沙眼衣原体分泌性蛋白Pgp3滴鼻免疫增强小鼠对衣原体生殖道感染的保护作用

【目的】探讨不同免疫途径沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)分泌性蛋白Pgp3的免疫保护效果,分析其可能的保护机制,以确定Pgp3蛋白疫苗在Ct疫苗研制中的应用价值。【方法】分泌性蛋白Pgp3经滴鼻或肌注途径免疫雌性Balb/c小鼠,免疫60 d后,阴道接种鼠沙眼衣原体(Chlamydia muridarum,Cm)建立生殖道感染动物模型,在该模型中评价Pgp3蛋白疫苗抗Cm感染的保护效果,并探讨其机制。【结果】滴鼻或肌注免疫后,小鼠血清及生殖道中检测到了特异性抗体;小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ、IL-17及IL-5水平均明显高于对照组,且滴鼻免疫组IFN-γ水平升高较肌注组更显著(P<0.05);Pgp3蛋白滴鼻免疫组小鼠经Cm生殖道感染后,阴道带菌时间明显缩短,输卵管病理改变轻而肌注免疫组其保护作用不明显。【结论】Pgp3蛋白经滴鼻免疫可有效诱导小鼠产生明显的抗Cm保护效应。其可能的免疫保护机制与诱导Th1型为主的细胞免疫应答及高效价的特异性抗体有关,提示Pgp3蛋白疫苗具有潜在的疫苗研究与开发价值。     

流感新型黏膜疫苗的研究

目的评价PorA、PorB和Class4对流感裂解疫苗的免疫增强作用,从中挑选出最有效的流感黏膜佐剂,为发展流感黏膜疫苗提供理论基础。方法流感三价裂解抗原按比例与PorA、PorB和Class4非共价结合,滴鼻免疫Balb／c小鼠3次,采取间接ELISA检测血清特异性IgG抗体及抗体亚型,检测鼻咽、肺、小肠和阴道冲洗液中IgA效价,采用血凝抑制试验检测血清中HAI效价。结果PorB重组蛋白佐剂组较无佐剂的流感裂解抗原组在提高小鼠早期免疫应答的同时诱导较强的系统免疫应答和黏膜免疫应答;PorA组也有黏膜佐剂的功能,但和无佐剂的流感裂解抗原组相比,差异无统计学意义。结论在蛋白体的三分子中,以PorB为佐剂的流感黏膜疫苗不仅提高了抗原的系统免疫应答,而且诱导了较强的小鼠呼吸道、生殖道的局部黏膜免疫应答,为流感黏膜疫苗的研制奠定了理论基础。     

枸杞多糖对甲型H1N1流感裂解疫苗黏膜接种的免疫增强作用

探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对不同剂量甲型H1N1流感裂解疫苗黏膜免疫的佐剂效力。设单独免疫LBP组和不免疫组作为对照,BALB/c小鼠以滴鼻方式免疫两次,间隔三周,二次免疫后两周收集小鼠血清、鼻洗液和脾脏淋巴细胞。结果显示血清中甲流特异性IgG和HI抗体滴度与接种疫苗剂量呈正相关,LBP的添加可提高体内抗体水平。高剂量组小鼠鼻洗液中也检测到特殊异性sIgA。单独疫苗组和添加佐剂组均能在体内诱导产生IgG1和IgG2a,所有组别IgG1抗体水平均略高于IgG2a,表明滴鼻接种裂解疫苗诱导Th1/Th2混合型免疫,LBP对Th1和Th2型免疫反应均有增强作用。高剂量疫苗添加LBP佐剂组小鼠脾脏细胞分泌IFN-γ水平显著高于其他组别,表明其在小鼠体内诱导了较强烈的细胞免疫反应。以上实验结果均证实LBP可以作为佐剂增强甲流裂解疫苗经黏膜途径免疫时的免疫效力。     

用重组腺病毒表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7可获得良好的免疫学效果

为探索利用重组腺病毒表达轮状病毒的结构抗原以制备轮状病毒基因工程疫苗的可行性,构建了一株可表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7的重组腺病毒AdEasyCVP7.AdEasyCVP7感染293细胞后,RT－PCR证明VP7基因有转,Western blotting试验可检测到VP7的表达。随后,用AdEasyCVP7通过灌胃和滴鼻两种不同途径免疫小鼠,并对免疫后小鼠的血清抗体和粘膜抗体进行了比较。初次免疫后,两组小鼠均有应答,但血清抗体滴度及阳转率不同。再次免疫后,滴鼻组小鼠显示出明显的加强效果。对肺灌洗液中的sIgA及肺、肠粘膜组织匀浆中的IgA进行检测发现滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。对血清中和抗体的检测表明,初次和再次免疫后,两组小鼠血清中均有中和抗体产生。该研究为轮状病毒基因工程疫苗的免疫方案、免疫途径及免疫保护作用等的进一步研究奠定了基础。     

不同蛋白载体的痢疾多糖结合疫苗小鼠免疫原性对比试验

试验中以小鼠为动物模型,对不同蛋白载体的痢疾多糖结合疫苗进行免疫效果观察。3种福氏2a痢疾结合疫苗和3种宋内氏痢疾结合疫苗分别皮下免疫NIH小鼠,同时设置O-SP(O-特异性多糖)对照组,免疫3针,在不同免疫针次间采血,用ELISA测定抗体滴度。单独使用福氏2aO-SP和宋内氏O-SP免疫后,小鼠血清中几乎没有抗LPS IgG抗体产生,而用结合疫苗免疫后,小鼠血清中产生了抗LPS IgG抗体,且第二次、第三次免疫后,小鼠血清中抗LPS IgG抗体水平有显著升高,表明结合疫苗具有加强免疫应答效应。三种不同的痢疾结合疫苗相比较,F2a-O-SP-rEPA结合疫苗较F2a-O-SP-TT结合疫苗和F2a-0-SP—DT结合疫苗的小鼠抗LPS IgG抗体水平高,S-O-SP-rEPA结合疫苗较S-O-SP-TT结合疫苗和S-O-SP—CRM9,结合疫苗的小鼠抗LPS IgG抗体水平高。以rEPA作为载体的痢疾结合疫苗比DT,TT作为载体的痢疾结合疫苗的免疫原性要强。     

以人精子抗原消化道免疫后的体液免疫反应

在Balb/c、C57和昆明鼠的消化道不同部位以人精子抗原免疫后,取其脾、肠系膜淋巴结、Peyer氏淋巴小结及子宫或附睾中的淋巴细胞进行培养。以ELISA法测定了这些部位的淋巴细胞所分泌的以及免疫小鼠肠道冲洗液和血清中的抗精子抗体。结果提示,Balb/c和昆明鼠抗精子免疫反应较强,而且雌性强于雄性。免疫部位以小肠及Peyer氏淋巴小结内注射的免疫效果较好,不仅可引起消化道局部免疫反应,而且子宫、附睾等生殖道组织也有淋巴细胞分泌抗精子抗体。     

沙眼衣原体质粒蛋白pORF5核酸疫苗抗衣原体生殖道感染免疫保护作用

探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, Ct)pORF5质粒蛋白核酸疫苗免疫保护效果, 及分析其可能的免疫保护机制, 以确定pORF5在Ct疫苗研制中的应用价值. 构建pORF5核酸疫苗, 建立Ct感染小鼠模型, 并在该模型中评价pORF5核酸疫苗抗Ct感染效果. 运用细胞培养法检测Ct清除率及定植量的改变, ELISA法分析脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4产生水平及小鼠血清及生殖道局部抗体产生情况; HE染色法分析输卵管病理组织变化; MTT法分析脾淋巴细胞增殖. 结果经鼻黏膜3次免疫后, pORF5核酸疫苗组在Ct感染后第24天其清除率为100%, 显著高于pcDNA3.1, PBS对照组(P<0.01), 定植密度明显低于对照组(P<0.01), 仅在pORF5核酸疫苗组小鼠血清及生殖道中检测到了特异性抗体, 产生的抗体亚类分别以IgG2a, IgA为主; 免疫组小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ及刺激指数均明显高于pcDNA3.1, PBS对照组(P<0.01), 但产生 IL-4的水平均较低. pORF5核酸疫苗组小鼠输卵管解剖结构基本正常, 而pcDNA3.1, PBS组小鼠输卵管壶腹部、峡部肿胀, 管壁血管扩张充血, 单侧或双侧发生不同程度扭曲变形积水. 这些资料显示pORF5核酸疫苗可诱导小鼠产生明显的抗Ct保护效应, 其可能的免疫保护机制包括诱导Th1型为主的细胞免疫应答及高效价的特异性抗体的产生, 提示pORF5核酸疫苗具有潜在的疫苗研究与开发价值.     

PolyI:C协同IL-15作为小鼠卵透明带3基因疫苗佐剂黏膜免疫效果的观察

目的:以Toll样受体拮抗物Poly I:C协同细胞因子IL-15作为免疫佐剂,通过滴鼻方式免疫ICR小鼠,对卵透明带3(murine zona pellucida,m ZP3)基因疫苗的免疫增强效果进行观察。方法:将Poly I:C和IL-15单独或协同与用壳聚糖(chitosan,Chi)包裹的m ZP3基因疫苗滴鼻免疫ICR小鼠,ELISA法检测小鼠血清中特异性抗m ZP3抗体和生殖道黏液、肺洗液中s Ig A的水平,MTT法检测淋巴细胞增殖,小鼠的平均窝仔数和生育率检测抗生育情况,组织学观察小鼠的卵巢病理切片。结果:Poly I:C协同IL-15共同免疫组能够显著提高免疫后小鼠抗m ZP3抗体的水平,促进淋巴细胞的增殖,平均窝仔数和生育率显著降低,小鼠的卵巢发育异常。结论:Poly I:C协同IL-15能够增强m ZP3基因疫苗的免疫效果,并在一定程度上降低小鼠生育率。     

玉竹多糖对流感病毒裂解疫苗的黏膜佐剂效应

探讨玉竹多糖(Polygonatum odoratun polysaccharides,POP)对流感病毒裂解疫苗黏膜免疫的佐剂效果。以BALB/c小鼠为模型,将H7N9流感病毒裂解疫苗单独或者添加不同剂量的POP(400、600、800、1 000和1200μg)做佐剂一次性滴鼻免疫小鼠,免疫三周后小鼠以致死剂量同源病毒攻击。实验结果表明,当在疫苗中加入1 000μg POP时,与疫苗单独免疫相比,单次滴鼻免疫就明显增强了小鼠抵抗致死量病毒感染的能力,体重丢失减少,肺部残余病毒滴度下降,存活率提高;血清中疫苗特异性IgG抗体和HI抗体以及鼻洗液中SIgA抗体都提高了;IgG亚类抗体检测显示,POP的加入显著增加了IgG1的抗体滴度,但抑制了IgG2a的产生,说明诱导的免疫应答偏向于Th2型。实验表明POP在一定剂量时能增强疫苗诱导的免疫应答,显示出黏膜佐剂效应。     

宋内氏痢疾杆菌O-SP-TT结合疫苗的制备及其免疫学特性的研究

宋内氏痢疾杆菌（S.Sonnei)的一个重要保护性抗原是菌体抗原（O抗原）即细菌细胞壁中的脂多糖（LPS）成分,已证实血清中足够水平的抗LPS IgG抗体抗体即能对该菌提供免疫保护作用。本文选用Westphal热酚法提纯宋内氏痢疾菌LPS,经酸水解法进一步脱毒处理后得到无毒但却具弱免疫原性的O-特异性多糖（O－SP）,然后采用化学方法即通过连接剂己二酸二肼（ADH）将其共价结合到破伤风类毒素（TT）上,共制备得到了三批宋内氏痢疾杆菌O－SP－TT结合疫苗。经生化和免疫学方法检测证实我们提纯的LPOS,OSP及其合成的L－SP－AH衍生物,O－SP－TT结合物均具有宋内氏痢疾杆菌O抗原特异性,同时其核酸和杂蛋白质含量低（≤2%),表明纯度较高。同时经小鼠免疫原性试验证实三批结合物免疫小鼠后产生的抗LPS IgG抗体滴度均比单一O－SP免疫后产生的要高出10倍以上,且结合物再次注射后存在加强应答。补体介导的体外杀菌力试验表明结合物免疫小鼠后诱导产生的血清抗LPSIgG抗体对宋内氏痢疾杆菌具特异性杀菌活性。本文结果表明宋内氏痢疾杆菌O-SP-TT结合疫苗可望作为一种有效的侯选痢疾疫苗做进一步的大规模人体观察。     

Recent advances in the study of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus replication and pathogenesis

It has now been over twenty years since a novel herpesviral genome was identified in Kaposi's sarcoma biopsies. Since then, the cumulative research effort by molecular biologists, virologists, clinicians, and epidemiologists alike has led to the extensive characterization of this tumor virus, Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus(KSHV; also known as human herpesvirus 8(HHV-8)), and its associated diseases. Here we review the current knowledge of KSHV biology and pathogenesis, with a particular emphasis on new and exciting advances in the field of epigenetics. We also discuss the development and practicality of various cell culture and animal model systems to study KSHV replication and pathogenesis.     

The structure, reproduction and taxonomy of Vidalia and Osmundaria (Rhodophyta, Rhodomelaceae)

Comprises species occurring mostly in subtidal habitats in tropical, subtropical and warm-temperate areas of the world. An analysis of the type species, V. spiralis (Sonder) Lamouroux ex J. Agardh, a species from Australia, establishes basic characters for distinguishing species in the genus. These characters are (1) branching patterns of thalli, (2) flat blades that may be spiralled on their axis, (3) width of the blade, (4) primary or secondary derivation of sterile and fertile branchlets and (5) position of sterile and fertile branchlets on the thalli. Application of the latter two characters provides an important basic method for separation of species into three major groups. Osmundaria , a genus known only in southern Australia, was studied in relation to Vidalia , and its separation from the Vidalia assemblage is not accepted. Species of Vidalia therefore are transferred to the older genus name, Osmundaria. Two new species, Osmundaria papenfussii and Osmundaria oliveae are described from Natal. Confusion in the usage of the epithet, Vidalia fimbriala Brown ex Turner has been clarified, and Vidalia gregaria Falkenberg, described as an epiphyte on Osmundaria pro/ifera Lamouroux, is revealed to be young branches of the host, Osmundaria prolifera.     

New or rare chromosome counts in Artemisia L. (Asteraceae, Anthemideae) and related genera from Kazakhstan

Fifteen chromosome counts of six Artemisia taxa and one species of each of the genera Brachanthemum, Hippolytia, Kaschgaria, Lepidolopsis and Turaniphytum are reported from Kazakhstan. Three of them are new reports, two are not consistent with previous counts and the remainder are confirmations of very scarce (one to four) earlier records. All the populations studied have the same basic chromosome number, x = 9, with ploidy levels ranging from 2x to 6x. Some correlations between ploidy level, morphological characters and distribution are noted.     

肝癌中HBV和HCV基因和抗原的分布及意义

采用原位分子杂交方法检测HCV RNA及HBV X基因;采用免疫组织化学方法研究HCV核心抗原,非结构区C33c抗原及HBxAg在肝细胞肝癌中的定位及分布.结果表明(1)HCV RNA、HBV X基因在肝细胞肝癌组织检出率分别为40%(55/136)和82%(112/136).HCV RNA定位于癌细胞的胞浆内,阳性细胞呈散在、灶状及弥漫分布三种形式;HBV X基因在肝癌细胞中的分布呈胞浆型、核型及核浆型,阳性细胞也呈上述三种分布形式;(2)HCV C33c抗原、核心抗原在肝细胞肝癌中的阳性率为81%(133/164)及86%(141/164).C33c抗原定位于癌细胞及肝细胞的胞浆内;核心抗原既定位于癌细胞核中,又可定位于胞浆中.C33c抗原阳性细胞以灶状分布为主;而核心抗原阳性细     

Selection with two alleles and complete dominance

For a plant selection model with frequency-independent viabilities, fertilities and selfing rates, it is shown that apart from global fixation, for certain parameter combinations a protected polymorphism and facultative fixation (either allele may become fixed according to initial frequencies) may both occur. Facultative fixation requires different selling rates for the dominant and recessive type. Protection of the polymorphism requires resource allocation for male and female function. In this connection the problem of purely genetically caused population extinction is discussed.
For general frequency dependence and regular segregation, the chances for establishment of a completely recessive gene are compared to those of a completely dominant gene. It is proven that the process of establishment of the recessive gene, despite a fitness advantage, may be considerably endangered by drift effects if random mating prevails. The recessive gene may reach the same effectivity in establishment as a dominant gene, only if the recessive homozygote mates exclusively with its own type during the period of establishment.