胰岛素和胰岛素突变体促进大鼠脂肪细胞摄取葡萄糖

报道了大鼠脂肪细胞摄取葡萄糖测定胰岛素体外活性的简便方法 .在胰岛素存在下 ,脂肪细胞摄取葡萄糖的量比对照增加 5～ 6倍 .当胰岛素浓度在 0 .2～ 1 0μg/L时 ,脂肪细胞摄取D [3 ³H] 葡萄糖的量与胰岛素浓度对数呈线性关系 .葡萄糖和 3 O 甲基葡萄糖抑制指脂肪细胞摄取D [3 ³H]葡萄糖 .利用这一方法测定了[B₂ Lys] 胰岛素和 [B₃ Lys] 胰岛素的体外活力 ,分别为胰岛素的 6 1.6 %和 154% .     

辣椒碱对3T3-L1 前脂肪细胞葡萄糖摄取的影响

目的:探讨辣椒碱对3T3-L1前脂肪细胞葡萄糖摄取的影响。方法:不同浓度的辣椒碱作用于3T3-L1前脂肪细胞,采用MTT测定细胞活性,GLU Test试剂盒法测定葡萄糖摄取,Western Blot法检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)表达的变化。结果:25μM辣椒碱作用72 h和50μM、100μM辣椒碱作用48 h、72 h,可显著抑制3T3-L1细胞增殖,6.25、12.5、25μM辣椒碱作用可显著促进3T3-L1细胞的葡萄糖摄入,Western Blot结果显示辣椒碱能够显著增加GLUT1蛋白表达量,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:低剂量辣椒碱具有降糖作用,其作用机制可能与增加GLUT-1蛋白表达有关。     

葡萄糖与胰岛素对3T3-F442A脂肪细胞中Leptin表达的调节

为了解葡萄糖与胰岛素对３Ｔ３Ｆ４４２Ａ脂肪细胞中Ｌｅｐｔｉｎ表达的调节,应用ＲＴＰＣＲ方法以ｂｅｔａａｃｔｉｎ为内对照对不同葡萄糖和／或胰岛素浓度培养条件下３Ｔ３Ｆ４４２Ａ脂肪细胞中ＬｅｐｔｉｎｍＲＮＡ表达水平进行相对定量分析。结果表明葡萄糖与胰岛素对３Ｔ３Ｆ４４２Ａ脂肪细胞中Ｌｅｐｔｉｎ表达有促进作用,过高浓度的葡萄糖抑制Ｌｅｐｔｉｎ的表达及胰岛素对Ｌｅｐｔｉｎ表达的促进。葡萄糖和胰岛素对Ｌｅｐｔｉｎ表达的促进作用无协同效应,且这种促进作用表现出饱和性特点。葡萄糖浓度的变化对脂肪细胞中Ｌｅｐｔｉｎ的表达与调控具有十分重要的影响。     

运动调节骨骼肌细胞葡萄糖摄取的研究进展

胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的主要诱因,运动因其在改善骨骼肌胰岛素敏感性方面的显著作用,已被临床采用作为防治IR和T2DM的有效手段。运动能增加葡萄糖转运子4 (glucose transporter type 4,Glut4)的转位,而影响Glut4转位和葡萄糖摄取的途径包括胰岛素信号通路和肌肉收缩两大类。研究发现运动通过增加骨骼肌血流灌注、毛细血管募集、胰岛素信号途径和Sestrins-mTOR (mammalian target of rapamycin)信号通路而改善Glut4转位。因此,全面理解运动调节骨骼肌Glut4转位和葡萄糖摄取的分子机制对于揭示运动疗法防治糖代谢异常的机制具有重要意义。     

葡萄糖与胰岛素能减少大鼠快速眼动睡眠时间

使内源性胰岛素增高或腹腔注射低于惊厥剂量的胰岛素(1.01U/kg)均可使大鼠脑中5-羟色胺(5-HT)与色氨酸浓度增高。含5-HT的脑神经元可能对睡眠的控制、温度调节、运动、食物消耗、痛觉和性活动起作用。实验用30只成年雄性大鼠分成3组,将不锈钢圆头螺旋电极钉入实验鼠颅骨,引导额-枕叶脑电图(EEG),腹腔内注射高剂量葡萄糖(2.5g/kg)和非-惊厥剂量胰岛素的合并给药,使大鼠睡眠—觉醒周期改变:在整个EEG连续记录8h中,第1～第5个小时,快速眼动(REM)睡眠时间明显减少,在第3、第4     

葡萄糖与胰岛素对3T3—F442A脂肪细胞中Leptin表达？…

为了解葡萄糖与胰岛素对３Ｔ３－Ｆ４４２Ａ脂肪细胞中Ｌｅｐｔｉｎ表达的调节，应用ＲＴ－ＰＣＲ方法以ｂｅｔａ－ａｃｔｉｎ为内对照对不同葡萄糖和／或胰岛素浓度培养条件下３Ｔ３－Ｆ４４２Ａ脂肪细胞中Ｌｅｐｔｉｎ ｍＲＮＡ表达水平进行相对定量分析。     

脂肪细胞在肝细胞胰岛素耐受过程中的作用

目的研究脂肪细胞在不同分化阶段对肝细胞胰岛素抵抗的影响。方法体外诱导3T3-L1脂肪前体细胞分化,细胞内脂滴增加,逐步分化成脂肪细胞。采用不同分化阶段脂肪细胞（未分化0 d、中期分化4d、接近完全分化8d）与原代肝细胞共培养。Western印迹法检测共培养后肝细胞内胰岛素信号通路的反应性;葡萄糖同位素标记方法检测肝细胞糖原合成能力。结果以未共培养的肝细胞为对照组,共培养后肝细胞内胰岛素受体底物-2酪氨酸磷酸化（Tyr^612）（pIRS-2）水平及Akt磷酸化（Ser^473）（pAkt）水平均显著下调;肝糖原合成能力明显降低;与较成熟脂肪细胞共培养后,肝细胞pIRS-2及pAkt水平与其他分化阶段组共培养比较下调明显,肝糖原合成能力随着脂肪细胞的成熟而明显降低。结论脂肪细胞可能诱导肝细胞发生胰岛素抵抗,肝细胞胰岛素信号通路的阻滞程度与脂肪细胞的分化程度呈正相关。     

慢性高剂量胰岛素刺激猪脂肪细胞脂肪分解

为研究慢性高剂量胰岛素对猪脂肪细胞脂肪分解的影响及其分子机制, 分化的猪脂肪细胞在PKA(Protein kinase A)或ERK(Extracellular signal-related kinase)抑制剂预处理或不处理的情况下, 再用不同浓度的胰岛素(0、200、400、800、1600 nmol/L)处理不同时间(24、48、72、96 h), 通过测定甘油释放量检测脂肪细胞的脂解率; 采用RT-PCR和Western blotting检测perilipin A和PPARg2的mRNA和蛋白表达。结果显示, 慢性高剂量胰岛素以剂量和时间依赖性的方式刺激猪脂肪细胞的脂肪分解, 并削弱脂肪细胞对异丙肾上腺素刺激的脂解应答; 同时显著下调perilipin A和PPARg2的mRNA及蛋白表达; 另外, PKA和ERK抑制剂均显著抑制胰岛素刺激的脂肪分解, 但仅ERK抑制剂显著逆转perilipin A基因表达的下调。由此推测, 慢性高剂量胰岛素通过ERK通路抑制perilipin A的表达, 进而刺激猪脂肪细胞的脂肪分解。     

促葡萄糖摄取细胞模型的构建及应用

植物是发现先导药物的天然宝库,目前抗糖尿病药物的一个重要来源是植物。从植物中发现抗糖尿病药物的关键在于抗糖尿病药物筛选模型的建立。为获得一个更稳定、筛选结果更可靠的抗糖尿病药物筛选模型,本文对基于脂肪细胞摄取葡萄糖的药物筛选模型进行优化。文献报道的该类模型,只将胰岛素作为阳性对照,而本文同时将胰岛素和罗格列酮作为阳性对照,使模型更加稳定、筛选结果更加可靠。此外,本文还以胰岛素信号通路抑制剂Akt1/2抑制剂作为另一阳性对照,使之还可应用于胰岛素信号通路抑制剂的筛选,扩展了该模型的用途。最后,对16个植物来源的天然产物在该模型进行筛选,其结果稳定,并发现3个活性化合物。进一步对活性化合物X15、X16进行浓度梯度实验,结果表明,两者的活性都具有明显的浓度依赖性。X15和X16的细胞增敏活性的研究为后续进一步研究其分子作用机理奠定基础,并为后期可能的药物开发提供分子候选。     

尾加压素Ⅱ抑制葡萄糖激酶的表达和葡萄糖诱导的胰岛素分泌

本研究旨在探讨尾加压素II(urotensin II,UII)对胰岛β细胞功能的影响及其机制。在整体实验中,采用Wistar大鼠进行糖耐量试验,检测不同剂量UII(3、30、300nmol/kg)对大鼠血糖和胰岛素水平的影响;在细胞实验中,βTC-6细胞孵育实验检测UII对葡萄糖引起的胰岛素分泌(glucose-induced insulin secretion,GIIS)的影响,酸化乙醇抽提法和实时荧光定量PCR分别测定细胞内胰岛素含量和mRNA的水平,Western blot检测胰十二指肠同源盒1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)和葡萄糖激酶(glucokinase,GCK)表达水平。糖耐量试验结果显示,相对对照组,急性静脉注射较高剂量的UII(30、300nmol/kg)使大鼠血浆胰岛素浓度在腹腔注射葡萄糖后15min显著下降,并且使大鼠血糖在腹腔注射葡萄糖后90min明显升高。βTC-6细胞孵育实验结果显示,UII孵育2h能抑制βTC-6细胞的GIIS,但是对细胞内的胰岛素含量和mRNA水平没有影响。UII对GIIS的抑制作用可以被UII受体拮抗剂urantide所阻断,部分被蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)非特异性抑制剂chelerythrine chloride(CTC)和生长抑素受体非特异性拮抗剂cyclosomatostatin(CSS)所阻断。Western blot结果显示,UII抑制了βTC-6细胞内GCK的表达,但对PDX-1表达量没有影响。以上结果表明,UII通过激活其特异性受体(较高浓度的UII可能同时激活生长抑素受体)抑制胰岛β细胞GIIS,其作用机制涉及PKC通路的激活、GCK表达受抑所引起的胰岛素颗粒胞吐作用的减弱,但不涉及胰岛素本身表达的下降。     

TNFα对正常昆明小鼠骨骼肌和肝脏葡萄糖摄取的影响

目的观察肿瘤坏死因子α(TNFα)对正常昆明小鼠骨骼肌和肝脏葡萄糖摄取的影响。方法80只昆明小鼠随机分为高剂量连续注射组(TH组,n=20)、TNFα低剂量连续注射组(TL组,n=20)、TNFα高剂量一次注射组(T1组,n=20)和正常对照组(C组,n=20),以3H标记的2脱氧葡萄糖(2-DG)为示踪剂,观察各组非胰岛素刺激(基础)和胰岛素刺激的离体骨骼肌和肝脏葡萄糖摄取量的变化。结果1)正常昆明小鼠肝脏基础葡萄糖摄取量明显高于骨骼肌葡萄糖摄取量(P<0.01),肝脏胰岛素刺激的葡萄糖摄取量变化值明显低于骨骼肌葡萄糖摄取量变化值(P<0.01)。2)TH组和TL组骨骼肌和肝脏基础葡萄糖摄取量均明显高于C组(P<0.01),且TH组明显高于TL组(P<0.01)。3)TH组和TL组骨骼肌和肝脏胰岛素刺激的葡萄糖摄取量均明显低于C组(P<0.01),且TH组明显低于TL组(P<0.01)。4)T1组骨骼肌和肝脏无论基础还是胰岛素刺激的葡萄糖摄取量均与C组差异无显著性(P>0.05)。结论1)正常动物肝脏和骨骼肌葡萄糖摄取方式不同,骨骼肌葡萄糖摄取受胰岛素调控比肝脏强。2)TNFα抑制组织胰岛素刺激的葡萄糖摄取,但促进组织基础葡萄糖摄取。3)TNFα对组织葡萄糖摄取的影响,呈剂量和时间依赖性。     

用18F-FDG观察脂肪肝患者肝脏葡萄糖摄取变化

目的:通过PET/CT检查观察脂肪肝患者肝脏及其他组织对18F脱氧葡萄糖(18F-FDG)摄入变化,探讨脂肪肝与糖脂代谢的相关性.方法:36例做PET/CT的健康和2型糖尿病男性患者,分为对照组(n=18例);脂肪肝组(n=9例):糖尿病脂肪肝组(n=9例).常规测血糖、血脂及肝肾功能.PET/CT测肝脏CT值和肝脏、肾皮质,骨骼肌组织18F-FDG的最大标准摄入值(SUVmax)及平均标准摄入值(SUVmean).结果:1.糖尿病脂肪肝组的TG显著高于单纯脂肪肝组和正常对照组,P=0.0003,0.0000.单纯脂肪肝组的TG亦显著高于正常对照组,P=0.028.2.糖尿病脂肪肝组的肝脏18F-FDG的SUVmean和SUVmax显著高于正常对照组的SUVmean和SUVmax,P=0.0054,0.0133.单纯脂肪肝组的肝脏SUVmean和SUVmax亦高于正常对照组,但比较无统计学差异.脑皮质、肾皮质和骨骼肌组织的18FDG的SUVmean和SUVmax三组间比较无显著性差异.3.Spearman相关性分析发现FBG与TG显著正相关(r=0.59919,P=0.0004);FBG和TG与肝脏的CT值显著负相关(r=-0.55625,P=0.0004;r=-0.45739,P=0.0097).结论:脂肪肝与空腹血糖和甘油三酯升高显著相关.脂肪肝及2型糖尿病脂肪肝患者肝脏对葡萄糖摄取增高.     

B22Asn人胰岛素突变体的研究

通过ＤＮＡ定点突变法将人胰岛素Ｂ２２Ａｒｇ改造成Ｂ２２Ａｓｎ,去除其一级结构中碱性蛋白酶位点,以期提高胰岛素在体内的稳定性,突变体基因克隆到表达载体ＰＢＶ２２０中,在Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α中进行表达,分离纯化后的表达产物经胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ联合作用获得重组Ｂ２２Ａｓｎ－人胰岛素,该突变胰岛素具有抗胰蛋白酶水解能力,但是其与受体的结合能力只有标准猪胰岛素的１２．４％,胰岛素结构中的Ｂ２２Ａｒｇ可能在     

B22Asn人胰岛素突变体的研究

通过ＤＮＡ定点突变法将人胰岛素Ｂ２２Ａｒｇ改造成Ｂ２２Ａｓｎ,去除其一级结构中碱性蛋白酶位点,以期提高胰岛素在体内的稳定性。突变体基因克隆到表达载体ｐＢＶ２２０中,在Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α中进行表达。分离纯化后的表达产物经胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ联合作用获得重组Ｂ２２Ａｓｎ－人胰岛素．该突变胰岛素具有抗胰蛋白酶水解能力,但是其与受体的结合能力只有标准猪胰岛素的１２．４％．胰岛素结构中Ｂ２２Ａｒｇ可能在胰岛素与其受体结合过程中起重要作用。     

赖氨酸甲基化酶SET7对细胞葡萄糖摄取能力的影响

[目的]探讨SET甲基转移酶7(SET domain containing lysine methyltransferase 7,SET7)对葡萄糖转运载体4(glucose transporter 4,GLUT4)甲基化水平及细胞葡萄糖摄取能力的影响。[方法]通过蛋白甲基化及短肽甲基化实验,明确SET7对GLUT4的甲基化位点;在人胚肾上皮细胞293T中通过siRNA手段沉默SET7蛋白的表达水平,并分别通过蛋白免疫印迹和2-脱氧-3H-D-葡萄糖掺入实验检测GLUT4蛋白在细胞内的亚定位及其对细胞葡萄糖摄取能力的影响。[结果]蛋白甲基化实验表明SET7能够促使GLUT4(1～100aa)这一片段发生甲基化,进一步的短肽甲基化实验证实SET7能够促使GLUT4-K50位点发生单甲基化(K50me);沉默SET7后可限制细胞浆中的GLUT4转移至细胞膜;与对照组相比,SET7沉默组细胞葡萄糖摄取效率降低了76%,经t检验分析,这种差异有统计学意义(P <0. 001)。[结论]SET7可促进GLUT4-K50位点发生单甲基化,沉默SET7后可限制细胞浆中的GLUT4转移至细胞膜,...     

TIMP-3表达下调促进前脂肪细胞分化

细胞与细胞外基质的相互作用以及细胞外基质的重构在脂肪组织的形成过程中发挥了重要作用。细胞外基质的这一系列变化是由细胞分泌的蛋白酶及其抑制物调控的,其中基质金属蛋白酶(MMPs)是一类调控细胞外基质分解的蛋白酶家族。MMPs的活性受其四种组织抑制物调节,即TIMP1-4。以前对TIMP在脂     

人胰岛素突变体的分离纯化及性质研究

将人胰岛素原突变体(A4Glu→Leu)基因重组到pBV220表达载体上,在E.coli系统中得到高效表达,表达产物经SephadexG-50柱层析分离以及胰蛋白酶和羧肽酶B的酶促转化等步骤,可得到纯的人胰岛素突变体(A4Glu→Leu),其氨基酸组成与预期值相符,其受体结合活性及生物活性与标准猪胰岛素的基本相同.     

糜子EMS突变体库构建和突变体筛选

糜子(Panicum miliaceum L.)具有抗旱、耐瘠、适应性广、生育期短等特点,是我国北方地区的杂粮作物。糜子高产品种不耐水肥、易倒伏,锄草、间苗费时费工的问题严重影响着农民对糜子生产的积极性和收入。EMS(甲基磺酸乙酯)化学诱变方法成本低,操作简单,诱变率高,是作物育种的重要方法。本试验选用糜子品种伊选大红糜进行EMS化学诱变而构建突变体库,对获得的2333个M2材料进行突变频率和全生育期表型多样性等特征的分析。结果显示,所构建的糜子突变体库材料变异类型非常丰富,共发现104个形态性状突变株系,突变频率为4.5%,包括叶色、叶型、株高、生育期、育性、穗型、种皮颜色等性状,该突变体库的构建将为糜子功能基因组学研究和育种提供丰富的突变体资源和新型种质。