植物基因克隆的策略和方法

本文介绍了功能克隆,定位克隆,表型克隆等９种克隆植物基因的方法,着重分析了每项克隆方法的工作原理,应用范围和进展     

基因克隆的方法进展

基因克隆一般分为定位克隆和表型克隆。表型克隆进展较快,主要有消减杂交、代表性差异分析法、mRNA差异显示、DNA转染法及抑制消减杂交法。抑制消减杂交法是1996年报道的一种表型克隆的新方法,是目前寻找差异表达基因的较有效方法,较过去的方法有许多先进之外。本文对此方法的原理及应用作一详细介绍,并与其他方法作简单比较。     

植物抗病基因克隆与功能研究进展

植物抗病基因（R基因）是分子植物病理学和植物基因工程研究的热点之一,R基因的克隆及其在抗病反应中的功能研究为揭示植物抗病机制和有效－控制植物病害奠定了基础,本文介绍了R基因的成功克隆方法和克隆新策略,对R基因编码产物的功能进行了分类分析,并对通过遗传工程途径发展R基因介导的抗病植物新品种进行了展望。     

定位克隆分离植物基因的研究进展

定位克隆是分离基因的有效方法。本文对定位克隆的原理和方法进行了简要介绍,概括了定位克隆的分离植物基因上的研究进展,分析了其局限性和解决方法,并对定位克隆的应用前景做出展望。     

植物抗病基因克隆的进展

抗病基因是抗病分子生物学和抗病育种的基因,本文介绍了近几年植物抗病基因克隆的进展,抗病基因克隆的新策略以及抗病基因结构特点与抗病机制的研究进展,讨论了抗病基因克隆的应用前景。     

植物耐盐相关基因：SOS基因家族研究进展

土壤盐渍化是影响农业生产和生态环境的一个非常重要的非生物胁迫因素,也是现代生物科学迫切需要解决的问题。利用拟南芥研究植物耐盐相关基因成为该领域的研究热点。几年来,该领域研究成果斐然。本文就SOS基因家族的三个耐盐基因SOS1、SOS2和SOS3的克隆、功能及相互关系作一概要的评述。 Abstract:The soil salination is a significant abiotic stress for agricultural production and ecological environment. The research on salt tolerance represents an important part for basic plant biology. Genetic analysis of salt tolerance genes in Arabidopsis has become a central issue in this research areas. In recent years, efforts from some laboratories in the world have led to some significant progresses in this field. In this paper, we will review the progress in salt tolerance genes SOS(salt overly sensitive):SOS1,SOS2 and SOS3.     

植物抗病基因克隆的研究进展

本从抗病基因克隆技术,抗病基因的产物和结构,抗病基因介导的抗病信号传导以及抗病基因进化等方面入手,综述了近几年来植物抗病基因克隆的研究进展,并对转座子标签法和定位克隆法做了较为详细的阐述。     

三七植物GAPDH基因克隆及序列分析

采用改进的异硫氰酸胍法提取高质量三七总RNA,运用RT-PCR方法克隆了三七GAPDH基因的部分序列,长度为627 bp,编码209个氨基酸,为半定量RT-PCR以及Real-time RT-PCR等技术在三七植物研究中的应用提供了条件.氨基酸序列比对结果表明,该序列与拟南芥、烟草、人参的GAPDH氨基酸序列的同源性分别为91%、93%、95%;核苷酸序列的同源性分别为82%、84%、85%.     

可转化人工染色体与植物基因克隆

概要介绍了人工染色体的几种类型以及各种人工染色体克隆DNA片段的特点,着重说明了可转化人工染色体在植物基因克隆中应用的优越性,展示了其在植物基因克隆应用中的巨大潜力。     

人类全长功能基因克隆获重大进展

我国科学家参与的人类全长功能基因克隆研究获得重大进展:从4万多个基因中整合出2万多个功能基因,向进一步弄清其确切的功能和结构迈出了一大步,将加快某些疾病的诊断和治疗方法的研究,并对重组蛋白药物的研制有着重要推动作用。这项重大研究由人类基因国际协作研究组完成。科学家对这2万多个整合过的功能基因进行了全面的注释,包括基因组结构、剪接方式、功能结构域、亚细胞定位、代谢途径、基因编码蛋白质的立体结构、基因多态性以及比较基因组分析等。这项成果的重要意义在于:为理解生物学以及在医学、生物技术等方面的应用提供了大量有…     

植物基因识别及克隆策略研究进展

随着基因组数据的积累,同时识别多个基因、解读其功能,正在成为揭示环境信号调控植物组织分化及器官形成分子机制必不可少的途径。我们从基因组水平、转录水平和蛋白质水平,回顾总结了识别发育及代谢相关基因、解读其功能的一般策略,讨论并比较了各主要策略的优缺点,并提出方法选择的一般原则。     

定位克隆中寻找新基因的方法

在克隆人类遗传病致病基因的过程中,寻找染色体特定区段的转录序列成为主要的限速步骤.早期的努力集中在筛选cDNA文库,找寻进化上保守的DNA序列,以及Northern杂交.最近几年,在人类基因组计划的推动下,发展了数种有效的寻找基因的新方法.这些方法不但扩展了寻找新基因的染色体区段,而且能在不依赖基因表达的情况下进行筛选.文中综述新旧几种寻找基因的方法,并讨论它们各自的优点与局限.     

克隆新基因(cDNA)的几种常用方法

文章主要叙述了目前克隆新基因（ｃＤＮＡ）常用的几种方法--递减杂交,表达序列标记,ｍＲＮＡ差别显示,并对每种方法的原理,优缺点及应用情况作了简单介绍,以供有关研究者参考 。     

植物发育基因克隆技术的新进展

过去２０年,人们已经分离到了相当数量的与发育相关的基因。这主要借助于蛋白质产物的分离纯化,然后根据其氨基酸结构推算其相应的核苷酸序列,并据此合成寡核苷酸探针,最终从ｃＤＮＡ文库或基因组文库中筛选出目的基因。而未知其编码产物的发育基因的分离克隆则是非常困难的工作,以前广泛应用的主要方法有ＤＮＡ标签法（ＤＮＡｔａｇｇｉｎｇ）［１,２,３］,作图克隆法（ｍａｐ－ｂａｓｅｄｃｌｏｎｉｎｇ）［４］,差别筛选法（ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）［５］和扣除杂交法（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）［６,７,８］。这些方法虽然都取得了一定的成功,但由于各自的缺陷性,而限制了它们更加广泛的应用。近年来在ＰＣＲ技术的基础上,人们已经建立了若干种分离克隆植物发育基因的新方法。１９９２年,ＬｉａｎｇＰ和ＰａｒｄｅｅＡ［９］首次提出并运用了ｍＲＮＡ差别显示技术（ｍＲＮＡｄｉｆ－ｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲ,ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）来进行基因的分离。实践表明,ｍＲＮＡ差别显示技术在分离、鉴定差别表达的新基因方面与以前的各种技术相比有其独特的优越性,但同时它也存在着重复性较差等缺点。因此,最近研究工作者又在其基础上,发展了诸如代表性差式分析（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ,ＲＤＡ）［１０,１１］和抑制性扣除（或减去）杂交（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＳＳＨ）［１２］等一些更新的方法。下面就此作一简要概述。     

植物同源盒基因的克隆与功能研究

同源盒基因在植物、动物、菌物的广泛存在说明这种结构在真核生物进化的早期就已出现,并暗示其具有重要功能。本文对植物同源盒基因的克隆与功能研究进行了综述,包括同源盒基因编码蛋白的结构特点、类型,并以玉米Knl、水稻OSH1及拟南芥STM为例,介绍了同源盒基因功能研究的现状。现有证据表明,同源盒基因与植物的发育过程有关。     

植物抗病基因的克隆技术

植物抗病基因克隆技术的研究是目前国内外植物分子生物学学科的热点之一。该文主要对植物抗病基因克隆技术的研究进展进行综述,旨在更好地揭示抗病基因克隆技术的特点,为农作物改良、生态保护等方面提供一条有效可行的途径。     

新基因功能研究的策略与方法

开展新基因功能研究在当前生物医学研究中变得日益重要.基因功能的研究策略主要包括新基因的生物信息学及体内表达规律分析、功能获得与功能失活策略研究、基因编码产物相互作用蛋白的研究.同时,结合近年来国内外的一些新进展,对与各种策略相关的一些技术方法也进行了介绍.     

PCR克隆新基因策略研究进展

自从PCR被开发及其基本反应条件被优化以来,这项技术已被应用于分子生物学研究的各个方面。其中应用最多的是从给定的有机体中扩增和克隆新基因：那些从事新基因的结构和功能分析研究的工作者必须获得第一手资料,也就是新基因的序列。而且快速方便地克隆这些新基因序列在很大程度上依赖于那些由PCR技术演变而来的方法。本文综述概括了建立在PCR基础上的方法在新基因分离克隆中的各种应用.