵＮＧＭＩＣＲＯＶＡＳＣＵＬＡＴＵＲＥＯＦＴＨＥＳＮＡＫＥＣＯＬＵＢＥＲＳＰＩＮＡＬＩＳ关键词黄脊蛇肺微血管构筑扫描电镜ＫｅｙｗｏｒｄｓＣｏｌｕｂｅｒｓｐｉｎａｌｉｓ,Ｌｕｎｇ,Ｍｉｃ...     

Total Contents of 《Natural Product Research and Development》in 2 0 0 1

Ｖｏｌ.13　Ｎｏ .11.Ｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆｔｈｉｃｋｆｒｕｉｔｍｉｌｌｅｔｔｉａｒｏｏｔ(Ｍｉｌｌｅｔｔｉａｐａｃｈｙｃａｒｐａ)ＳＨＡＯＷｅｉ ｙａｎ ,ＺＨＵＹａ ｆｅｉ,ＧＵＡＮＳｈａｎ ｙｕｅｅｔａｌ.(1)…………………………………………………………………2 .ＨＲＦＡＢＭＳａｎｄＥＩＭＳｏｆｎｅｗβ ｄｉｈｙｄｒｏａｇａｒｏｆｕｒａｎｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｐｏｌｙｏｌｅｓｔｅｒｓＷＡＮＧＭｉｎｇ ａｎ ,ＷＵＷｅｎ ｊｕｎ ,ＺＨＯＵＷｅｎ ｍｉｎｇｅｔａｌ.(5…     

重组人MCAF／GM－CSF融合蛋白表达及其生物学活性研究

利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ体外重组方法,把作为导向效应细胞到靶部位的单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）进行基因融合,置于ｐＢＶ２２０载体的λＰＲＰＬ串联启动子下游,构建了ＳＤ序列与ＡＴＧ之间含有不同核苷酸组成的重组质粒ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３。ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３的翻译起始区都不存在稳定的二级结构,但ＤＨ５α（ｐＭＧ０２、ＤＨ５α（ｐＭＧ０３）的表达水平远远高于ＤＨ５α（ｐＭＧ０１）,ＤＨ５α（ＰＭＧ０１）几乎没有表达。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,它能分别与ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ抗体发生特异反应。生物学活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性和维持ｈＧＭ－ＣＳＦ依赖的ＴＦ１细胞生长的特性,说明ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ的生物学功能是相容的．     

三尖杉科植物RAPD分析及其系统学意义

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术分析了三尖杉科植物三尖杉Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ ｆｏｒｔｕｎｅｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．、粗榧Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓＬｉ、海南粗榧Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ ｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓＬｉ和篦子三尖极Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓ ｏｌｉｖｅｒｉＭａｓｔ。,经筛选Ｏｐｅｒｏｎ公司的４组８０个引物,其中１１４个引物的谱带清晰呈多态性。采用ＵＰＧＭＡ法对各样本     

重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子的实验室培养、复性和分离纯化

建立了一个实验室制备重组ｈＧＭ-ＣＳＦ的培养、复性和分离纯化的技术工艺。通过对ＰＥＧＭ工程菌的生长和诱导表达等条件的初步调整,使ｈＧＭ-ＣＳＦ的表达量从１６.９％提高到３２.３％,获得０.７４９ｇ／Ｌ的包含体,纯度为６５％;包含体用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍溶解和稀释复性后,经ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ．ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００ＨＲ层析分离,制得纯度达９７％以上、比活性为３.０×１０^７ｕ／ｍｇ的ｈＧＭ-ＣＳＦ,纯化总回收率约为５％     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体α链（GM-CSFRα）的克隆与表达

ＧＭ-ＣＳＦ高亲和力受体至少由两条链组成,低亲和力的α链及无结合力活性的β链。本文采用ＲＴ-ＰＣＲ的方法,从ＧＭ-ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ-１中克隆了全长的ＧＭ-ＣＳＦＲα链Ｃｄｎａ（包括信号肽部分）,经酶切及全基因测序鉴定,并分别在原核及真核细胞表达系统中表达。在大肠杆菌中ＧＭ-ＣＳＦＲα以ＧＳＴ融合蛋白形式表达,谷胱甘肽Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化融合蛋白。ＧＳＴＣＳＦＲαＣ无受体活性,推测主要与缺乏翻译后修饰有关。将全基因克隆入真核表达载体Ｐｓｖｌ中,转染ＣＯＳ-７细胞瞬时表达以重建ＧＭ-ＣＳＦ的低亲和力受体,１２５ＩＧＭ-ＣＳＦ平衡结合实验证明转染后的ＣＯＳ-７细胞膜上有受体的表达,Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ显示表达的受体α链分子量略低于ＴＦ-１细胞。胞外区基因（ＣＳＦＲαＢ）克隆入Ｐｓｖｌ构建的Ｐｓｖｌ／ＣＳＦＲαＢ表达载体,转染ＣＯＳ-７细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达细胞上清,有单一的反应带,表达上清有ＧＭ-ＣＳＦ的受体活性。     

rhGM—CSF／LIF融合蛋白基因的克隆及表达

利用基因重组技术,人工构建了一个编码五肽Ｇ－Ｓ－Ｇ－Ｇ－Ｓ的基因接头,将ＧＭ－ＣＳＦ和ＬＩＦ的ｃＤＮＡ相连而构成融合基因,将融合基因载入原核表达载体ｐＢＶ２２０后转化大肠杆菌,经热诱导后进行Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹反应鉴定证实获得ｒｈＧＭ－ＣＳＦ／ＬＩＦ融合蛋白（简称ｒｈｇＭ－ＬＩＦ）活性测定表明重组的融合蛋白具有两因子双重活性。