甲状腺素是一种前激素吗?

50年代前,四碘甲腺原氨酸(T_4)一直被认为是甲状腺所分泌的、唯一直接在细胞水平发挥生理作用的激素。1952年Gross和Pitt-Rivers首次发现:人类血清中存在三碘甲腺原氨酸(T_3)。此后的研究证明:T_3也是甲状腺分泌的一种激素,其浓度虽仅为T_4的1/40;但无论在动物或人类,T_3的生理作用均比T_4大3～5倍。给予无甲状腺病人T_4后,可转变为T_3;正常情况下至少约有1/3的T_4在外周转化为T_3。这些发现使人们对T_4是否具有生理作用产生疑问。既然T_4通过转化为T_3间接发挥作用,那么T_4本身是否还有生理作用?如果分泌的大部分T_4转为代谢更强的T_3,为何机体需要两种形式的甲状腺激素?T_4仅仅是T_3的前身吗?它是否有不同的独立功能?     

培养的人主动脉平滑肌细胞合成的蛋白聚糖的生化分析

人胎儿主动脉平滑肌细胞(SMC_8)体外培养的第4(T_4)及第10(T_(10))代细胞在含[~(35)S]-硫酸钠的培养液中培养以标记蛋白聚糖(PG)。培养液及细胞层的4mol/L盐酸胍提取液中的PG_8用DEAE-Sephacel离子交换及凝胶过滤柱层析纯化。两代(T_4及T_(10))培养液中均含有一种分子较大及大小类似的硫酸软骨素-PG(CS-PG,在Sepharose CL-4B柱的排阻部位洗脱),其相对含量在T_4为20.8％,T_(10)为12.9％,另外尚均含有一种分子较小及大小类似的硫酸皮肤素-硫酸软骨素-PG(DS-CS-PG,Kd=0.27-0.33,Sepharose CL-4B),其相对含量在T_4为72.7％,T_(10)为81.5％。两代细胞层中除有一种与培养液中大小类似的CS-PG外(其相对含量在T_4为21.7％,T_(10)为10.2％),尚均含有一种分子较小(小于培养液中者)的DS-CS-PG(Kd=0.53,Sepharose CL-4B),其相对含量在T_4为57.4％,T_(10)为75.0％。另外,两代培养液及细胞层中均含有硫酸乙酰肝素-PG(HS-PG),在T_4及T_(10)培养液中分别为6.5％及5.6％;而在细胞层中则分别为20.9％及14.8％。T_(10)的培养液及细胞层中DS-CS-PG的[~(35)S]参入量均高于T_4者;而CS-PG及HS-PG则相反。T_(10)除有PG合成变化外尚有其他衰老迹象(如脂质堆积等),故SMC_8的老化可能与动脉粥样硬化病变形成有关。     

血清甲状腺素放射免疫测定及其临床初步应用

甲状腺素(T_4)和三碘甲状腺原氨酸(T_3)的放射免疫测定所得结果,对于诊断甲状腺功能以及估价治疗过程中病情的动态变化是一个重要指标。在疾病导致甲状腺功能改变时,T_4和T_3在血清中含量变化基本相似。只是诊断甲亢。T_3比T_4更灵敏。但是在某些特殊情况下,两者含量变化并不平行。如T_3型甲亢者,血清中T_3含量增高,而T_4正常。反之,轻度原发性甲减者,T_4含量可有降低,而T_3含量有时却显得正常。因此在临床诊断中。T_3的测定不     

链霉菌G4溶菌酶的产生条件及特性

对链霉菌G4的产酶发酵条件和溶菌特性进行研究结果表明:蔗糖30 g/L、大豆蛋白胨12.5 g/L、牛肉膏2 g/L,对产酶最为有利;G4溶菌酶最适培养温度33 ℃,培养时间72 h,培养基初始pH 8.G4溶菌酶的最适作用温度和最适作用pH分别是55 ℃和6.5,多数金属离子会抑制G4溶菌酶的活性,其中Zn2+、Cu2+、Fe2+、 Pb2+几乎可以使其完全失活;对几种细菌、酵母菌的研究表明,G4溶菌酶对卵清溶菌酶不能作用的变形链球菌和金黄色葡萄球菌有很强的溶解活性.     

毕赤酵母发酵生产T4溶菌酶的中试研究

研究了T4溶菌酶的中试发酵放大生产。在200L发酵罐中毕赤酵母诱导表达T4溶菌酶蛋白,发酵液蛋白表达量达到1.69g/L,酶活达到192U/mg;制得冻干酶粉211.1g。经测定粗酶粉中T4溶菌酶的含量达到68.9%,酶活为182U/mg,总收率达到66%,成功建立了一条T4溶菌酶的中试发酵生产工艺线路。     

日本鳗鲡的C-型和G-型溶菌酶研究

研究以日本鳗鲡(Anguilla japonica Temminck et Schlegel)为研究对象, 根据其基因组数据库, 预测并扩增出2类, 共5个溶菌酶基因, 包括1个C-型溶菌酶和4个G-型溶菌酶, 分别命名为AJLysC、AJLysG1、AJLysG2、AJLysG3和AJLysG4。它们的cDNA全长分别为811、749、1352、1175和733 bp, 编码143、193、185、185和187个氨基酸。SignalP预测表明, AJLysC和AJLysG1的N-端分别包括15和19氨基酸的信号肽, 另外3种溶菌酶没有信号肽。基因组分析显示, AJLysC、AJLysG2、AJLysG3和AJLysG4的基因结构与其他鱼类的同类溶菌酶的基因结构相似, C-型溶菌酶具有4个外显子, G-型则具有5个。但是, AJLysG1的基因结构与其他鱼类G-型溶菌酶不同, 具有6个外显子, 与其他鱼类溶菌酶的蛋白序列比较, 发现AJLysG1缺失其他G-型溶菌酶存在的第2个酶活性位点氨基酸, 即天冬氨酸Asp。AJLysC与其他很多物种的C-型溶菌酶具有较高的同一性, 如与牙鲆的同一性为72.7%。G-型溶菌酶中AJLysG2、AJLysG3、AJLysG4彼此之间以及与其他物种G-型溶菌酶的同一性相对较高; 而AJLysG1与其他物种以及与其他3种G-型溶菌酶的同一性均不高, 且都在50%以下。组织表达分析显示, 所有5个溶菌酶基因在12种检测的组织中均有表达。C-型溶菌酶在胃及免疫相关组织的表达量较高; G-型溶菌酶在各组织/器官中的表达则差异较大, AJLysG1在皮肤和肌肉中的表达量最高, AJLysG2在免疫组织/器官如血液、头肾、体肾和鳃中表达量较高。经迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)刺激48h后, 这5个溶菌酶基因在组织/器官中的表达量均有上调, 其中在血液、肠道和头肾等的上调较为显著。此外, 研究尝试重组表达这些抗菌肽, 获得了AJLysG2、AJLysG3和AJLysG4基因在鲤上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprinid, EPC)细胞中的表达, 重组蛋白表现出对溶壁微球菌(Micrococcus lyso-deikticus)生长的明显抑制作用。文章较全面地研究了日本鳗鲡溶菌酶基因的组成和类型及其表达变化, 并重组表达了部分基因, 这为进一步研究这些溶菌酶的功能, 特别是对病原微生物的作用奠定了基础。     

肺心病患者血清甲状腺激素的变化

本文分析30例慢性肺心病心衰并呼衰患者(心衰并呼衰组)及30例慢性肺心病心衰无呼衰患者(心衰无呼哀组)和慢性肺心病死亡组的血清甲状腺激素水平。结果表明心衰并呼衰组T_3、T_4水平均值显著低于心衰无呼衰组和健康组,心衰无呼衰组T_3水平均值显著低于健康组,肺心病死亡组T_3、T_4水平均值显著低于存活组,并发现血清T_3、T_4水平与动脉血氧分压(PaO_2)呈正相关。作者认为T_3明显降低是重症肺心病的损伤性结果,预示病情严重,预后差。而T_4明显下降,可能是死亡的信号之一。     

甲状腺素是一种前激素吗?

50年代前,四碘甲腺原氨酸(T_4)一直被认为是甲状腺所分泌的、唯一直接在细胞水平发挥生理作用的激素。1952年Gross和Pitt-Rivers首次发现:人类血清中存在三碘甲腺原氨酸(T_3)。此后的研究证明:T_3也是甲状腺分泌的一种激素,其浓度虽仅为T_4的1/40;但无论在动物或人类,T_3的生理作用均比T_4大3～5倍。给予无甲状腺病人T_4后,可转变为     

三峡库区消落带落羽杉与立柳林土壤微生物生物量碳氮磷动态变化

为探究库区消落带人工乔木植被恢复重建后土壤质量及肥力的变化特征,于2016年6月(T_1)、2016年9月(T_2)、2017年6月(T_3)及2017年9月(T_4)选择165—175 m高程落羽杉与立柳土壤为研究对象,并以裸地作为对照,测定土壤微生物生物量碳、氮、磷和相关理化性质。结果表明:(1)经历水淹(T_2—T_3)会使土壤微生物生物量处于较低水平,落干期(T_1—T_2、T_3—T_4)落羽杉与立柳人工植被恢复生长能显著提高土壤微生物生物量,对土壤微生物恢复具有重要意义。(2)落羽杉与立柳土壤微生物生物量碳、氮占土壤有机碳、全氮百分比在4个时期均显著高于裸地,表明落羽杉与立柳土壤微生物对土壤碳、氮库的贡献大于裸地;落羽杉土壤微生物生物量磷及其占全磷百分比在T_1和T_3处于极低水平,T_2和T_4处于较高水平,应注意磷元素的迁移。(3)土壤微生物生物量碳、氮、磷与土壤有机碳和全氮有极显著相关性,与土壤pH值呈不同程度的负相关。在三峡库区消落带进行落羽杉与立柳乔木植被恢复重建能显著提高土壤微生物生物量及土壤肥力,进一步证实开展科学的植被修复与重建值得提倡和肯定。     

斑节对虾溶菌酶基因克隆及序列分析

参考对虾溶菌酶基因和类溶菌酶基因及其他多种生物的溶菌酶基因序列 ,设计并合成引物。运用RT PCR技术 ,从斑节对虾血细胞总RNA中扩增获得特异性片段。所获片段回收纯化后克隆到pGEM TEasyVector系统的T载体上。重组子的序列分析表明 ,所克隆的斑节对虾溶菌酶基因片段长 6 5 8bp ,包括溶菌酶基因开放阅读框 (ORF)4 77bp和 3′端非编码区的 181bp。 4 77bpORF共编码 15 8个氨基酸 ,包括溶菌酶成熟肽 14 0个氨基酸残基和信号肽 18个氨基酸残基。斑节对虾溶菌酶成熟肽推测分子量为 16 ,32kd ,等电点为 8 78。与南美白对虾溶菌酶基因的碱基序列及推测氨基酸序列比较 ,同源性分别为 89 5 %和 93 0 % ;与日本对虾类溶菌酶基因的同源性分别为 84 0 %和91 0 %。进一步的序列分析表明 ,斑节对虾溶菌酶氨基酸序列与多种类群生物的c 型溶菌酶氨基酸序列具有较高的同源性 ,并具有与c 型溶菌酶相同的活性位点氨基酸残基Glu51和Asp68,且与活性位点相邻的序列高度保守。斑节对虾溶菌酶氨基酸序列还具有与c 型溶菌酶相同的结构氨基酸——— 8个半胱氨酸残基。因而可认为所克隆的斑节对虾溶菌酶基因属c 型溶菌酶基因。     

盐酸羟考酮对肠道肿瘤术后患者镇痛效果及免疫功能的影响

目的:探讨盐酸羟考酮对肠道肿瘤术后患者的镇痛效果及免疫功能的影响。方法:选择2014年6月至2016年12月我院收治并行手术治疗的肠道肿瘤患者50例,按照随机数字表法分为羟考酮组及芬太尼组,每组各25例。羟考酮组患者于手术结束前15 min给予盐酸羟考酮5 mg静脉注射;芬太尼组患者于手术结束前15 min给予芬太尼50 ug静脉注射。两组术后分别启动盐酸羟考酮与芬太尼静脉自控镇痛。观察两组术后3 h(T_0)、6 h(T_1)、12 h(T_2)、24 h(T_3)、48h(T_4)视觉模拟评分(VAS)、Ramsey镇静评分变化;检测麻醉前、T_2、T_3、T_4血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)水平以及CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、NK细胞水平,并对比两组术后不良反应发生情况。结果:T_1、T_2时点羟考酮组Ramsey评分显著低于芬太尼组(P0.05),T_0、T_3、T_4时点两组Ramsey评分比较无统计学差异(P0.05)。T_2、T_3、T_4时点两组患者血清TNF-α、IL-6和IL-10较麻醉前均显著升高(P0.05),羟考酮组TNF-α、IL-6和IL-10显著低于芬太尼组(P0.05)。T_2、T_3、T_4时点两组患者CD4~+、CD4~+/CD8~+显著降低,CD8~+显著升高(P0.05),羟考酮组CD4~+、CD4~+/CD8~+显著高于芬太尼组,CD8~+显著低于芬太尼组(P0.05),T_2、T_3时点两组患者NK细胞显著降低,羟考酮组NK细胞显著高于芬太尼组(P0.05)。两组患者术后恶心、呕吐、呼吸抑制、头晕、皮肤瘙痒发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:盐酸羟考酮对肠道肿瘤患者免疫功能影响较小,适合肠道肿瘤患者。     

大别山北坡落叶阔叶林的物种多样性

应用Simpson生态优势度指数（C）,Shannon—Wiener多样性指数（H）和均匀度（E）等指标,对落叶阔叶林的4个组合类型的物种多样性进行了分析。结果表明;乔木层树种的多样性指数H变化在1.4709-3.8875之间,以T_3（3.8875）最高,依次为T_4、T_2、T_1（1.4709）最低;均匀度E为T_3＞T_4＞T_1＞T_2,而生态优势度C与H的变化相反。表现出物种多样性不只受到海拔高度、生境条件的影响,人为活动、群落的稳定性等因素也有重要作用。相反,灌木层和草本层的物种多样性受人为活动的影响相对较小,表现出常规的变化,即随海拔升高,H和E值降低,C值则升高。格局检验的结果表明：栓皮栎种群为集群分布,短柄枹群呈随机分布。而化香种则呈现在化香林中的集群分布,在短柄枹林中又为随机分布的特点。     

调节性T细胞FoxP3表达及稳定性的控制机制

正1 T_(reg)细胞及其在疾病发生中的作用调节性T细胞(regulatory T,T_(reg))是以FoxP3(forkhead box P3)基因稳定表达及免疫抑制功能为特征的T细胞谱系,具有诱导免疫耐受和免疫抑制的功能~([1]).一般认为T_(reg)是CD4~+T细胞的亚群,但近期有研究表明也存在CD8~+T_(reg),本文所介绍的T_(reg)是指CD4~+FoxP3~+的T_(reg),该细胞亚群可分为自然发生的nT_(reg)以及特定条件下诱导产生的iT_(reg).T_(reg)细胞可高表达CD25(IL-2Rα)和转录因子FoxP3通过产生一系列抑炎性细胞因子     

乌司他丁联合丙氨酰谷氨酰胺对体外循环瓣膜置换术患者炎症反应及肺功能的影响

目的:探讨体外循环(CPB)瓣膜置换术应用乌司他丁(ULi)联合丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)联合干预对患者机体炎症反应及肺功能的影响。方法:选取我院2013年6月~2016年11月收治并择期行CPB瓣膜置换术的54例患者,随机分为两组。对照组采用常规方法治疗,观察组采用丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)联合乌司他丁(ULi)。观察并比较两组患者围术期血清炎性因子及肺表面活性蛋白A(SP-A)水平、肺功能指标及机械通气时间。结果:与本组T_0时相比,两组在T_2、T_3、T_4、T_5血清IL-6、IL-8、T_NF-α及SP-A水平均显著升高(P0.01);与对照组同期对比,观察组在T_2、T_3、T_4、T_5的血清炎性因子及SP-A水平更低(P0.01)。与本组T_0时比较,两组在T_2、T_3、T_4、T_5的RI、A-a DO2值均显著上升(P0.01);观察组在T_2、T_3、T_4、T_5各时点的RI、A-a DO2值均显著低于对照组同期(P0.01)。与本组T_0时对比,两组在T_1时的Cst值均显著提高(P0.01)。观察组机械通气时间显著低于对照组(P0.01)。结论:CPB瓣膜置换术患者应用ULi联合Ala-Gln干预更能有效控制机体炎症反应,保护肺功能,值得临床推广应用。     

生产人体溶菌酶的“工程微生物”

溶菌酶存在于天然物中,有抗炎特性,也是感冒药的成份之一,有其潜在价值。然而来自人和鸡蛋的溶菌酶各不相同,鸡蛋的溶菌酶产生副作用,有其     

分子克隆中使用的其他酶(续)

用T_4多核苷酸激酶标记DNA5′端: T_4多核苷酸激酶(T_4感染E.coli)此酶催化ATP之r位磷转移到DNA或RNA的5′OH上的反应。     

异育银鲫c型溶菌酶全长cDNA序列的生物信息学分析及其组织表达分析

利用RACE及克隆等方法获得了异育银鲫（Carassius auratus gibelio）c型溶菌酶基因全长cDNA序列．序列分析表明,所克隆的异育银鲫溶菌酶的cDNA全长751 bp,包括溶菌酶基因开放阅读框（ORF）438 bp,5′ 非编码区（UTR）为109 bp和3′ UTR为204 bp．438 bp ORF共编码146个氨基酸,其成熟肽的分子量预测值为14　543.6,理论等电点为8.86．通过ClustalW软件,将异育银鲫和其它多个物种c型溶菌酶的氨基酸序列进行多序列比对发现,所克隆的异育银鲫溶菌酶编码的氨基酸序列中存在c型溶菌酶的活性中心（Glu53和Asp69）,且与活性位点相邻的氨基酸序列高度保守．同时,8个保守的半胱氨酸残基也与其它物种的c型溶菌酶相一致．结合BLASTN分析的结果,可以确认所获得的异育银鲫溶菌酶cDNA序列属于c型溶菌酶．异育银鲫c型溶菌酶和人c型溶菌酶（pdb 1at6_）在蛋白质序列上有50%相似性,其三维（3-D）结构非常类似．通过氨基酸空间位置比较发现,两者具有类似的酶活中心,异育银鲫c型溶菌酶只能形成3个二硫键,比人少1个．荧光定量RT-PCR检测和溶菌酶活性测定显示,异育银鲫头肾和脾脏c型溶菌酶mRNA的表达量约为肝胰脏的2.9 倍和1.7 倍,异育银鲫头肾和脾脏的溶菌酶活性约为肝胰脏的6.2 倍和4倍．     

右美托咪定对老年胸腔镜肺癌根治术患者拔管时血流动力学及术后疼痛的影响

目的:探讨右美托咪定对老年胸腔镜肺癌根治术患者拔管时血流动力学以及术后疼痛的影响。方法:选取67例择期行胸腔镜肺癌根治术的老年患者,根据随机数字表法分为对照组(n=33例)和研究组(n=34例),均予咪达唑仑、顺苯磺酸阿曲库铵、舒芬太尼、丙泊酚麻醉诱导,对照组同时予15 mL生理盐水静脉注射,研究组同时予0.5μg/kg右美托咪定静脉注射(15 min),术毕后均开启自控静脉镇痛(PCIA)泵。监测两组诱导前(T_0)、诱导后5 min(T_1)、入PACU时(T_2)、拔管即刻(T_3)、拔管后5 min(T_4)血流动力学指标,评估出PACU时(T_5)、术后2 h(T_6)、术后4 h(T_7)、术后6 h(T_8)、术后12 h(T_9)、术后24 h(T_10)疼痛视觉模拟量表(VAS)评分,检测T_0、T_8、T_9、T_10动脉血气评价肺功能,同时比较拔管时间、拔管质量评分、镇痛泵按压次数、24 h舒芬太尼用量及围术期不良反应。结果:与T0相比,对照组T_3、T_4时平均动脉压(MAP)、心率(HR)、中心静脉压(CVP)升高(P0.05),研究组T_3时MAP、HR、CVP升高(P0.05),与对照组相比,研究组T_3、T_4时MAP、HR、CVP较低(P0.05);与对照组相比,研究组T_6、T_7、T_8、T_9、T_10时VAS评分较低(P0.01);两组T_8、T_9、T_10时Qs/Qt升高(P0.05),OI、PaO_2/PAO_2降低(P0.05),与对照组相比,研究组T8、T9、T10时Qs/Qt较低(P0.05),OI、PaO_2/PAO_2较高(P0.05);与对照组相比,研究组拔管质量评分未见差异(P0.05),镇痛泵按压次数较少(P0.05),24 h舒芬太尼用量较少(P0.01)。结论:右美托咪定可明显稳定老年胸腔镜肺癌根治术拔管期血流动力学,并有较好的术后镇痛效果,一定程度上改善患者术后肺功能。     

T4溶菌酶在多型汉逊酵母中的表达及抑菌活性测定

溶菌酶是一类对多种细菌都具有明显杀菌效果的蛋白质.本研究将T4溶菌酶基因构建到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,以汉逊酵母A16来源的rDNA序列作为同源重组序列,在毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子（pGAP）的调控下,使T4溶菌酶在汉逊酵母A16中以组成型方式稳定高效表达.在37℃,pH6.0,摇瓶发酵培养72h后,表达量达到0.49g/L.结果表明,汉逊酵母能够识别源自毕赤酵母的甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子和醇氧化酶终止子序列,而且rDNA作为同源重组序列可以产生多拷贝的汉逊酵母重组子.对重组蛋白进行了N端测序、质谱及SDS-PAGE检测,发现重组蛋白N端与T4溶菌酶N端氨基酸序列一致,分子量大小约为18.7kD,与预计分子量大小相符.重组T4溶菌酶对革兰氏阳性和阴性细菌都具有抑菌活性和溶壁活性.非变性SDS-PAGE（无DTT）检测发现,重组T4溶菌酶形成了分子内二硫键和少量分子间二硫键,这种不正确的二硫键可能导致重组T4溶菌酶损失部分抗菌活性.     

人溶菌酶工程菌株培养条件的研究

人溶菌酶在食品工业和医药上具有广泛的用途,最近发现它在癌症的继承性免疫治疗上也有作用。为使人溶菌酶达到工业化生产,我们已成功地人工合成厂人溶菌酶基因,并构建了人溶菌酶基因的重组质粒和工程菌株。为提高该工程菌人溶菌酶的表达水平,我们对影响该工程菌表达人溶菌酶的培养条件进行探讨。