限食条件下下丘脑神经肽基因表达量对中缅树鼩体质量调节的影响

为阐明中缅树鼩Tupaia belangeri下丘脑神经肽基因表达量在限食条件下的体质量调节作用,本研究测定了限食(正常摄食量的80%)条件下中缅树鼩的体质量、体脂含量、血清瘦素浓度以及神经肽Y(NPY)、刺鼠相关蛋白(AgRP)、阿片促黑色素原(POMC)和可卡因-安他非明转录调节肽(CART)表达量。结果表明:限食极显著降低中缅树鼩的体质量和体脂含量(P0.01)。对照组和限食组的血清瘦素浓度差异有统计学意义(P0.05),血清瘦素浓度与体脂含量呈正相关。下丘脑神经肽基因NPY、AgRP、POMC和CART表达量差异有高度统计学意义(P0.01)。以上结果表明限食可以降低中缅树鼩的体质量、体脂含量和血清瘦素浓度,调整下丘脑神经肽基因表达量。瘦素通过调节NPY/AgRP和POMC/CART表达量来调节中缅树鼩的体质量。     

卵巢内发现促性腺激素释放激素样蛋白质

近来许多报道表明,促性腺激素释放激素(GnRH)或GnRH样物质可直接影响卵巢功能,其中包括对离体颗粒细胞和黄体细胞功能的影响以及GnRH拮抗剂在体内加强FSH对卵巢内卵泡发育的作用。在未成年和成年大鼠离体颗粒细胞和黄体细胞均发现有 GnRH 受体。这提示,卵巢内可能合成 GnRH 或 GnRH样肽。美国学者 Aten 等用大鼠黄体化卵巢检测是否存在有 GnRH 或 GnRH 样肽。他们用50IU 孕马血清     

以反意义RNA为探针的原位杂交组织化学方法

原位杂交组织化学方法是在组织及细胞水平上研究基因表达及调控的重要方法之一。我们利用一个由体外转录产生的与小鼠阿黑促皮原(POMC)mRNA顺序互补的反意义RNA为探针,直接在大鼠垂体的组织切片上进行杂交反应。结果表明,杂交在反意义RNA探针及POMC mRNA之间进行,并形成稳定的杂交分子。放射自显影影像显示出垂体中POMC mRNA的分布及相对含量。     

补肾化痰方对去卵巢大鼠血清TRACP5b 和β-CTX 的影响

目的:观察补肾化痰方对去卵巢骨质疏松症大鼠血清脂联素抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tartarte-resistant acid phosphatase 5b,TRACP5b)和血清β-I型胶原C-末端肽(C-terminal telopeptides of type I collagen,β-CTX)水平的影响。方法:SD大鼠行双侧卵巢切除术;术后3月以中剂量和高剂量补肾化痰方灌胃给药;术后5月,双能X线骨密度测定仪检测大鼠股骨骨密度,ELISA法检测大鼠血清TRACP5b和β-CTX含量。结果:补肾化痰方中、高剂量组均能显著提高去卵巢骨质疏松症大鼠的骨密度,降低血清TRACP5b和β-CTX水平。结论:补肾化痰方对去卵巢大鼠骨质疏松症有较好的治疗作用。     

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡率及caspase-3表达的影响

目的:研究中药益坤宁(yikunning,YKN)对围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡率及凋亡相关基因caspase-3基因表达的影响,探讨益坤宁治疗围绝经期综合征的作用机理。方法:选用30只自然衰老的围绝经期雌性大鼠,随机分为中药益坤宁实验组、围绝经期对照组和利维爱(livial)对照组,另选10只青年雌性大鼠作为青年对照组。连续灌胃处理4周后,采用原位脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测大鼠卵巢细胞凋亡率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)检测大鼠卵巢中caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果:益坤宁组大鼠卵巢细胞凋亡率显著低于围绝经期对照组(P0.01);益坤宁组大鼠卵巢中caspase-3 mRNA和蛋白表达低于围绝经期对照组,高于青年对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:中药益坤宁通过降低围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡率,下调卵巢中凋亡相关基因caspase-3的表达,从而延缓卵巢衰老,这可能是其治疗围绝经期综合征的分子机制之一。     

羊骨胶原肽钙螯合物对去卵巢大鼠肾组织病变的改善作用

目的 探究羊骨胶原肽钙螯合物(collagen peptide chelated calcium,CPCC)对雌激素缺乏大鼠肾的保护作用及相关机制.方法 摘除大鼠双侧卵巢,CPCC高(CPCC-H)和低(CPCC-L)剂量组的灌胃剂量分别为5 g/(kg·d)和1 g/(kg·d),假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水.8...     

高山姬鼠下丘脑神经肽表达量的季节性变化

为阐明高山姬鼠(Apodemus chevrieri)下丘脑神经肽表达量在季节性变化条件下对其体重调节的作用,测定了不同季节高山姬鼠的体重、体脂含量、食物摄入量以及血清瘦素浓度和神经肽Y(NPY)、刺鼠相关蛋白(Ag RP)、阿片促黑色素原(POMC)和可卡因-安他非明转录调节肽(CART)表达量。采用食物平衡法测定高山姬鼠的食物摄入量,体脂含量用索氏抽提法进行测定,采用实时荧光PCR仪测定下丘脑神经肽表达量。采用单因素方差分析或协方差分析进行检验,相关性采用Pearson相关分析。高山姬鼠的体重和体脂均出现了季节性变化,冬季较低,夏季较高。食物摄入量季节性差异显著,冬季较高,夏季最低。血清瘦素含量也出现了季节性变化,与体脂变化趋势类似,瘦素含量与脂肪含量呈正相关关系。下丘脑神经肽NPY、Ag RP、POMC和CART表达量季节性差异显著。食物摄入量与NPY和Ag RP负相关,与POMC和CART正相关。以上结果表明,高山姬鼠在季节性变化过程中冬季降低体重、体脂,增加摄入量来维持生存。瘦素通过作用于下丘脑神经肽基因来调节高山姬鼠的体重平衡。     

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢bcl-2和bax表达的影响

目的:研究中药益坤宁(Yikunning,YKN)对围绝经期大鼠卵巢bcl-2和bax基因表达的影响,探讨益坤宁治疗围绝经期综合征的作用机制。方法:选用自然衰老的围绝经期雌性大鼠,随机分为3组(n=10):围绝经期对照组、利维爱(Livial)对照组和益坤宁组,另选10只青年雌性大鼠作为青年对照组。连续灌胃处理4周后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠卵巢中凋亡相关基因bcl-2和baxmRNA表达,采用蛋白印迹(Westernblot)检测大鼠卵巢中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:益坤宁组大鼠卵巢中Bcl-2、BaxmRNA及其蛋白表达高于围绝经期对照组,差异有统计学意义(P0.01);益坤宁组大鼠卵巢中Bcl-2/BaxmRNA比值和蛋白比值高于围绝经期对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:中药益坤宁通过上调围绝经期大鼠卵巢中凋亡相关基因bcl-2和bax的表达,上调Bcl-2/BaxmRNA比值和蛋白比值,从而延缓卵巢衰老,这可能是其治疗围绝经期综合征的分子机制之一。     

LH-RH九肽类似物抑制蜕膜形成机理的研究 Ⅱ.对假孕大白鼠的实验

前文(刘以训,李树民1979)指出,在大鼠妊娠3—5天,每日注射高剂量LH-RH九肽类似物,可能通过血中雌激素水平上升而抑制胚泡着床和蜕膜分化;雌激素本身也有同样的抑制作用。最近有文献(Corbin等1975;Humphrey等1977;Rippel等1975)指出,LH-RH有可能直接作用于卵巢和子宫组织。为了澄清这一问题,并进一步阐明LH-RH的作用机理,我们在假孕和假孕去卵巢大鼠中进行了实验,尽可能排除通过卵巢内源激素的干扰,试图进一步探讨LH-RH类似物是否不经垂体卵巢轴而直接对于宫有抑制作用的可能性。     

牛POMC基因多态性及其与南阳牛生长性状的相关分析

为研究阿片黑皮质素前体(POMC)在动物采食和能量平衡调控中发挥重要作用, 文章采用PCR-SSCP结合DNA测序方法, 对秦川牛、南阳牛、郏县红牛、晋南牛、鲁西牛、安格斯牛和荷斯坦奶牛共计480头个体POMC基因的多态性进行研究, 并分析了多态位点与南阳牛生长性状的相关性。结果表明, 牛POMC基因3个位点中, 在3′侧翼区P3位点新发现3个连锁存在的SNP(811845 C>T、811821 T>C和811797 A>G, 与NW_928357对照)。POMC基因3′侧翼区多态位点与南阳牛6月龄体重和0~6月龄平均日增重显著相关, BB型个体显著大于AA型(P<0.05)。     

补肾化痰方对去卵巢大鼠血清TRACP5b和β-CTX的影响

目的：观察补肾化痰方对去卵巢骨质疏松症大鼠血清脂联素抗酒石酸酸性磷酸酶5b（tartarte-resistant acid phosphatase 5b,TRACP5b）和血清β-I型胶原C-末端肽（C-terminal telopeptides of type I collagen,β-CTX）水平的影响。方法：SD大鼠行双侧卵巢切除术;术后3月以中剂量和高剂量补肾化痰方灌胃给药;术后5月,双能X线骨密度测定仪检测大鼠股骨骨密度,ELISA法检测大鼠血清TRACP5b和β-CTX含量。结果：补肾化痰方中、高剂量组均能显著提高去卵巢骨质疏松症大鼠的骨密度,降低血清TRACP5b和β-CTX水平。结论：补肾化痰方对去卵巢大鼠骨质疏松症有较好的治疗作用。     

羊骨胶原肽对青春期大鼠催乳素和促黄体生成素分泌脉冲的影响

目的研究羊骨胶原肽(sheep bone collagen peptide,SBCP)对类固醇诱导的去卵巢大鼠催乳素(pro-lactin,PRL)和促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)分泌脉冲的影响。方法 6周龄子宫颈未开口的青春期SD大鼠实施双侧卵巢摘除手术,康复1周或3周后以类固醇替代方法诱导PRL和LH脉冲,处理组同时按1000 mg/(kg.d)的剂量以SBCP灌胃,通过颈导管采集血样,利用放射免疫技术测定各组大鼠外周血中的LH和PRL浓度。结果对于术后康复1周的大鼠,SBCP对LH脉冲振幅起到增强作用,而对PRL脉冲没有影响;对于术后康复3周的大鼠,SBCP对LH和PRL脉冲振幅均表现为降低作用,但卵巢摘除后立即给予SBCP可减弱这种降低作用。结论雌激素和孕激素替代注射的同时,补充羊骨胶原肽,不仅仍可诱导LH和PRL脉冲的产生,还可预防由于卵巢摘除带来的骨代谢紊乱,免疫力低下等不良影响,因而是对现有类固醇替代方法的改良。     

下丘脑弓状核PYY对大鼠摄食、胃运动和能量代谢的影响及机制

目的:探究YY肽(PYY)对雄性Wistar大鼠的摄食、胃运动和能量代谢的影响及潜在机制。方法:采用免疫组织化学实验方法观察大鼠下丘脑弓状核(ARC)中Y2受体的表达;通过ARC微量注射PYY,观察其对下丘脑中编码摄食相关代谢激素的m RNA表达以及ARC中PYY反应性神经元的放电频率、食物摄入量及水摄入量、氧气消耗(VO_2)、CO_2产生(VCO_2)及能量代谢的影响。结果:免疫组化结果显示大鼠ARC内存在Y2受体;大鼠ARC注射PYY能够兴奋PYY反应性神经元,上调可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及促肾上腺皮质释放激素(CRH)等抑食肽m RNA的表达,下调神经肽Y(NPY)及下丘脑泌素(HCRT)等促食肽m RNA的表达;且抑制大鼠食物摄入量,并参与调控大鼠呼吸、能量代谢及胃运动的改变。结论:ARC微量注射PYY可减少食物摄入并调节全身能量平衡,PYY可能是一种新型代谢肽。     

多囊卵巢综合征模型鼠颗粒细胞凋亡及TRAIL蛋白的表达

目的通过观察卵巢颗粒细胞凋亡及TRAIL(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)蛋白的表达情况,探讨颗粒细胞凋亡与PCOS发病的相关性及凋亡调控蛋白TRAIL在PCOS颗粒细胞凋亡中的作用。方法采用硫酸普拉睾酮钠诱导大鼠PCOS模型,3’-末端原位标记法(TUNEL)检测大鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况,免疫组化染色及RT-PCR分析检测TRAIL蛋白及TRAIL mRNA在颗粒细胞的表达。结果PCOS组大鼠卵巢窦状卵泡颗粒细胞凋亡发生率及TRAIL蛋白的表达较对照组明显增强(P<0.01,P<0.05),窦前卵泡颗粒细胞凋亡发生率及TRAIL蛋白的表达两组无显著性差异(P>0.05),两组卵巢始基卵泡颗粒细胞未发现凋亡征象及TRAIL蛋白表达。PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞TRAIL mRNA的表达较对照组明显增强(P<0.01)。结论PCOS大鼠卵巢窦状卵泡颗粒细胞凋亡明显增强,TRAIL在PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控中发挥了作用。     

Wistar大鼠CD9的cDNA克隆、原核表达及生殖腺中的检测

为了用Wistar大鼠研究CD9对精卵融合的影响和与其它精卵融合相关蛋白的作用,克隆了Wistar大鼠的CD9cDNA.测序结果显示,Wistar大鼠的CD9 cDNA编码区与GenBank中发布的SD( Sprague-Dawley)大鼠相同,但在3′非翻译区多一个T.用Western blotting方法检测Wistar大鼠睾丸和卵巢总蛋白发现睾丸和卵巢里均表达内源性CD9蛋白,分子量相同.此外,在大肠杆菌中表达了GST-CD9融合蛋白,并用GST标签纯化CD9蛋白,为体外研究CD9与其它精卵融合相关蛋白的作用提供参考.     

跑台运动和饮食控制对去卵巢肥胖大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察跑台运动和饮食控制对去卵巢肥胖大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、磷酸化-GSK-3β和GSK-3β蛋白表达的影响。方法:将48只3月龄雌性未孕SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组、去卵巢组、去卵巢运动组和去卵巢控食组。去卵巢运动组大鼠在去卵巢手术后的第3周开始进行为期8周的跑台运动训练,去卵巢控食组在去卵巢后的第三周开始进行为期8周的控食干预。干预结束后,腹主动脉取血处死各组大鼠,用电子天平秤量大鼠心肌重量,用Western blot方法检测心肌β-catenin、磷酸化-GSK-3β和GSK-3β蛋白表达。结果:与假手术组大鼠比较,去卵巢组大鼠体重、心肌重量显著增加,而心肌重量指数、β-catenin、磷酸化GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著降低(P0.05);与去卵巢组大鼠比较,去卵巢运动组大鼠在最后两周时体重显著降低(P0.05),心肌组织β-catenin、p-GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著升高,而去卵巢控食组大鼠体重、心肌重量、心肌重量指数和GSK-3β表达差异均无统计学意义(P0.05),但心肌组织β-catenin、p-GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著升高(P0.05)。结论:跑台运动和控食干均预均能激活去卵巢大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路。     

去卵巢对骨质疏松大鼠皮肤衰老的影响

目的用去卵巢大鼠构建的骨质疏松症模型是研究绝经后骨质疏松疾病的最适模型,然而大鼠卵巢去除后对皮肤的影响如何,这方面的研究甚少。本研究旨在观察去卵巢对大鼠皮肤衰老指标的影响。方法 3月龄健康SD雌性大鼠20只,随机分为假手术组(Sham组)和去卵巢组(OVX组),卵巢去除后3个月,测定血清雌二醇,以及皮肤组织中与衰老相关的生化指标如过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)、脂褐质(LF)含量,并观察皮肤组织病理学变化,用计算机图像分析系统定量分析。结果 OVX组大鼠血清雌二醇水平显著降低;组织病理学观察显示OVX组表皮、真皮厚度较Sham组显著变薄(P0.01),皮肤胶原纤维减少,排列疏松;与Sham组相比,OVX组大鼠皮肤CAT、GSH-Px和SOD活性显著降低(P0.01),MDA含量较Sham组明显增加(P0.01),皮肤组织中HYP含量明显减少,LF含量显著增多(P0.01)。结论 3月龄大鼠卵巢去除后3个月可导致皮肤衰老,可能是研究绝经后皮肤衰老的适宜模型。     

微囊化新生大鼠卵巢组织体外及异体移植

为探讨海藻酸钠-聚左赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊化新生大鼠卵巢组织用于治疗实验性卵巢功能丧失大鼠的可行性,应用高压静电法,用海藻酸钠-聚左赖氨酸-海藻酸钠(APA)生物膜包裹新生大鼠卵巢组织,体外培养微囊,用免疫化学分析法检测雌二醇(E2)、孕酮(P)分泌情况,透射电镜观察卵巢组织形态,并将微囊移植到去势大鼠(切除双侧卵巢的雌性大鼠)腹腔中,检测大鼠血清中雌、孕激素变化情况,同时用阴道涂片观察大鼠动情周期恢复情况,并在不同时间回收观察微囊。结果显示在相同条件下制得的微囊粒径均匀、表面光滑;体外培养条件下持续分泌E2、P;卵巢组织中颗粒细胞发育成为粒性黄体细胞;大鼠腹腔移植微囊后无异常,E2、P水平上升,动情周期未恢复;回收的微囊大部分形态完整。提示用高压静电法制备的APA微囊化新生大鼠卵巢组织能持续稳定释放E2、P,明显改善大鼠卵巢功能,在大鼠体内有良好的生物相容性。