医药其它

930515用杆状病毒表达载体大量生产人卢一神经生长因子[会,英]/Nguyen,B.…/Abstr.Pap.AmChem.Soc.一1992,203Meet.,Pt.1.一BIOT26[译自DBA,1992,11(15),92.08511] 生物活性的hNGF的生产是用杆状病毒表达载体在昆虫细胞培养物中进行。为了增加hNGF产量而发展了一种应用无血清培养基进行高细胞密度草地夜蛾sf9悬浮细胞培养法。每天分析培养液内葡萄糖和氨基酸水平。葡萄糖和谷氨酰胺的缺少与细胞生长缓慢相关。含葡萄锗、谷氨酰胺、酵母粉和脂的混合营养液能保持细胞生长速度。这种混合营养液加在培养容器中,以便保持细胞高密度生长…     

动物细胞培养及单克隆抗体

920944生产规模培养昆虫细胞〔英万Agathos,5.N.…了B ioteehnol.Ady一1901,9(i)一51一58〔译自DBA,1991,10(15),91一08839〕 文章讨论了以下内容:昆虫细胞培养在生物技术中的应用;昆虫细胞培养的生物加工开发状况,培养基开发;用于昆虫细胞培养的培养器构建及发展方向。昆虫培养是药物和农药有效生产的良好寄主,适合于大规模技术,以满足(A)昆虫病毒生防因子和(B)对人及动物有医疗价值的重组蛋白的有计划生产的需要。其间最重要的系统是用杆状病毒载体转染的鳞翅目昆虫细胞。双翅目品系也具有发展前途(如黄猩猩果蝇、Aedes azbo尹￡e乙。…     

动物细胞培养及单克隆抗体

923289限定培并基培并杂交瘤:替代血清及其它优点〔法〕/Bosehetti,E.…了Ann。Pharm。Fr一1901,遵9(4)。一198一205〔译自DBA,1992,11(5),92 02825〕 用3种杂交瘤细胞系ATCC HB4、ATCcHB72和ATCC HB8o检验有血清和无血清培养基培养细胞的功效。介绍了这3种细胞系的性成步骤。将市售的IMDM培养基(含7%胎牛血清)与Imoeell培养基(含抗生素)作比较。采用Faleon箱和细胞培养器,细胞密度为3000。个/ml。HB72和HB80在有血清培养基中生长更好,而HB4则在无血清培养基中生长更好。事实上,HB4的MAb生产变化不明显,而另外2细胞系还略…     

农业其它

930326大蔡悬浮细胞培井物在冷冻保存期间的超徽结构变化[英]/Gnanapragasam,S.…,Plant CellRap.一1992,11(14).一169～174。医泽自DBA,1992,11(13),92—07499] 利用大黍(Panicum mazimum)悬浮细胞培养物研究了其冷冻保存期间的超微结构变化。培养物生长在补加3％蔗糖、2 mg/1 2,4一D、lOOmg/l肌醇和5％椰子汁的新鲜MS培养基(pH 5.8)(MS2C~普养基)里。冷冻前,悬浮物在补加O.33M甘露醇的MS2C培养基里预培养3天。然后,加入等体积的预冷冷冻保存剂(1.4M DMSO+1 M山梨醇),使悬浮液按O.5℃/分的速度冷却至一40"C,最后转移到液氮里…     

生物防治

924473从摇瓶到发酵镶:大规模昆虫细胞培养的挑战〔会,英〕/Belisle,B.W.…f In Vitro一1992,25(s),Pt.2。一43A〔译自DBA,1092,11 (11),92一06235〕 棒状病毒作为生防因子,要满足市场要求,还需克服成本高的问题。采用经调整的市售无血清培养基,研究了在5个鳞翅目细胞系中小规模、大规模生产胞外及包含体LdMNPV(舞毒蛾核多角体病毒)和AcMNPv(首稿银纹夜蛾核多角体病毒)。采用AeMNPV和草地夜蛾(S,o己。尹tera fr。夕玄-尹”己a) Sfg细胞作为模型系统,培养细胞,规模为100ml~401。细胞密度和存活率达到相当于所报道的含血清培养基的…     

一种适合骨髓瘤、杂交瘤细胞生长的无血清培养基

在基础培养液 DME/F12(1:1)中加入10μg/ml 转铁蛋白(T),5μg/ml 胰岛.素(Ⅰ),10μmol/L 乙醇胺(E),10^-9mol/L 亚硒酸钠(S)及1mg/ml 牛血清白蛋白(BSA)等诸种添加剂成分而构成了本试验的无血清培养基,定名为 LDSF.试验表明,LDSF 可取代常规培养基 DMEM(含10—15%胎牛血清),用于骨髓瘤、杂交瘤细胞的长期传代培养,支持杂交瘤细胞稳定、持续地分泌特异单克隆抗体(McAb),并可用于细胞融合、冻存和复苏.     

细胞工程

叨1185搅拌生物反应器中用于抗体生产的低蛋白无血清培养基喋】/Bla,y,H.D.…jl Bioteehnol.Lett一1989,11(7)一455一460降自DBA,1989,8(19),8卜11533] 要在搅拌培养槽中大规模生产单克隆杭体(MAbs),必需一种低蛋白无血清的培养基.将杂交瘤l台7.1(^TCC HB58)培养在搅拌培养槽内,以进行培养优化.无血清培养基DIF由Iscove氏和Ham氏F12培养基按卜1组成,再添加10mg/l铁饱和人类转铁蛋白,和10mg/1牛胰岛素.将脂肪酸(FA)鳌合到牛血清白蛋白(BSA)上.对低蛋白培养基IFP来说,BSA一FA可用0.1%PEG 20 000代替.尽管在极低的蛋白含量下,但…     

疫苗

922482 在酵母菌和杆状病毒系统中表达的以gP195的C-末端加工片段为基础的重组多肽的免疫学研究[会,英]/Chang,S.P.…∥Amer.J.Trop.Med.Hyg.-1991,45(3),Suppl.-268[译自DBA,1991,10(25),91-14663] 研究了恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)主要子孢子体表面蛋白(gp195)作血期疟疾疫苗的可能性。在酵母菌细胞内产生了42kDa的C-末端重组多肽,用重组杆状病毒感染的昆虫细胞培养物中也分泌42kDa区段。用天然gp195单克隆抗体识别,这两种表达的抗原决定基有差别。比     

无血清细胞培养在发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒生长中的应用

目的建立无血清培养基培养Vero细胞制备发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)的工艺。方法分别采用含10%牛血清的MEM(10%MEM培养基)和无血清M2培养基(SF-M2培养基)在方瓶中培养Vero细胞制备SFTSV,比较无血清与含血清培养基培养Vero细胞制备SFTSV在病毒滴度及病毒繁殖曲线之间的差异。在生物反应器里用无血清培养的方式进行工艺放大,收获病毒原液并进行检定。结果无血清培养的Vero细胞能够满足SFTSV培养需求,与含血清细胞培养相比,单位细胞病毒产量没有降低,达到30~60个活病毒/细胞。可以实现在生物反应器的工艺放大,病毒高峰时病毒滴度均在7.0lg PFU/m L以上。结论无血清细胞培养可以应用于SFTSV的培养,有利于降低疫苗生产过程中的纯化难度,提高疫苗安全性。     

分泌重组抗体的CHO细胞体外培养条件的优化

目的：对生物反应器细胞培养时培养时培养基组成进行优化。方法：以稳定转染了抗CD3人源化抗体的CHO细胞为模型,以无血清培养基经生物反应器高密度细胞培养后分子量小于50kDR的超滤液为基础培养基,在细胞培养板中考察添加氨基酸、丁酸钠、柠檬酸铁等多种成分对细胞生长状态和蛋白表达量的影响、结果：2mmol/L丁酸钠可以有效地诱导蛋白的表达,丁酸钠和柠檬酸铁对于促蛋白表达有协同作用,适量添加培养过程中消耗较快的氨基酸可提高细胞数和蛋白的表达量。结论：利用所述方法可快速优化培养基成分,显著提高生物反应器中细胞的蛋白表达量。     

培养基成分对东北红豆杉细胞生长和紫杉醇产量的影响

在东北红豆杉（taxus cuspidate)细胞培养物的基本培养基中加入30mg.L^-12.4-D,可以提高细胞培养物的生长量,其相对最高生长量可以达到85．999mgFW/gFW.d;培养基中加入活性炭粉末1g.L^-1,可以克服植物细胞生长过程中的褐化问题;适当种类及含量的生长调节剂的加入：6－BA0．5mg.L^-1＋KTmg.L^-1,可以使植物细胞合成和积累相对较多的紫杉醇（Taxol).     

生物防治

920202连续昆虫细胞生物反应器生产杆状病毒或盆组衍生物〔会,英〕/van Lier,F.L.J.一2 Ann.N .Y.Acad.Sci一2992,613一253~100〔译自DBA,1991,10(9),91一05063」 叙述了杆状病毒的分子生物学,以及如何生产用于昆虫生防的重组杆状病毒。此为连续操作系统,其中两个相连反应器的第一个用于培养昆虫细胞,在第二个反应器中,非封闭形首蓓银纹夜蛾(A“to夕ra夕无acal‘for。￡ca.)核多角体病毒 (AoNPV)侵染昆虫细胞。细胞裂解前完成侵染周期。在剪切力最小的饱罩塔中反应,此模型用于气提式生物反应器。4周后,在上述二步反应器中,草地夜蛾(…     

无血清细胞培养基及其主要补充因子

无血清细胞培养作为一门现代生物技术,近十年来发展很快。它不仅为细胞的生长、增殖和分化的调节和机制的研究提供了有力的工具,而且为现代生物技术科学如蛋白质工程、细胞工程和单克隆抗体等的应用奠定了基础。本文概括叙述了无血清细胞培养的历史、培养基的组成和主要补充因子,并例举了若干近期报道的无血清细胞培养的例子。     

转瓶内部结构对无血清悬浮培养昆虫细胞的影响

以昆虫细胞为宿主进行基因工程产品的开发是动物细胞培养领域十分有吸引力的研究方向[1] 。由于昆虫细胞对营养要求极高 ,且对培养环境非常敏感 ,所以一般是在含有兼具营养及保护功能的胎牛血清的培养基中进行培养。血清一方面因其高额成本而限制了昆虫细胞大规模培养技术的发展 ,另一方面又因其成分复杂、富含蛋白而给外源基因表达产物的后处理带来困难。因此 ,昆虫细胞无血清培养技术的开发一直是细胞培养工程领域的研究热点 ,采用无血清培养技术取代传统的有血清培养技术已成为昆虫细胞 杆状病毒表达系统的发展趋势[2 ] 。然而 ,昆虫细…     

骨髓间充质干细胞无血清培养

为建立一种化学成分明确的、能用于体外扩增骨髓间充质干细胞的无血清培养基, 且骨髓间充质干细胞经无血清培养扩增后仍能保持其多向分化的潜能。采用密度梯度离心结合贴壁法从1月龄新西兰大白兔股骨中分离骨髓间充质干细胞, 比较在含10%胎牛血清的培养基(SCM)和自制的化学成分明确的无血清培养基(CDSFM)中骨髓间充质干细胞的形态、增殖能力, 以及扩增后的骨髓间充质干细胞的细胞周期、集落形成能力和成骨、成脂肪分化能力。经过10 d的培养, 骨髓间充质干细胞在自制的无血清培养基中扩增了50倍, 在含10%胎牛血清的培养基中扩增了40倍。在无血清和有血清培养基中扩增后的细胞中G0/G1期比例分别为(80.31%±0.6%)和(75.24%±4.0%), 两者无显著差异(P>0.05)。无血清培养扩增后的骨髓间充质干细胞集落形成率(12.7%±4.0%)低于有血清培养组(28.7%±4.2%), 两者比较差异显著(P<0.01)。经过无血清培养扩增的骨髓间充质干细胞在成骨、成脂肪诱导分化培养基中能够分化成成骨和脂肪细胞。自制的化学成分明确的无血清培养基能够在体外培养扩增骨髓间充质干细胞, 并且维持其干细胞特性, 可以用于细胞治疗以及生物医学研究。     

微藻类抽提物代替生长培养基里的血清

生长培养基内一般含一种微藻类抽提物,诸如小球藻属(Chlorella)、栅列藻属(Scenedesmus)或螺旋藻属(Spirulina)之类的单细胞藻类的抽提物,因它们代替动物血清,可以使人体细胞培养物以一种有效的和稳定的方式延续世代。除去上列优点外,还不发生突变,省去了使用血清时的经费。     

中华蜜蜂幼虫原代细胞培养及中华蜜蜂囊状幼虫病毒在培养的细胞中的复制

【目的】建立一种适用于蜜蜂源的细胞培养方法,为蜜蜂源细胞培养和蜂病毒的研究奠定基础。【方法】比较在Grace和WH2两种昆虫细胞培养基中培养的中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫原代细胞状况,筛选出适用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的最佳培养基,并通过细胞活力比较,确定用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的适宜胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)浓度。在此基础上,用该原代细胞接种中华蜜蜂囊状幼虫病毒（Chinese sacbrood bee disease, CSBV）,并通过实时定量RT-PCR方法对病毒复制情况进行检测。【结果】相对于WH2培养基,在Grace培养基中生长的细胞大而圆,透明,边缘整齐,无颗粒物,活力明显高于WH2培养,且含15% FBS的Grace培养基更适合于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养。CSBV接种在该原代细胞,能够复制增殖,同时伴随宿主细胞快速分裂。【结论】中华蜜蜂幼虫原代细胞培养基在含15%FBS的Grace中能够良好生长,并且CSBV可以在该原代细胞中进行复制。     

杆状病毒表达EV71病毒样颗粒的装配、制备纯化与鉴定

将EV71P1和3CD基因片段克隆入同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bac-mid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD)。用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定和分析。电镜结果显示P1经3CD切割装配成了大小约为27nm的类球形颗粒(即EV71VLPs)。进一步分析影响杆状病毒表达系统的因素以对表达条件进行优化,结果显示MOI值和时间均可影响目的蛋白的表达,其中时间是主要因素。选择优化后条件利用无血清培养基对贴壁Sf9细胞在多层细胞培养器中进行VLPs的大量表达,密度梯度离心法纯化,SDS-PAGE结果可见三条大小约为39kD、34kD和26kD的VP1、VP0和VP3特异性条带。纯化后EV71VLPs颗粒结构完好,为下一步EV71蛋白结构的基础研究和基因工程疫苗的研究奠定了基础。     

L-Glu促进纯化培养的海马和皮质星形胶质细胞增殖的研究

目的研究L-Glu对纯化培养的皮质和海马星形胶质细胞促增殖作用的机制.方法将纯化培养的星形胶质细胞分为7组:①无血清培养基组,②含L-Glu(1mmol/L)的无血清培养基组,③含MCCG(100μmol/L)的无血清培养基组,④含MPEP(100μmol/L)的无血清培养基组,⑤含L-Glu MCCG(分别为1mmol/L,100μmol/L)的无血清培养基组,⑥含L-Glu MPEP(分别为1mmol/L,100μmol/L)的无血清培养基组,⑦含L-Glu MCCG MPEP(分别为1mmol/L,100μmol/L及100μmol/L)的无血清培养基组.流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 L-Glu促进纯化培养的星形胶质细胞的增殖,单独加入mGluRs的竞争性拮抗剂MCCG或MPEP则L-Glu的促增殖作用减弱,同时加入两种拮抗剂则L-Glu的促增殖作用消失.结论 L-Glu通过作用于mGluR3和mGluR5促进星形胶质细胞的增殖,两者可能在星形胶质细胞增殖方面具有协同作用.     

淋巴因子和干扰素

862244千扰素的生产仁专,英〕/Nobuha-ra,M.…了UK Patent Appl.GB 2146645.Pud.24.04.85.Appl.JP 55八72733,filed 17.09.83〔译自CBA,1985,(7),2324] 通过哺乳类细胞培养于含维生素C或其一种衍生物(1~500mg/1)或一种钒化合物(0.1一loomg/I)的培养基,生产干扰素。(戴顺志)862245免疫干扰素及其mRNA的生产〔专,英〕/Braude,I.A.…了European PatentAppl.EP 0139878.Pub.08.05。85.Appl。US 255136,filed 17.Q4.81仁译自CBA,1985,(7),2329〕 干扰素由培养白细胞于含诱导物或调节一105一物(紫花欧瑞素,或12,13,佛波醇丁酸盐)的…