从细胞色素b 基因全序列分析岩羊和山羊、绵羊的系统发生关系

本文测定了来自四川和青海岩羊的细胞色素b 基因全序列(1 140 bp) , 结合从GenBank 中检索获得的山羊、北山羊、绵羊和盘羊4 个近缘种细胞色素b 核苷酸同源区序列进行比较, 分析了碱基组成和变异情况以及核苷酸序列差异。分别采用简约法和距离矩阵法构建分子系统树, 得到了基本相同的拓扑结构, 从分子水平初步探讨了岩羊的系统起源问题。岩羊与山羊属的山羊、北山羊有着比绵羊属的绵羊、盘羊更近的亲缘关系。岩羊与山羊、北山羊的分歧时间大约在3～6 百万年, 而与盘羊、绵羊的分歧时间大约在6～8 百万年。     

黄河下游家绵羊与家山羊遗传关系的微卫星分析

为了探讨家养绵羊与山羊的属间遗传关系,我们利用13个定位于绵羊染色体上的微卫星基因座,分析了黄河下游4个地方绵羊品种、4个地方山羊品种和1个杂交绵羊类群的遗传结构及其系统发生关系.经Hardy-Weinberg平衡检验和中性测试,发现地方绵羊和山羊种群均处于不平衡状态(P＜0.01),61.53%的基因座属于中性位点,说明所研究种群属于非随机交配,可能受到选择、迁移等进化因素的影响.对有效等位基因数、多态信息含量、Shannon信息指数、观察杂合度和期望杂合度等遗传多样性参数进行比较,发现绵羊种群的遗传变异程度明显(P＜0.01或P＜0.05)高于山羊种群,但不同基因座上的差异效应不一致;结合F统计量和亲缘关系等参数,可推测绵羊和山羊虽然均存在不同程度的近交现象(He＞Ho,FIS＞0),但分别属于杂交和近交繁殖.通过群体遗传分化和系统发育拓扑结构分析,证明绵羊属由共同祖先分化而来的时间晚于山羊属,两属间的遗传距离为1.0708-1.5927,遗传分化时间约为19,807-28,955年;绵羊属内品种间的遗传分化程度(FST＜0.05)均低于山羊属内品种间的分化(FST＞0.15).本研究揭示了人工选择对同域家养绵羊与山羊交配系统的形成及群体遗传分化具有深刻的影响.     

山羊、绵羊MT-Ⅳ分子特性研究

金属硫蛋白(MTs)是一类低分子量、金属和半胱氨酸含量高的细胞质蛋白, 哺乳动物的MTs包括MT-I、MT-II、MT-Ⅲ和MT-IV 4种亚型, 其中MT-IV只在磷状复层扁平上皮细胞中表达, 相关研究报道较少。本研究根据GenBank已公布的动物MT-IV基因序列, 设计出扩增山羊和绵羊MT-IV基因的特异性PCR引物MT-IVSP1和MT-IVSP2, 利用RT-PCR的方法, 分别从山羊和绵羊的瘤胃组织mRNA中, 克隆出山羊和绵羊的MT-IV基因编码区序列(均为189 bp), 序列登录GenBank, 获得序列号EF470251和EF624067。通过序列分析, 表明山羊和绵羊两个物种MT-IV基因编码区全编码均为189 bp、编码62个氨基酸, 其中绵羊的MT-IV含有20个半胱氨酸, 而山羊第61位保守的半胱氨酸被色氨酸所代替。两个物种的MT-IV均不含芳香族氨基酸, 含有MTs特有的C-X-C、C-X-X-C、C-C-X-C-C结构, 无明显的跨膜结构域, 无信号肽, 是一种细胞质蛋白。二级结构分析表明两个物种的MT-IV二级结构大多数为无规则卷曲结构, 分别在第7~9和第49~51氨基酸残基性存在折叠结构, 不存在螺旋结构。三级结构预测结果表明两个物种MT-IV的三级结构由a和b两个结构域组成, 其中β结构域相同, a结构域山羊少一个半胱氨酸残基, 其结构与绵间存在明显差异, 这一差异可能对山羊MT-IV的生理功能产生一定影响, 有必要深入研究。     

山羊、绵羊MT-Ⅳ分子特性研究

金属硫蛋白(MTs)是一类低分子量、金属和半胱氨酸含量高的细胞质蛋白,哺乳动物的MTS包括MT-Ⅰ、MT-Ⅱ、MT-Ⅲ和MT-Ⅳ4种亚型,其中MT-Ⅳ只在磷状复层扁平上皮细胞中表达,相关研究报道较少.本研究根据GenBank已公布的动物MT-Ⅳ基因序列,设计出扩增山羊和绵羊MT-Ⅳ基因的特异性PCR引物MT-ⅣSP1和MT-ⅣSP2,利用RT-PCR的方法,分别从山羊和绵羊的瘤胃组织mRNA中,克隆出山羊和绵羊的MT-Ⅳ基因编码区序列(均为189bp),序列登录GenBank,获得序列号EF470251和EF624067.通过序列分析,表明山羊和绵羊两个物种MT-Ⅳ基因编码区全编码均为189 bp、编码62个氨基酸,其中绵羊的MT-Ⅳ含有20个半胱氨酸,而山羊第61位保守的半胱氨酸被色氨酸所代替.两个物种的MT-Ⅳ均不含芳香族氨基酸,含有MTs特有的C-X-C、C-X-X、C-C-C-X-C-C结构,无明显的跨膜结构域,无信号肽,是一种细胞质蛋白.二级结构分析表明两个物种的MT-Ⅳ二级结构大多数为无规则卷曲结构,分别在第7～9和第49～51氨基酸残基性存在折叠结构,不存在螺旋结构.三级结构预测结果表明两个物种MT-Ⅳ的三级结构由α和β两个结构域组成,其中β结构域相同,α结构域山羊少一个半胱氨酸残基,其结构与绵间存在明显差异,这一差异可能对山羊MT-Ⅳ的生理功能产生一定影响,有必要深入研究.     

大熊猫食圈养山羊绵羊初报

野生大熊猫除主食竹类外,还偶食节节草、玉米等植物,林麝等动物尸体以及竹鼠,未见食圈养山羊(Capra hircus)、绵羊(Ovis aries)的报道。现将峨边县的1只大熊猫多次进入村落羊圈中食山羊,绵羊的情况报告如下:1地点及环境捕食地在峨边县西溪河上游东岸的勒乌乡山峰村三组和甲挖村一组。海拔2000—2300米的坡面多为轮耕轮歇农地,仅沟谷、凹地残留有灌丛一方竹混交林;海拔2300米以上,主要为阔叶树疏林、针阔叶混交林和针叶林,山脊一带有冷箭竹分布,均无开花枯死现象。2大熊猫食山羊、绵羊行为详见下表。食羊时间集中在11月至4月较寒冷的6个月,…     

藏山羊与藏绵羊肺组织结构的对比研究

为了探讨藏山羊（Capra hircus）与藏绵羊（Ovis aries）在高原低氧环境中肺组织结构的差异,采用Gomori醛品红染色及H.E染色对藏山羊和藏绵羊肺组织进行对比研究。结果表明,藏山羊与藏绵羊肺被膜厚度无显著差异（P > 0.05）,但肺被膜中弹力纤维藏山羊显著多于藏绵羊（P < 0.05）。肺泡面积藏山羊与藏绵羊无显著差异（P > 0.05）,但肺泡隔宽度和肺泡隔中毛细血管的数量藏山羊显著高于藏绵羊（P < 0.05）。肺细支气管黏膜皱襞厚度藏山羊与藏绵羊无显著差异（P > 0.05）,但细支气管平滑肌厚度藏山羊显著高于藏绵羊,细支气管黏膜上皮1 mm2中杯状细胞数量藏山羊显著高于藏绵羊（P < 0.05）。外径小于100 μm的肺微动脉中,藏山羊血管平滑肌占外径百分比显著高于藏绵羊（P < 0.05）,而当外径大于100 μm时,两者间差异不显著（P > 0.05）。     

多重实时荧光PCR检测牛、山羊和绵羊源性成分

根据牛、山羊和绵羊线粒体细胞色素b基因序列, 设计特异性引物和以不同荧光素标记的Taqman探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选, 建立能同时鉴别牛、山羊和绵羊源性成分的多重实时荧光PCR方法。采用本文方法与国标GB/T 20190-2006方法分别对17种不同源性动物DNA和200份不同来源样品DNA进行牛羊源性成分检测, 数据显示两者检测结果符合率达100%, 特异性相当。与国标方法相比, 本试验方法不需电泳、酶切和测序, 即可在一个PCR反应中同时鉴别检测牛、山羊和绵羊3种源性成分, 检测效率提高近3倍; 灵敏度更高, 比国标方法灵敏10倍; 适用性更广, 除了饲料, 还适用于肉品、奶品、生皮和动物油脂等动物产品的牛羊源性成分检测。     

山羊β—乳球蛋白基因5‘侧区的克隆,测序和序列分析

采用ＰＣＲ方法,首次从中国山羊肝组织扩增出β－乳球蛋白基因的５＇侧区８６７ｂｐ片段,其中包括７７０ｂｐ的启动子和９７ｂｐ的部分第一外显子,再克隆测序。然后,我们用计算机分析比较了山羊βＬＧ基因的５＇侧区与绵羊的和乳牛的同源性,分别为９４．６％和８８％。还发现上述三该区域中的转录因子结合位点及其序列都很相似。而已知绵羊与乳牛的βＬＧ基因启动子可指导外源基因在转基因动物中组织选场划性地高效表达,这提     

山羊β-乳球蛋白基因5′侧区的克隆、测序和序列分析

采用ＰＣＲ方法,首次从中国山羊肝组织扩增出β乳球蛋白（βＬａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ,βＬＧ）基因的５′侧区８６７ｂｐ片段,其中包括７７０ｂｐ的启动子和９７ｂｐ的部分第一外显子,再克隆测序。然后,我们用计算机分析比较了山羊βＬＧ基因的５′侧区与绵羊的和乳牛的同源性,分别为９４６％和８８％。还发现上述三者该区域中的转录因子结合位点及其序列都很相似。而已知绵羊与乳牛的βＬＧ基因启动子可指导外源基因在转基因动物中组织特异性地高效表达,这提示了山羊βＬＧ基因启动子可能亦足以指导外源基因高效表达。本工作为以后用山羊βＬＧ基因启动子,指导外源基因在转基因动物乳腺中高效表达打下了一定的基础     

山羊β-乳球蛋白基因5’侧区的克隆、测序和序列分析

采用PCR方法,首次从中国山羊肝组织扩增出β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,βLG)基因的5’侧区867bp片段,其中包括770bp的启动子和97bp的部分第一外显子．再克隆测序。然后,我们用计算机分析比较了山羊β相似文献   

山羊卵泡刺激素α亚基cDNA的分子克隆与序列分析

从新屠宰的雌山羊脑垂体中提取总RNA ,反转录获得cDNA .以此cDNA为模板用PCR法扩增目的片段 ,获得长为 380bp的山羊卵泡刺激素α亚基cDNA片段 .将它克隆至pMD 18 T Verctor.随机挑选 3个阳性重组子进行测序 ,将测序结果与绵羊、牛、猪等多种哺乳动物该基因的核苷酸序列及相应氨基酸序列进行比较 .结果表明 ,山羊卵泡刺激素α亚基基因氨基酸序列与绵羊、水牛的同源性最高 ,达 96 % ,与牛的同源性达 95 % ,与人的同源性较低 ,为 74 % .山羊卵泡刺激素α亚基基因编码区的核苷酸与绵羊的同源性最高 ,达 95 % ,与水牛、牛的同源性达 94 % ,与马和大鼠的同源性较低 ,为 85 % .总体来看 ,在哺乳类动物中FSHα亚基基因同源性还是很高的 .     

人类蛋白:从奶牛、山羊和绵羊上的新收获

几百年来,学龄儿童均被告知,奶牛、山羊和绵羊这些动物能提供给我们奶、奶酪和皮毛。而现在则不同了,最近有人提出了通过育种培育能大规模生产复杂的人类蛋白的转基因动物这一新概念。事实上,许多公司从本世纪八十年代后期已开始了这方面的尝试。用猪当生物反应器制造全人血红素、和用小     

三个绵羊群体MC4R基因多态性及生物信息学分析

旨在探讨绵羊黑素皮质素受体-4(melanocortin-4 receptor,MC4R)的分子机理,采用PCR-SSCP方法对3个绵羊群体(甘肃肉用绵羊新品种群、小尾寒羊和湖羊)的MC4R基因外显子进行多态性检测和生物信息学分析。结果表明,3个绵羊群体均存在3种基因型AA型、AB型和BB型,优势基因型为BB,其中优势等位基因为B;测序结果表明,野生型BB型和突变型AB型相比,AB型个体在该基因编码区第511位点发生G→A突变,第495位发生C→T突变;AA型个体在该基因编码区第511位点发生G→A突变,出现AA的纯合,第495位发生C→T突变,出现CC纯合;3个绵羊群体中小尾寒羊的多态信息含量属于中度多态(0.25PIC0.50),甘肃肉用绵羊新品种群羊和湖羊属于低度多态(PIC0.25);χ2适合性检验表明除湖羊之外,其余2个绵羊品种均处于Hardy-Weinberg平衡状态。生物信息学分析发现MC4R氨基酸序列有明显的疏水性区域,有7个跨膜螺旋区及信号肽,其编码蛋白主要的二级结构元件是α螺旋和无规则卷曲;同源性比对发现绵羊MC4R基因与山羊、牛、野猪、人类及大猩猩的相似度分别为97%、94%、81%、83%及83%,说明MC4R是一个非常保守的蛋白,在绵羊的生长发育中起着重要作用。     

山羊卵泡刺激素β-亚基cDNA的分子克隆与序列分析

从新屠宰的母山羊脑垂体中提取总RNA,反转录获得cDNA,以皮cDNA为模板用PCR法扩增目的片段,获得长为390bp的山羊卵泡刺激素β－亚基cNDA片段,与预期的目的片段大小一致。将它克隆至pMD-18-T-Verctor中,随机挑选2个阳性重组子进行测序,并将测序结果与绵羊,牛等多种哺乳动物该基因的核苷酸序列及相应氨基酸序列进行比较。结果表明,山羊的卵泡刺激素β－亚基因与绵羊的该基因氨基酸同源性最高,达99．9％,只有1个氨基酸不同,与牛,猪,马,虎,人,大鼠的该基因氨基酸同源性分别为92.5%,91.7%,89.9%,89.1%,86.0%,83.7%。从核苷酸同源性来看,山羊的卵泡刺激素β－亚基因与绵羊该基因的同源性了高,达98％;与牛,猪,马,虎,人,大鼠的核苷酸同源性为95％,90％,90％,88％,86％,84％。结果表明,尽管β－亚基基因有种的特异性,但在哺乳动物中其同源性还是很高的。     

板角山羊mtDNA Cyt b基因变异特点及系统进化研究

测定了板角山羊品种13个个体的细胞色素b基因全序列(1140 bp),比较分析了群体中细胞色素b基因的碱基组成和序列间碱基的变异情况,结果显示:在该品种(群体)中细胞色素b基因序列中6个变异位点上观察到11次T-C间和2次A-G间的碱基转换,除了有2次T-C间碱基转换发生在密码子第2位点为非同义突变以外,其余的11次碱基转换发生在密码子第3位点,均为同义突变;有1次T-G间碱基颠换发生在密码子第2位点,为非同义突变;观察到5种单倍型,单倍型多样度为0.8077.并以绵羊为外群,与山羊属其他种的同源区序列构建系统发生树.结果显示, 在系统地位上板角山羊与胃石山羊有较近的亲缘关系.     

绵羊受精卵移植试验简报

1976年我盟家畜受精卵移植(以下简称卵移)试验,在各级党委的重视和支持下,顶住了“四人帮”的破坏,贫下中农(牧)和技术人员积极努力,卵移试验应用于生产的扩大实验搞得生气勃勃。共给土种绵羊或低代杂种羊760只移入了单、双枚纯种三北羊、细毛羊的卵子,与1975年的移植数相比、增加了近10倍。尤其是鄂托克旗新召公社红旗大队卵移点,在大队党支部书记亲自参加和领导下,广大贫下中农(牧)和各族社员破除迷信,解放思想,在本大队开展了绵羊卵移应用     

藏绵羊GHR基因5′侧翼区序列特征分析

对欧拉型藏绵羊生长激素受体(GHR)基因5′侧翼区(包括P1启动子和外显子1A)进行了T-A克隆和序列测定(GenBank accession No. EF116490), 在分析其序列结构特征的基础上与GenBank中摩弗伦羊、山羊、普通牛、欧洲野牛进行了比较基因组学和系统进化研究, 结果表明: (1)欧拉型藏绵羊GHR基因启动子P1区存在C/EBP、C/EBPb、SP1、Cap、USF、HFH-2、HNF-3b、Oct-1等多个潜在的转录因子结合位点, 可能与GHR基因的转录调控和起始以及特异表达有关。在该非编码序列中, 重复序列所占比率为2.55%, 不存在SINEs、LINEs、LTR类反转录元件和DNA转座子元件, 而发现存在一(TG)11微卫星位点; (2)在启动子P1区, 藏绵羊与摩弗伦羊、山羊、普通牛、欧洲野牛各物种间同源性大小分别为99.7%、94.2%、85.9%、86.5%; 而在外显子1A区段, 藏绵羊与摩弗伦羊、山羊、普通牛、欧洲野牛各物种间同源性大小分别为 99.0%、97.0%、92.7%、94.6%。物种间欧拉型藏绵羊与摩弗伦羊同源性最高, 而欧拉型藏绵羊与普通牛最低。(3)邻接法(即NJ法)构建的分子系统进化树聚类结果表明, 欧拉型藏绵羊与摩弗伦羊先聚为一类, 再与山羊聚类形成一个大分支, 而普通牛和欧洲野牛先聚类形成另一大分支, 两大分支最后再聚为一起, 其聚类结果与线粒体DNA和动物学分类的研究结果一致。     

黑光灯防治棉铃虫试验初报

为了提高综合防治水平,我们对黑光灯群的诱虫效果、设置方法等进行了初步试验。 一、诱集成虫压低卵量 在寺岗公社的5个大队,设置118个黑光灯组成的黑光灯群,在2代棉铃虫产卵盛期(6月20日—28日),我们对灯区及本公社4个无灯区大队和与灯区相邻的     

山羊MSH4和MSH5基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达

以低繁藏山羊和高繁金堂黑山羊为研究对象,分别提取处于发情期的5只藏山羊和5只金堂黑山羊的卵巢、子宫、输卵管、垂体的总RNA,并通过RT-PCR技术对MSH4、MSH5基因c DNA进行克隆、序列分析,以Real-time PCR技术对其进行组织表达研究。结果表明,藏山羊和金堂黑山羊MSH4基因编码区均长2 499 bp,编码832个氨基酸,两品种基因编码区有5处碱基不同,并导致3处氨基酸的差异;MSH5基因编码区均长2 496 bp,编码831个氨基酸,两品种基因编码区有9处碱基不同,并导致5处氨基酸的差异。藏山羊MSH4基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、山羊、绵羊、牛、马、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.8%、99.8%、99.4%、98.1%、94.4%、85.1%、84.7%和93.5%;藏山羊MSH5基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、山羊、牛、家犬、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.6%、99.6%、97.3%、88.0%、85.8%、85.3%和90.2%。MSH4和MSH5基因m RNA在两个山羊品种的卵巢、子宫、输卵管、垂体中均有表达,但两品种间无显著性差异(P0.05)。说明MSH4和MSH5基因在动物进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性有待进一步研究。     

绵羊cdh1基因cDNA全编码区的克隆及序列分析

在哺乳动物成体睾丸中,精子发生的过程开始于未分化的A型精原细胞的干细胞群.目前已有报道在小鼠未分化的A型精原细胞中特异性表达钙依赖性跨膜黏着蛋白基因(cdh1),但绵羊的cdh1基因全序列未见报道.为了更好地研究绵羊精原干细胞的特性,根据已报道的其他物种的cdh1基因的cDNA保守区设计引物,从成年蒙古绵羊睾丸中提取总RNA,采用RT-PCR和分子克隆方法克隆了蒙古绵羊cdh1基因cDNA全编码区.DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为96.5％,说明该基因在进化上是高度保守的.这为制备绵羊CDHI的抗体奠定了基础,并且为绵羊精原干细胞的分子水平鉴定提供了研究备件.