小鼠胚胎干细胞(ES-8501细胞)建系过程的核型及特性分析

小鼠胚胎性癌(EC)细胞系的细胞核型大多数异常,对用于分析EC细胞与胚胎细胞之间的关系和进行嵌合体研究等都是不利的。人们都期望能有正常核型的胚胎细胞系的建立。近年来Evans和Kaufman以及Martin等人先后用不同方法直接从小鼠的内细胞团(ICM)细胞建立了多潜能的胚胎干细胞(erabryonicstem eells,简称ES细胞),也有人称之为EK     

体外小鼠胚胎性癌细胞BEC-B7建株和特性

恶性畸胎癌干细胞又叫做胚胎性癌细胞(简称EC细胞),是一种来自生殖细胞或早期胚胎细胞的恶性癌细胞,不仅具有类似于早期胚胎细胞分化多能性,而且能在一定条件下失去恶性生长性质,分化为各个胚层的正常组织。EC细胞是开展哺乳类胚胎早期发育遗传以及癌变和癌细胞分化研究较好的实验材料。EC细胞在体外可以大量培养生长,较之正常胚胎细胞更容易获取。我们在建立体内腹     

RA和DMSO对鼠胚胎癌细胞的诱导分化

胚胎癌(EC)细胞是来自畸胎癌的多能干细胞。鼠胚胎癌细胞系P_(19)可以被维生素A酸(RA)或DMSO诱导分化。单个EC细胞能增殖形成肉眼可见的集落,其集落形成率高达40-70％;而在同样条件下,分化细胞的集落形成率却非常低(一般小于10~(-6))。已经证实在分化过程的早期就有集落形成能力的丧失;同时,分化培养中的平皿效率已被用来测定未     

B7-2胚胎性癌细胞诱导分化过程中的表型转变

胚胎性癌细胞(简称EC细胞)作为一类肿瘤(畸胎瘤)的干细胞近年受到广泛的重视,从胚胎学、肿瘤学和分子生物学等许多学科领域都应用它作为实验材料,离体诱导分化研究是其中的一个方面。B 7-2 EC细胞是我们从129品系小鼠的自发睾丸畸胎瘤中分离克隆得到的一株多能EC细胞,它在同种同基因小鼠     

体内微环境对B7-2EC克隆细胞株分化的影响

在发育生物学领域中,微环境对早期胚胎纽胞的分化,对造血系统干细胞的分化都能产生影响,这已是人所共知的事实。小鼠胚胎性癌细胞(EC细胞)是一种研究细胞恶变和细胞分化很好的材料,它可以在某些品系小鼠中自发地产生,也可由小鼠早期胚胎细胞或原始生殖嵴细胞经异位移植而获得,但移植的位置不同,生瘤率也不同。EC细胞一般分为无能和多能性两种:无能EC细胞如F9在体内接种后不能分化为各种体细胞,保持着癌细胞恶性生长的特点,而多能EC细胞接种到     

小鼠胚胎性癌细胞研究的一些近况

胚胎性癌细胞(Embryonal Carcinoma,简称EC细胞)是畸胎癌的恶性干细胞,它既有恶性生长性质,又有类似于早期正常胚胎细胞的多能性,能分化为神经、皮肤、肌肉、软骨和腺管等组织。EC细胞注射到同系小鼠腹腔后,可在腹水中分化并聚积成结构类似于早期胚胎的细胞群,称为拟胚体。     

小鼠胚胎癌细胞来源的分化细胞合成IGF-Ⅱ

胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)是一种促有丝分裂多肽,对哺乳类胚胎生长和发育起着重要作用。然而,在早期胚胎发育阶段,有关这种生长因子的产生、功能及其对胚胎细胞生长、分化的调节作用所知甚少。本文用纯化大鼠8.5 KDa增殖刺激活性因子(multiplicationstimulating activity,MSA)作免疫原,制备了多克隆抗体。以同位素在体外代谢标记PC 13小鼠多能胚胎癌(EC)细胞及其经维生素A酸(RA)诱导分化的内胚层样END细胞,在分化的PC 13 END细胞培液中检测到与IGF-Ⅱ抗体起免疫沉淀的物质,而未分化的PC 13 EC细胞并不分泌这种物质,证明了从EC细胞来源的分化细胞能合成和分泌IGF-Ⅱ蛋白。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,这种免疫沉淀物质为分子量35 KDa和14-15 KDa的三种形式蛋白。35 KDa分子可能是一种IGF_Ⅱ前体蛋白或具IGF-Ⅱ专一性的载体蛋白。用免疫酶染色方法,在另一株多能B 7-2 EC克隆细胞中,同样证明经环六亚甲基双乙酰胺(HMBA)诱导分化的内胚层样细胞的胞质中染有与IGF-Ⅱ抗体起反应的物质;而且在HMBA诱导处理24小时即已出现这种染色反应。随着药物处理时间延长,除了细胞形态进一步呈梭形和细胞质突起更显著外,免疫反应强度未见有明显变化,表明IGF-Ⅱ的合成在EC细胞诱导分化的较早阶段就开始。根据这些结果,推测早期胚胎发育中内胚层细胞可能产生和分泌IGF-Ⅱ蛋白。     

维生素A酸诱导小鼠F9胚胎性癌细胞分化的超微结构观察

恶性肿瘤细胞具有迅速增殖和分化阻滞的特点。胚胎性癌细胞(简称EC细胞)是恶性畸胎瘤的干细胞,具有恶性生长和未分化早期胚胎细胞的性质。就发育潜能而言,F9 EC细胞曾被认为是无能的;但近年来不少证据表明,这类细胞可被维生素A酸(简称RA)诱导而分化为内胚层样细胞和其他细胞。用生化和免疫学     

细胞原癌基因在小鼠胚胎癌细胞中的表达

近些年来,细胞原癌基因(cellular onco-gene)的发现和大量研究,使人们相信这类基因的产物在早期胚胎发育过程中有着十分重要的功能,因而它们在转录水平上的变化也特别受到注意。胚胎癌细胞(embryonal carci-noma cell,简称EC细胞)是一类与早期胚胎细胞相类似的恶性细胞,具有多种分化潜能,     

抗8氮鸟嘌呤的F9胚胎癌细胞突变株的建株

近年来,小鼠胚胎癌细胞(EC 细胞)已成为研究胚胎分化、肿瘤发生的一个很好的实验模型。利用体外培养的 EC 细胞,通过诱变剂处理和筛选,可以获得具有特定基因突变标记的 EC 细胞株。例如利用碱基类似物8氮鸟嘌呤(8AG)或5-溴脱氧尿嘧啶核苷可以分别筛选到次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)缺陷或胸腺嘧啶核苷激酶(TK)缺陷的突变株。前者同时又是人类列许尼汉(Lesch-nyhan)综合症的病因。因此建立这种类型的突变株,不仪可以利用酶的缺陷突变作为细胞融合的选择     

一个小鼠未分化胚胎癌细胞特异cDNA的分子克隆

用胚胎癌细胞株(EC)PCC_3,的poly(A)~+RNA及质粒pBR 322在大肠杆菌中建立了一个eDNA文库。用另一株EC细胞F(?)及由EC细胞衍生的分化细胞株滋养层母细胞癌TDM_1的~(32)PcDNA作探针,对PCC_3 eDNA文库作了差别筛选。自3,000个cDNA克隆中筛出25个克隆。其中1个克隆MS,含有长250bp的cDNA。用MS,cDNA作探针,在F(?)细胞中能检出1个占poly(A)~+RNA约0.2—0.4％、长6kb的RNA(MS_3RNA)。用点印迹杂交及Northern印迹杂交分析法,证明MS_3RNA还存在于供试的另2株未分化EC细胞株PCC_3、PSA_1-NG_2中。在供试的全部分化细胞株,即TDM_1、PSA_1-2、3/A/1-D3、C_(17)-S_1-T(284)中,均查不到MS_3RNA。用Southern印迹杂交分析法,证明MS_3基因在小鼠基因组中存在着大量的拷贝,对小鼠胚胎基因文库的筛选表明,MS_3基因有一个中等重复的基因家族,这个家族在小鼠基因组中约有3,000个成员。     

两栖类胚胎少量细胞的短期离体培养

以往研究两栖类的胚胎诱导常用的方法是外植、浸泡法,都利用胚胎的预定外胚层进行实验,这种外植块细胞众多,在分化中所表现的,除诱导物质的作用外,还有细胞与细胞或组织与组织间的作用。为了避免细胞与细胞之     

体外小鼠胚胎性癌细胞BEC—B_7建系和特性

BEC—B_7胚胎性癌细胞 (Embryonal Carcinoma cells,简称EC细胞)是来自129/SV纯系小鼠自发睾丸畸胎癌,经同系小鼠腹腔传至第七代的血性腹水畸胎癌细胞,建株于1981年9月。培养方法是在无菌条件下取出含癌细胞的血性腹水,经自然沉降取得的EC细     

Borealin及CPC相关基因在胚胎干细胞畸变过程中的表达差异

目的：研究Borealin及CPC（Chromosomal Passenger Complex）相关基因表达变化与胚胎干细胞瘤变过程的关系,从而了解Borealin在于细胞中的特殊功能。方法：培养不同状态的胚胎干细胞及畸胎癌细胞,并提取总RNA,进行芯片和荧光定量PCR分析。结果：ES（embryonic stem cell）细胞分化过程中Borealin基因表达下调;在Es细胞染色体发生变异的过程中部分染色体复合物相关基因的表达发生了明显的变化,EC（embryonic cancer cell）细胞中Borealin、Survivin,MCAK、AuroraB、op18等基因的表达明显高于正常胚胎干细胞。结论：Borealin及CPC异常的表达可能是胚胎干细胞瘤变的一个重要标记。     

小鼠胚胎癌及其分化细胞的细胞光度法分析

HMBAA对小鼠胚胎癌细胞的生长和DNA合成均有抑制作用。经过诱导分化后,癌细胞DNA含量平均值增加,这部分由于含多异倍体值的细胞数增多所致,同时含40条染色体的细胞数减少,而含60条以上染色体的细胞数增加,结果说明,胚胎癌的分化细胞虽然发生形态改变,并非就是正常细胞。     

小鼠内细胞团标志蛋白的性质、分离和纯化

我们用二相电泳方法在小鼠畸胎瘤系统中发现小鼠胚胎内细胞团标志蛋白双联体(分子量39,000,p14.4—4.5)也存在于未分化的胚胎癌细胞株(PSAI-NG2、F9、PCC3)中,但在已分化细胞株滋养层母细胞癌TDM1中用二相电泳方法不能检查到这蛋白。把EC细胞分为细胞质、细胞核、染色体三部分再进行检查,可以清楚地看到这蛋白主要存在于染色体部分。把染色体再分成0.35M NaCl可溶性,2M NaCl可溶性及2M NaCl不溶性三个组份时,则这蛋白出现在0.35M NaCl可溶性组分中,表明它是与染色体疏松结合的非组蛋白染色体蛋白。这蛋白是一种耐热性蛋白,在80℃受热10分钟不能使它变性。用制备型SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对经热处理的0.36M NaCl可溶性染色体蛋白进行分离,可得到电泳纯的小鼠内细胞团标志蛋白。由于这蛋白约占细胞总蛋白0.6%,与染色体疏松结合,又与早期胚胎细胞的多能性相关,提示它在维持多能细胞染色体构象方面有重要作用。     

三个MS3基因克隆的初步鉴定

我们已经克隆了一个小鼠未分化胚胎癌 (EC）细胞特异的cDNA )Rt序（MS, cDNA)o 用MS, cDNA作探针,证明编码MS3 cDNA的 基因在小鼠基因组中约有3,000个拷贝［w。由 于MS3 cDNA顺序较短,仅长250bp,就产生 了这样一个可能性：MS3 cDNA仅是一个中等 重复顺序,在绝大多数情况下,它分散在小鼠基 因组的不表达顺序中,虽然也存在于某些少数 基因中,但仅局限于3'端的非编码区。     

小鼠胚胎性干细胞及其在发育和遗传研究中的应用

直接用小鼠胚胎来研究哺乳动物的生长,发育和遗传问题显然是很困难的。从生化或分子水平分析在体胚胎发育过程中基因表达,更在往受到复杂微环境的干扰和材料的限制。因此本世纪60—70年代,人们一直在致力于寻找一个既具有类似胚胎细胞分化性质,又能源源不断取材的实验模型。胚胎性癌细胞(Embry-onal Carcinoma Cell,简称EC细胞)是畸胎瘤干细胞,既有恶性生长、又显示类似早期正     

植物体细胞胚胎发生及其相关应答基因的研究进展

体细胞胚胎发生途径不仅是植物大规模克隆繁殖的重要途径,也是研究从单细胞到整体植株发育全过程的理想试验体系。植物体细胞胚胎发生的研究已经取得了很大的进展,但是也依然存在许多问题。根据近年来的相关研究报道,简述植物体细胞胚胎发生及此过程中相关应答基因的研究概况,探讨植物体细胞胚胎发生的生理生化基础,并对今后应该加强研究的关键问题提出了自己的看法。     

胚胎干细胞的研究进展

胚胎干细胞是来源于早期胚胎内细胞团的、具有多向分化潜能的细胞,已经广泛用于生命科学的许多领域,它在医学方面的应用成为医学领域的研究热点.本文对胚胎干细胞在诱导分化、基础研究和临床应用上的研究进展进行了综述,对今后的研究方向进行了展望.