不同方法测定聚乙二醇化重组人干扰素α-2b注射液的纯度

目的:建立聚乙二醇化重组人干扰素α-2b(PEG.rhIFNα-2b)注射液纯度测定方法.方法:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE),对凝胶银染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8mm× 300mm)凝胶柱,流动相:0.2 mol·L-1PB-0.2 mol·L-1NaCl-异丙醇(48.5/48.5/3,v/v);流速:0.6 ml·min-1;检测波长:280 nm;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),使用C8(4.6mm×250mm)色谱柱,流动相:A液:0.1%三氟乙酸溶液;B液:95%乙腈的A液,梯度:0%～100%B(30min);流速:1mL·min-1;检测波长:214nm.结果:三种方法测得PEG-rhIFNα-2b的纯度分别为100%、100%、98.90%.结论:三种方法均适用于PEG.rhIFNα-2b注射液纯度测定,检测结果符合生物制品质量控制规定.     

重组乙肝疫苗纯度高效液相层析(HPLC)测定方法的改进

为建立重组汉逊酵母乙肝疫苗HPLC检定方法,应用TSK－G5000PW检测系统测定汉逊酵母重组乙肝疫苗表面抗原的纯度,对不同样品处理液的配比浓度和处理时间分别进行了探讨,作者选用DTT／Tween-80作为样品处理效果优于DTT＋Tween-20,1:50Tween-80与0.1mol/L等量混合为样品处理液的适宜浓度。样品处理液与等量样品混匀时间介于35s-2min时,HPLC分离效果好,结果稳定。该处理液及处理时间对CHO细胞及Merck酿酒酵母重组乙肝疫苗表面抗原的HPLC纯度测定无影响。结果表明：现有的HPLC检测系统用0.1mol/L DTT与1：50 Tween-80等量混合处理后能有效地检测不同类型重组乙肝疫苗表面抗原的纯度。     

鸦胆子中苦木内酯类化合物的制备分离和化学表征

研究制备型高效液相色谱分离纯化鸦胆子中3个苦木内酯的方法。制备色谱的参数为:色谱柱为C18柱(50 mm×200 mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比为40∶60),流速100 mL/min,二级管阵列检测器检测波长为270 nm,进样体积为2 mL。在30 min的运行时间内,鸦胆苦素D,鸦胆苦醇与鸦胆因H与干扰成分得到很好的分离,经HPLC和熔点测定等方法检测纯度均达到98%以上,化学结构由核磁共振氢谱和碳谱进一步确认。此方法具有快速高效、分离组分纯度高的特点,可用于制备鸦胆苦素D、鸦胆苦醇及鸦胆因H。     

MEK高表达细胞膜层析柱制备及应用

[目的]通过制备MEK高表达细胞膜色谱层析柱,建立MEK潜在抑制剂筛选方法和体系。[方法]以非小细胞肺癌细胞系A549为材料,提取总RNA,RT-PCR体外扩增mek基因,随后克隆至p EGFP-C1质粒中,脂质体转染A549细胞,G418筛选,获得稳定转染细胞株,以此稳定转染细胞株为对象,构建MEK+/+的细胞膜层析柱。最后,以MEK抑制剂AZD-6244为受测体,流动相为磷酸盐缓冲液,变性洗脱液为p H 3. 3的磷酸盐缓冲液。所得所有组分采用高效液相检测,检测条件为:Dikma C18柱(150 mm×4. 6 mm,5μm);流动相为甲醇:5 mmol/L磷酸盐缓冲液(60∶40);检测波长为203 nm;柱温为30℃;流速为1. 0 m L/min。[结果]所构建的p EGFP-C1-MEK质粒经酶切、测序鉴定,结果正确; Western Blot检测稳定转染细胞株中MEK蛋白含量较A549细胞大幅提高;高效液相检测表明AZD6244在MEK+的A549细胞膜上有保留,表明所建MEK+A549细胞膜层析柱可应用于MEK抑制剂的筛选和检测。[结论]所构建的MEK高表达细胞膜层析柱具有成为MEK潜在抑制剂筛选的潜在有效方法。     

罗布麻叶配方颗粒与传统汤剂HPLC指纹图谱的相关性

建立了罗布麻叶传统汤剂的HPLC指纹图谱,并对其与配方颗粒的HPLC指纹图谱相关性进行了评价.采用Kromasil 100-5-C18,250 mm×4.6mm,5 μm的色谱柱,以2g/L H3PO4-乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱,检测波长为360 nm,柱温40℃,流速1.0 mL/min,进样体积10 μL.结...     

白屈菜药材HPLC指纹图谱研究

本文建立了白屈菜药材的HPLC指纹图谱。采用DiamonsilC 18柱 (迪马公司 )为分析柱 ,以乙腈 0 0 1MKH2 PO4 梯度洗脱为流动相 ;柱温 35℃ ;流速 1ml/min :检测波长 2 90nm。在上述条件下可以很好的分离白屈菜的各类成分 ,得到的色谱图可作为白屈菜药材专属性的指纹图谱。     

减毒HAV在体外抑制HBV表达HBeAg和HBsAg的实验研究

目的　探索减毒甲型肝炎病毒( HAV) ( H2减毒株)在Hep G2 .2 .15细胞中对乙型肝炎病毒( HBV)表达HBs Ag和HBe Ag的影响。方法　在Hep G2 .2 .15细胞中,加入含3×10 - 2 ( 3×10 4 .5CCID50 / ml) ,3×10 - 3( 3×10 3.5CCID50 / ml)浓度的减毒HAV。按不同疫苗浓度,每4 d换液1次,留取第12和第16天的培养上清液;同时设立对照组。用微粒子酶免分析法检测培养上清液中的HBs Ag和HBe Ag含量。计算减毒HAV在不同浓度,以及不同作用时间长度的条件下,对Hep G2 .2 .15细胞表达HBs Ag和HBe Ag的影响。结果　3×10 - 2 Ampoule/ ml的减毒HAV作用Hep G2 .2 .5细胞12 d后,培养上清液的HBe Ag浓度为( 4 7.2 3±6 .18) S/ CO,低于对照组的( 10 1.15±15 .77) S/ CO,2组比较差异有非常显著性( P<0 .0 1) ;16 d后,上清液HBe Ag含量为( 4 0 .2 7±13.30 ) S/ CO,也显著低于对照组的( 6 5 .85±3.4 6 ) S/ CO( P<0 .0 5 ) ;HBs Ag含量为( 2 .6 8±0 .31) S/ N,低于对照组的( 5 .10±1.2 7)S/ N,差异有显著性( P<0 .0 5 )。而3×10 - 3Ampoule/ ml的减毒HAV作用Hep G2 .2 .15细胞12 d后,培养上清液的HBs Ag浓度与对照组比较有显著性下降( P<0 .0 5 )。结论　一定浓度的减毒HAV可能有直接抑制HBV表达HBs Ag,HBe Ag的作用     

柱前衍生化HPLC同时测定霍山石斛中13种游离氨基酸含量

为建立柱前衍生化HPLC同时测定霍山石斛中13种游离氨基酸的方法。采用Waters XBridge C_(18)色谱柱(250 mm×4. 6 mm,5μm);流动相为0. 1 mol/L醋酸钠缓冲液-乙腈∶水(4∶1),梯度洗脱;流速1. 0 mL/min,柱温35℃;检测波长254 nm。在该色谱条件下霍山石斛中13种游离氨基酸分离较好,平均加样回收率为92. 7%~104. 3%,RSD 2. 5%。该方法简便、准确、重现性好,适用于霍山石斛中13种游离氨基酸的同时测定。     

HPLC法测定植物中乌索酸的含量

采用HPLC法测定6种植物中乌索酸的含量,为扩大植物中乌索酸药物资源的开发利用提供分离测定方法。色谱柱为SyrmnetryShieldRP18,流动相甲醇-水-磷酸(88：12：0．1),流速1．0mL／min,检测波长210m,柱温2．5℃。该方法的线性范围为0．192-3．072μg,R=0．9999,平均回收率为98．12％,RSD=1．7％(n=5)。HPLC法测定乌索酸含量灵敏、准确、重现性好。     

苗药滚山珠HPLC指纹图谱及化学模式识别研究

利用HPLC指纹图谱结合化学模式识别技术对滚山珠药材进行质量评价.采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1％乙酸水溶液为流动相梯度洗脱,检测波长254 nm,流速0.8 mL/min,进样量2 μL,柱温25℃.然后利用相似度评价、聚类分析、主成分分析和...     

HPLC法测定感冒退热颗粒中连翘苷的含量

采用DiamonsiltmC18(4 6mm× 2 5 0mm ,5 μm)色谱柱 ;以乙腈 水 (2 0∶80 )为流动相 ,流速为 1mL/min ,柱温为 30℃ ,检测波长为 2 77nm ,以外标法用HPLC测定了感冒退热颗粒中连翘苷的含量。连翘苷在0 10 2 9～ 1 6 4 6 4 μg范围内呈线性关系 ,其在制剂中的平均回收率 (n =6 )为 99 5 5 %。     

HPLC法测定山茱萸环烯醚萜苷中莫诺苷的含量

使用HPLC测定山茱萸环烯醚萜苷中莫诺苷的含量。色谱柱为C18柱,流动相为甲醇-水（30：70）,流速0．8mL／min,检测波长240nm。本方法简单、灵敏、可靠。线性范围内莫诺苷的标准曲线呈良好的线性关系,平均加样回收率为98．0％,RSD为2．5％。     

尿囊素在肉苁蓉属植物分类中的应用

以尿囊素作为鉴别试剂,对肉苁蓉属中的管花肉苁蓉与同属的其它品种植物进行鉴别.采用HPLC法,在以下色谱条件下(Hypersil ODS-2色谱柱4.6 mm×250 mm,5 μm,流动相为乙腈-7.5%二氧六环水溶液1:99,流速0.5 mL/min,柱温25℃,检测波长224 nm)绘制肉苁蓉属植物不同品种的色谱图.在盐生肉苁蓉或荒漠肉苁蓉的HPLC色谱图中,与对照品尿囊素色谱峰相应的位置处,显示保留时间相同的色谱峰,而在管花肉苁蓉供试品的HPLC色谱图中,无尿囊素色谱峰,提示不含尿囊素的肉苁蓉为管花肉苁蓉.该鉴别方法简便、灵敏,能快速、准确地将管花肉苁蓉与同属其它品种植物鉴别开来.     

高聚物高效液相色谱柱分离分析嘧啶和核苷

建立了使用高聚物型色谱柱,反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定5种嘧啶和核苷的方法,样品经甲醇溶解,以p H为4.4的0.01 mol/L KH2PO4缓冲盐溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 m L/min,温度20℃,紫外检测波长251 nm。考察了流动相中不同因素对分离分析的影响,实现了5种嘧啶和核苷混合物的有效分离。柱效可达37 400 N/m,优于常规的C18-硅胶色谱柱(柱效为21 400 N/m),为该高聚物填料在嘧啶和核苷化合物检测方面的广泛应用提供了有关依据。     

HPLC-DAD对鱼腥草不同部位芦丁含量分析

[目的]利用HPLC-DAD对不同部位的鱼腥草根茎和叶中芦丁(Rutin)的含量进行分析。[方法]采用Agilent C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相:甲醇︰水(2%乙酸)42︰58;流速:1.0m L/min;检测波长:330nm;柱温:30℃。[结果]芦丁线性范围为0.05~1μg,相关系数R2=1,平均回收率98.4%,RSD为1.26%。[结论]该方法精密度、准确度高,稳定性好,简便、快速。可应用于医药行业。     

RP-HPLC法测定茜草中1,3,6-trihydroxy-2-methylanthraquinone-3-O-[3-O-acetyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside]的含量

首次采用反相高效液相色谱法测定茜草根中1,3,6-trihydroxy-2-methylanthraquinone-3-O-[3-O-acetyl-αL-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside]的含量.色谱柱为Purospher star RP C18色谱(250 mm×4.6mm,5 μm),流动相为甲醇:水:四氢呋喃(65:34.7:0.3),流速为1.0 mL/min,检测波长为276 nm,柱温为25℃.该方法的线性范围为0.020～0.160μg,r=0.9998,平均回收率为101.5%,RSD为2.0%(n=6).该方法测定1,3,6-trihydroxy-2-methylanthraquinone-3-O-[3-O-acetyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside]含量灵敏、准确、重现性好.     

藤黄灰链霉菌-H103发酵液中抗真菌活性成分的分离纯化

通过大孔树脂吸附等方法对藤黄灰链霉菌H103发酵液中的抗真菌活性成分进行了分离纯化,得到了纯度较高的活性物质的结晶,并且建立了通过大孔树脂吸附-结晶的分离纯化路线以及反相高压液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)的检测方法,为进一步的理化性状研究打下了一个良好的基础。实验表明,最佳吸附树脂为X-5树脂,洗脱剂为50%乙醇,HPLC条件为:反相色谱柱Agilent 20RBA×310SB-C18(150mm×4.6mm i.d,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱,0~4.0m in,V(A):V(B)=20∶80,4.0~9.5m in,V(A)∶V(B)=45∶55,此后V(A):V(B)=80∶20,流动相流速:0.8mL/m in,柱温:30℃,ELSD条件:漂移管温度115℃,载气流速(空气)2.3L/m in。     

用高效液相色谱法(HPLC)测定肌苷中有关物质和降解产物

用HPLC测定肌苷中有关物质和降解产物 ,与主药有良好的分离效果。色谱柱为HypersilC1 8(2 5 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,流动相甲醇 -水 (甲醇与水体积比为 10∶90 ) ,流速 1mL·min- 1 ,检测波长 2 4 8nm。     

快速制备液相色谱分离库拉索芦荟中10-羟基芦荟大黄素苷(英文)

采用快速制备液相色谱从库拉索芦荟中高效分离制备10-羟基芦荟大黄素苷A和B。以库拉索芦荟药材粉甲醇提取物为原料,采用快速制备液相色谱,EYELA柱(300 mm×20 mm i.d.,20~45μm),甲醇-水为流动相(35∶65,v/v)等度洗脱,流速10 mL/min,检测波长356 nm,对芦荟样品进行分离制备,得到2种化合物单体,经UV、旋光度、HRMS和NMR鉴定,HPLC测定纯度,2个化合物分别为10-羟基芦荟大黄素苷B(98.9%)和10-羟基芦荟大黄素苷A(98.2%)。该方法简便、快速,所得产物纯度较高,可用于对照品的制备和药理毒理活性研究。     

HPLC法测定3种老鹳草药材中没食子酸和柯里拉京的含量

目的：建立老鹳草、野老鹳草、牻牛儿苗中没食子酸、柯里拉京含量测定方法.方法：采用HPLC法,色谱条件：色谱柱为Diamonsil C18 （2）色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.1％磷酸梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为274 nm;柱温为25℃.结果：没食子酸和柯里拉京的线性范围分别是：0.2024μg～2.024 0 μg（r =0.999 6）、0.126 0 ～2.520 0μg（r =0.999 2）,平均回收率分别是97.4％（RSD=1.4％）、96.7％（RSD=0.9％）.结论：本法简便、准确、重复性好,可用于老鹳草药材的质量评价.