大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin D和caspase-9表达的动态变化

目的:探讨大鼠缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶D(Cathepsin D CD)、caspase-9在不同时段蛋白质及mRNA表达变化。方法:将60只S D大鼠随机分为三组:正常组(10只),假手术组(10只),脑缺血再灌注组(40只),线栓法制备大脑中动脉梗死模型(MCAO),免疫组化及RT-PCR法分别检测Cathepsin D、caspase-9的蛋白和mRNA表达。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注损伤后6h Cathepsin D的蛋白和mRNA表达明显增强(P<0.05),24h达高峰,48h仍保存高水平。caspase-9蛋白和mRNA6h开始明显升高,12h达高峰,此后缓慢下降,但48h组仍显著高于对照组(P<0.05),结论:Cathepsin D、caspase-9在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,溶酶体可能参与了脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的过程。     

大鼠脑缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶B表达的动态变化

目的:探讨大鼠脑缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶B(Cathepsin-B,CB)在不同时段表达变化.方法:将60只SD大鼠随机分为正常组(10只),假手术组(10只)和脑缺血再灌注组(40只),线栓法制备大脑中动脉梗死模型(MCAO),免疫组化和RT-PCR法分别检测Cathepsin-B的蛋白和mRNA表达.结果与正常组和假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注后1hCathepsin-B的蛋白和mRNA表达明显增强,6h达高峰,48h仍保存高水平.结论:Cathepsin-B在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,可能在神经元凋亡中发挥着重要的作用.     

大鼠脑缺血再灌注后组织蛋白酶D蛋白质及mRNA的表达

目的：探讨大鼠缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶D（Cathepsin DCD）在不同时段蛋白质及mRNA表达变化。方法：将60只SD大鼠随机分为三组：正常组（10只）,假手术组（10只）,脑缺血再灌注组（模型组）（40只）,线栓法制备大脑中动脉梗死模型（MCAO）,免疫组化及RT-PCR法分别检测CathepsinD的蛋白和mRNA表达。结果：与正常组和假手术组比较,模型组在大鼠脑缺血再灌注损伤后6hCathepsin D的蛋白和mRNA表达明显增强（P＆lt;0.05）,24h达高峰,48h仍保存高水平。结论：Cathepsin D在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,溶酶体CathepsinD可能参与了脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡。     

大鼠脑缺血再灌注后Smac、XIAP和caspase-9表达及活血通络方的干预作用

目的：探讨大鼠脑缺血再灌注后线粒体通路第二种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物（Smac）、凋亡抑制蛋白（XIAP）和凋亡蛋白酶（caspase）-9的表达变化及活血通络方的干预作用机理。方法：将大鼠随机分成模型组、活血通络组,大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。大鼠脑缺血再灌注6、12、24和48 h不同时间点进行神经功能评分,用免疫组化法检测Smac、XIAP和caspase-9阳性细胞数。结果：缺血再灌注后6 h模型组神经功能症状积分升高,缺血半暗带皮质内神经元凋亡增多,Smac、XIAP和caspase-9蛋白的表达亦有明显上升,再灌注12 h达高峰（P〈0.05,P〈0.01）,随后出现下降。活血通络方能显著降低神经功能症状积分,减少神经元凋亡,促进XIAP表达,下调Smac和caspase-9表达（P〈0.01,P〈0.05）。结论：脑缺血再灌注后脑组织Smac、XIAP和caspase-9蛋白的表达均明显增加,提示它们可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用,活血通络方可能通过促进XIAP并抑制Smac、caspase-9表达保护神经元及神经功能。     

活血通络方对大鼠脑缺血再灌注后Cyto-C和caspase表达的干预

目的:探讨活血通络方通过线粒体途径抗大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡机制.方法:将大鼠随机分成假手术组、模型组、活血通络组,大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型.大鼠脑缺血再灌注6、12、24和48h不同时间点进行神经功能评分,并用原位末端标记法检测凋亡神经元,用免疫组化法检测Cyto-C、caspase-9、caspase-3阳性细胞数.结果:活血通络方对再灌注各时间点神经功能评分有不同程度的改善,能减少神经元凋亡指数和Cyto-C、caspase-9、caspase-3的表达(P＜0.01～0.05).结论:Cyto-C、caspase-9和caspase-3在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用,活血通络方能减轻缺血再灌注所致神经元凋亡,保护神经功能,其机理与抑制细胞凋亡线粒体通路有关.     

活血通络方对大鼠脑缺血再灌注后Cyto—C和caspase表达的干预

目的：探讨活血通络方通过线粒体途径抗大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡机制。方法：将大鼠随机分成假手术组、模型组、活血通络组,大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。大鼠脑缺血再灌注6、12、24和48h不同时间点进行神经功能评分,并用原位末端标记法检测凋亡神经元,用免疫组化法检测Cyto-C、caspase-9、caspase-3阳性细胞数。结果：活血通络方对再灌注各时间点神经功能评分有不同程度的改善,能减少神经元凋亡指数和Cyto—C、caspase一9、caspase-3的表达（P〈0．01-4）．05）。结论：Cyto-C、caspase．9和caspase-3在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用,活血通络方能减轻缺血再灌注所致神经元凋亡,保护神经功能,其机理与抑制细胞凋亡线粒体通路有关。     

Exendin-4 对糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑组织中MMP-9 表达的影响

目的:通过观察Exendin-4对糖尿病大鼠脑缺血再灌注后脑梗死体积百分比及脑组织中金属基质蛋白酶-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1的变化,探讨Exendin-4对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法:选用SD大鼠,给予链脲佐菌素(streptozocin,STZ)建立糖尿病大鼠模型后,随机分为A组:糖尿病对照组(n=6);B组:模型组(n=6);C组:Exendin-4低剂量组(n=6);D组:Exendin-4中剂量组(n=6);E组:Exendin-4高剂量组(n=6)。常规喂养6周后,A组给予假手术处理,B、C、D及E组采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血90 min再灌注模型,24 h后处死大鼠取脑组织,采用2,3,5一氯化三苯四唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测算脑梗死体积百分比;同时分别采用Western Blot法及RT-PCR测量脑组织中的MMP-9及TIMP-1表达量。结果:脑缺血再灌注能致脑组织中MMP-9及TIMP-1表达量增高,各组与A组比较,有显著差异(P<0.05);给予Exendin-4处理后脑组织中MMP-9及TIMP-1表达增高程度及脑梗死体积百分比明显降低,与B组比较有显著差异(P<0.05)。结论:Exendin-4对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与抑制MMP-9及TIMP-1的表达有关。     

脑缺血和再灌注后大鼠海马组织三磷酸肌醇的变化

脑缺血和再灌注后大鼠海马组织三磷酸肌醇的变化方以群刘景昌时粉周（海军医学研究所,上海２００４３３）近年研究发现,神经细胞内游离Ｃａ２＋浓度超载是脑缺血及再灌注时细胞损伤的重要原因之一。三磷酸肌醇（ＩＰ３）是新发现的一类细胞内第二信使物质,已经证实它可...     

大鼠脑缺血再灌注血管壁NOS和ICAM-1的表达

一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）与脑血管功能有重要关系,细胞间粘附分子1（ICAM－1）可由脑缺血／再灌注诱导产生并与脑组织损伤密切相关,本实验用免疫组织化学和NADPH－d酶组织化学方法,观察了SD大鼠实验性脑缺血再灌注内皮细胞ICAM－1和NOS的表达,结果显示正常对照组大鼠脑血管ICAM－1免疫组织化学显色为阴性或弱阳性反应,再灌注2h,ICAM－1阳性反应明显增强,与对照组相比,P＜0.01。随再灌注至16h,ICAM－1表达增加近一倍。脑缺血1h缺血侧侧脑血管壁开始出现NOS的阳性表达,与对照组相比,P＜0.01,再灌注2h,NOS表达最多,随后逐渐下降,结果提示脑缺血再灌注与ICAM－1和NOS表达升高有关。     

丹龙醒脑片对老年大鼠脑缺血再灌注后炎症反应的影响

目的:从肿瘤坏死因子-a(TNF-a)和白介素(IL-1β)表达变化揭示丹龙醒脑片抗老年脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法:用大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型,将动物随机分为假手术组、模型组、丹龙醒脑片组和尼莫地平组,采用免疫组化法,观察TNF-a和IL-1β蛋白的表达。结果:丹龙醒脑片能显著减轻神经细胞的损伤;假手术组有一定量的TNF-a和IL-1β表达,缺血后TNF-a和IL-1β迅速增加,丹龙醒脑片组显著抑制TNF-a和IL-1β的表达,模型组和丹龙醒脑片组差异有统计学意义(P0.01,P0.05)。结论:丹龙醒脑片抗老年脑缺血再灌注损伤的保护机制与其抑制由缺血再灌注损伤诱导的TNF-a和IL-1β等表达有关。     

三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注后脑内NGF和bFGF表达的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对局灶性脑缺血再灌注后脑组织神经生长因子(NGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达的影响.方法:采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血再灌注模型.实验动物随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、模型 PNS治疗组和模型 尼莫地平治疗组.用免疫组织化学方法检测脑内皮质、海马等区域NGF和bFGF蛋白表达.结果:缺血2h再灌注46h后,脑内海马和皮质区的NGF表达降低,PNS能显著上调海马、皮质区及丘脑区域NGF的表达.缺血2h再灌注46h后,bFGF的表达各脑区无明显差异;但PNS能显著上调缺血再灌注损伤后胼胝体区域内bFGF的表达.结论:局灶性脑缺血再灌注后,PNS能上调缺血脑组织内NGF和bFGF表达,尤其是促进了NGF的表达,这可能是PNS对脑缺血后损伤神经元的保护机制之一.     

VEGF 对大鼠脑缺血再灌注损伤的预防作用及其机制研究

目的:研究局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡、HSP70蛋白表达时空规律以及外源VEGF及VEGF抗体对它们的影响,探讨VEGF对缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法:采用原位末端标记(TUNEL)、免疫组化方法,研究局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡数及HSP70蛋白表达时空分布,采用脑表面使用VEGF及侧脑室注射VEGF抗体,观察内外源VEGF对它们的影响.结果:VEGF抗体能显著增加缺血侧脑组织凋亡细胞数(再灌注12h-7d)及HSP70表达量(再灌注1-3d),而外源VEGF因子能显著减少同侧脑组织凋亡细胞(再灌注全程)及HSP70表达量(再灌注1-3d).结论:VEGF因子可抑制缺血脑组织细胞凋亡及HSP70表达量,提示VEGF参与保护缺血性脑损伤.     

Identification of an alternative form of caspase-9 in human gastric cancer cell lines: a role of a caspase-9 variant in apoptosis resistance

Overcoming apoptosis resistance to chemotherapy and radiation may lead to a reduction in gastric cancer death. We hypothesize that the apoptotic machinery in gastric cancer cells is dependent upon specific cellular conditions. In the course of our study of the expression of apoptosis-related genes in human gastric cancer cell lines, we have identified a cDNA clone which predicts an alternative form of caspase-9. The caspase-9 variant, which we designated as caspase-9 beta, retained a truncated structure of native caspase-9 without its catalytic domain and was expressed in seven cell lines from human gastric cancer. Among the cell lines examined, MKN-28 cells, which exhibited the most resistance against apoptotic stimuli, expressed the highest level of caspase-9 beta. The induction of apoptosis by staurosporine or actinomycin D was markedly suppressed in caspase-9 beta-transfected HeLa cells. These results are consistent with our hypothesis that the caspase-9 beta may be an endogenous dominant-negative molecule which attenuates apoptotic activity in human gastric cancer cells.     

Parthenolide protects human lens epithelial cells from oxidative stress-induced apoptosis via inhibition of activation of caspase-3 and caspase-9

The apoptosis of lens epithehal cells has been proposed as the common basis of cataract formation, with oxidative stress as the major cause. This study was performed to investigate the protective effect of the herbal constituent parthenolide against oxidative stress-induced apoptosis of human lens epithelial （HLE） cells and the possible molecular mechanisms involved. HLE cells （SRA01-04） were incubated with 50 μM H2O2 in the absence or presence of different doses of parthenolide （10, 20 and 50 μM）. To study apoptosis, the cells were assessed by morphologic examination and Annexin V-propidium iodide double staining flow cytometry; to investigate the underlying molecular mechanisms, the expression of caspase-3 and caspase-9 were assayed by Western blot and quantitative RT-PCR, and the activities of caspase-3 and caspase-9 were measured by a Chemicon caspase colorimetric activity assay kit. Stimulated with H202 for 18 h, a high fraction of riLE cells underwent apoptosis, while in the presence ofparthenolide of different concentrations, dose-dependent blocking of HLE cell apoptosis was observed. The expression of caspase-3 and caspase-9 induced by H202 in HLE cells was significantly reduced by parthenolide both at the protein and mRNA levels, and the activation ofcaspase-3 and caspase-9 was also suppressed by parthenolide in a dose-dependent manner. In conclusion, parthenolide prevents HLE cells from oxidative stress-induced apoptosis through inhibition of the activation ofcaspase-3 and caspase-9, suggesting a potential protective effect against cataract formation.