九连小檗悬浮培养细胞的固定化研究

用藻酸钙及聚氨酯泡沫固定九连小檗悬浮培养细胞，结果表明：采用延滞期的细胞固定时，到培养基的药根碱较多。电镜观察显示：固定的细胞在聚氨酯泡沫网格中不断生长，直至充满整个泡沫，并有一部分在泡沫表面生长。２０天继代一次。连续培养１４０天后，通过测定呼吸强度，证明细胞仍有生活力。     

九连小檗悬浮培养细胞生理生化研究——Ⅳ.细胞生长与酯酶同工酶变化的关系

本文报道了九连小檗细胞悬浮培养过程中细胞生长与酯酶同工酶变化的关系。分析了25代及第10代和第25代不同生长时期的细胞和培养液的酯酶同工酶。结果表明,各代第18天的酯酶同工酶谱没有差异,而在生长周期中,不同时期的酶谱则有变化,对数期出现了新的谱带,这说明培养细胞的酯酶同工酶与细胞生长相关。     

九连小檗悬浮培养细胞生理生化特性的研究 Ⅴ．细胞生长与呼吸作用及对主要营养元素吸收、消耗的关系

叙述了九连小檗细胞悬浮培养中细胞生长与呼吸作用及对主要营养元素吸收消耗的关系。细胞接种于新鲜培养液中,呼吸作用强度和对主要营养元素的吸收、消耗便迅速增加。接种后第６天,培养液中ＰＯ４３－几乎被耗尽,Ｋ＋和ＮＯ３－的浓度也减少一半,细胞生长由延迟期进入起始生长期。至第８天呼吸强度达到高峰,细胞生长加速,但细胞生长高峰延迟于呼吸高峰。随后,营养物质的消耗减少,呼吸降低,生长减慢。至静止期细胞生长停止,呼吸作用微弱。这些结果为优化培养条件,改进培养基组成,调控细胞生长和代谢提供了参考。     

九连小檗悬浮培养细胞生理生化特性的研究 Ⅴ．细胞生长与呼吸作用及对主要营养元素吸收、消耗的关系

叙述了九连小檗细胞悬浮培养细胞生长与呼吸作用及对主要营养元素吸收消耗的关系。细胞接种于新鲜培养液中,呼吸作用强度和对主要营养元素的吸收,消耗便迅速增加。接种后第６天,培养液中ＰＯ４＾３＾－几乎被耗尽,Ｋ＾＋和ＮＯ３的浓度也减少一半,细胞生长由延迟期进入起始生长期。至第８天呼吸强度达到高,细胞生长加,但细胞生长高峰延迟于呼吸高峰。随后,营养物质的消耗减少,呼吸降低,生长减慢,至静止期细胞生长停止,呼     

九连小檗悬浮培养细胞生理生化特性的研究——Ⅱ.干物质积累与过氧化物酶同工酶和蛋白质的变化

本文报道了九连小檗细胞悬浮培养过程干物质积累与过氧化物酶同工酶和可溶性蛋白质的变化。实验表明在悬浮培养过程中细胞干物质积累可分为四个时期,即延迟期、缓慢增重期、线性增重期和减慢静止期。过氧化物酶同工酶谱的变化与干物质积累相关,在延迟期和减慢静止期的同工酶谱带较少,活力较低,在增重期的同工酶谱带较多,活力较高。蛋白质含量在接种后的第2至5天达到高峰,随后便逐渐降低,这些大分子的变化是在一定条件下基因表达的引发或阻抑的结果。     

从九连小檗细胞培养物中分离和鉴定药根碱

九连小檗的叶片,在含有2,4-D(1mg/l),KT(0.1mg/l),琼脂(0.8%),蔗糖(2%)的B,培养基上,诱导出愈伤组织,在25±2℃条件下进行固体、液体培养、收集悬浮培养20天的细胞进行化学抽提和分离,得到一种橙黄色结晶,经 HPLC、UV、IR、MS 和 NMR 等分析鉴定,证明为药根碱。经药理试验表现有明显的生理活性。     

蔗糖和硝酸铵对黄连悬浮培养细胞生长和小檗碱含量的影响

在６、７－Ｖ液体培养基中较为适合黄连细胞生长的蔗糖浓度为．３％,当蔗糖浓度增加到７％时,细胞生长速率开始下降,但小檗碱含量提高到５．２０％．小檗碱产率为４５６．６０ｍｇ／Ｌ（２３天）。基本培养基中随着补加ＮＨ４ＮＯ３浓度的增加,抑制细胞生长愈严重;补加０．８ｇ／ＬＮＨ４ＮＯ３的小檗碱含量比未加的增加约１０％,随着浓度的增加又急剧下降。     

从九连小檗细胞培养物中分离和鉴定药根碱

九连小檗的叶片,在含有2,4－D（1mg/l),KT(0.1mg/l),琼脂（0．8％）,蔗糖（2％）的B3培养基上,诱导出愈伤组织,在25±2℃条件下进行固体,液体培养,收集悬浮培养20天的细胞进行化学抽提和分离,得到一种橙黄色结晶,经HPLC,UV,IR,MS和NMR等分析鉴定,证明为药根碱,经药理试验表现有明显的生理活性。     

九连小蘖悬浮培养细胞生理生化研究 Ⅰ.细胞生长与培养液的电导率和过氧化物酶活性的变化

本文报道了九连小蘖细胞悬浮培养过程中,细胞生长与培养液的电导率、pH值、可溶性糖含量及过氨化物酶活性的变化。实验表明细胞生长曲线与培养液的电导率、可溶性糖含量变化的曲线恰成镜像关系。而细胞生长曲线与培养液的过氨化物酶活性变化的曲线相互平行。从而,可以通过监测培养液的电导率和过氧化物酶活性的变化来了解细胞生长状况,并可作为植物细胞培养过程中生物量增长的参考指标。     

九连小蘖悬浮培养细胞生理生化研究 Ⅰ.细胞生长与培养液的电导率和过氧化物酶活性的变化

本文报道了九连小蘖细胞悬浮培养过程中,细胞生长与培养液的电导率、pH值、可溶性糖含量及过氨化物酶活性的变化。实验表明细胞生长曲线与培养液的电导率、可溶性糖含量变化的曲线恰成镜像关系。而细胞生长曲线与培养液的过氨化物酶活性变化的曲线相互平行。从而,可以通过监测培养液的电导率和过氧化物酶活性的变化来了解细胞生长状况,并可作为植物细胞培养过程中生物量增长的参考指标。     

粉叶小檗细胞的悬浮培养及某些相关的生理生化特性

研究了粉叶小檗细胞悬浮培养过程中细胞生长与小檗碱合成的时间进程,以及某些生理生化特性与上述二者之间的关系。结果表明,细胞生长速度为0．7585g（DW）·L-1（培养基）·d-1,细胞产率在第13d达最大值,为986g·L-1（培养基）。小檗碱含量在第10d最高,为2.51％;小檗碱最大产率出现在第13d,为200.2mg·L-1培养基）。细胞生长和小檗碱积累与培养液中的可溶性精、总磷含量和电导率的变化是负相关,与过氧化物酶活性变化相平行,细胞内可溶性蛋白含量的增加比细胞生长提前。     

HPLC法同时测定黄柏中盐酸药根碱、盐酸巴马汀及盐酸小檗碱的含量

分离并测定黄柏中盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量.方法:Shim-Pack型C18柱,0.5% w/v SDS-Britton-Robinson缓冲液 pH2.5 -乙腈-三乙胺 0.5∶56∶34∶0.5 为流动相,检测波长:345nm;柱温:40℃;流速1mL·min-1.盐酸药根碱回归方程为Y=38315164.0X-1897.7,r=0.9991 n=6 ,线性范围0.05～0.30μg,平均回收率为95.90%,RSD=3.10%;盐酸巴马汀回归方程为Y=1982872.0X-2471.1,r=0.9998 n=6 ,线性范围0.09～0.54μg,平均回收率100.2%,RSD=2.01%;盐酸小檗碱回归方程为Y=9450164.2X-3456.9,r=0.9999 n=6 ,线性范围0.50～3.00μg,平均回收率103.1%,RSD=1.12%;结果表明:在以上条件下,盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱成分可以完全分离,并测定了黄柏药材含量.本法可用于黄柏药材、饮片、含黄柏中成药的质量控制.     

季节和地理差异对天然黄檗小檗碱和药根碱含量的影响

用高效液相色谱法测定了黄檗根皮、茎皮、多年生枝皮、1年生枝和叶片中小檗碱和药根碱的含量,研究黄檗不同部位两种生物碱的季节和地理差异。结果表明:不同季节,天然黄檗各部位的小檗碱、药根碱含量均表现为:根皮茎皮多年生枝皮1年生枝叶片。小檗碱含量随着季节变化在各部位呈现夏季升高,到秋季下降的趋势。而药根碱在不同部位中的含量随着季节变化的规律不同。根皮、茎皮中的药根碱含量随着季节推移逐渐增多,在夏季升高不明显,而到秋季大量积累。多年生枝皮、1年生枝、叶片中的药根碱在3个季节表现则为先降后升。从纬度水平上看,不同地域间黄檗各部位的生物碱差异显著,在调查的40°—50°N范围内,黄檗两种生物碱的含量普遍在纬度低的地区较高,随着纬度增大先逐渐降低,到N44°左右达到最低值,到了高纬度地区略有回升。     

应用分光光度法、薄层扫描及高效液相色谱法进行药根碱的定量分析

本工作比较考察了用分光光度法、薄屋扫描和高效液相色谱定量测定药根碱(Jatrorrhizine)的三种分析方法。对于九连小檗(Berberis julianae Schneid)细胞培养物的抽提液,其药根碱的含量可直接用分光光度法在波长430nm处进行测定,也可经薄层层析后用450nm波长进行反射吸收扫描定量,还可用高效液相色谱ODS反相柱经磷酸-乙腈体系洗脱,用346nm波长进行检测。三种方法均可得到良好的分析结果。