运动对小鼠肠道菌群的影响

目的 利用PCR-DGGE方法比较运动小鼠和正常小鼠肠道菌群的结构和数量变化,研究运动对肠道菌群的影响。方法 从5只正常Balb/c小鼠和5只运动C57BL/6J小鼠的粪便中提取细菌基因组总DNA,用聚合酶链式反应—变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）的方法获得小鼠肠道菌群分布图谱,对图谱进行相似性、多样性以及优势条带的序列分析。结果 PCR-DGGE结果图显示运动小鼠肠道菌群的多样性明显增加,优势菌群发生转变,序列分析表明变形菌门明显减少,厚壁菌门成为优势菌型。结论 运动会对小鼠肠道菌群产生影响。     

PCR-DGGE法分析大环内酯类抗生素对小鼠肠道菌群的影响

目的应用PCR-DGGE方法分析大环内酯类抗生素对BALB/c小鼠肠道菌群的影响。方法选用SPF级BALB/c小鼠24只,随机分为3组,每组8只,分别灌喂红霉素(330 mg/kg)、罗红霉素(50 mg/kg)、阿奇霉素(165 mg/kg)10 d,停药7 d。在实验的0、3、10 d以及停药7 d收集每只小鼠粪便,提取基因组DNA,应用PCR-DGGE技术获得肠道菌群分子指纹图谱,进行相似性、多样性分析及优势条带的序列分析。结果不同给药周期小鼠(BALB/c雌性)各聚成一簇,且灌喂大环内酯类抗生素的小鼠肠道菌群多样性指数减小。结论大环内酯类抗生素对BALB/c小鼠肠道菌群有显著影响。     

人参皂苷对 BALB/c 小鼠肠道菌群的影响

目的:随着人参药用和保健价值的不断发掘,人参皂苷引起人们越来越多的关注,但有关人参皂苷与肠道菌群之间相互作用的研究仍为空白领域,本实验旨在探明人参皂苷对小鼠肠道菌群的影响,以期为人参皂苷的推广应用提供理论基础和实验依据。方法:有机溶剂法提取人参皂苷,将正常BALB/c小鼠按2 mg/0.1 kg人参皂苷进行连续灌胃饲养,分别在灌胃第10 d和第13 d无菌收集小鼠粪便,提取肠道细菌基因组总DNA,应用PCR-DGGE技术获得肠道菌群分子指纹图谱,进行菌群结构相似性、多样性分析,并将感兴趣的优势条带进行切胶、测序分析,对获得的序列在Gene Bank数据库比对。结果:灌胃人参皂苷后小鼠肠道菌群结构发生改变,荧光假单胞菌和丁酸梭菌数量明显增加。结论:人参皂苷使小鼠肠道的菌群结构和数量发生明显改变,天然的人参皂苷口服很难被直接吸收利用,因此推测人参皂苷可能以肠道菌群作为发挥生物学作用的靶点,进而行使提高健康水平等保健功能。     

四氯化碳一过性处理对巴马香猪肠道菌群的影响

目的探讨四氯化碳（CCl4）一过性处理对巴马香猪肠道菌群的影响,评估CCl4诱导处理的肝损伤动物模型能否用于肠道微生态研究。方法选取3头雄性巴马香猪,一次性按每千克体重腹腔注射0.25 ml[0.25ml/（kg·bw）]40%CCl4橄榄油溶液。于注射12 h之后的第1、2、3、4、7和10天连续采集粪便,以注射CCl4溶液之前所采集粪便样作对照。分别提取粪样总DNA,采用变性梯度凝胶电泳技术（DGGE）对CCl4一过性处理后巴马香猪肠道菌群的多样性变化进行动态监测。结果PCR-DGGE法分析表明,巴马香猪肠道菌群组成在注射CCl4前后差异无显著性（P〉0.05）。相似性聚类分析结果表明,菌群组成在注射CCl4前后相似度在65%以上。结论CCl4一过性处理后巴马香猪肠道菌群组成未发生显著变化。表明CCl4处理诱导的肝损伤动物模型可以用来研究相关疾病与肠道菌群之间的关系。     

抗性淀粉对HFA小鼠肠道菌群的影响

目的 以人源菌群(HFA)小鼠为研究模型,观察抗性淀粉(RS)对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肠道菌群的多样性的影响.方法 将30只无菌小鼠接种健康人志愿者的粪便悬液构建HFA小鼠模型后,随机分成3组,一组喂养含20％的抗性淀粉的高脂饲料(RS组),一组喂养纯高脂饲料(CK组),一组喂养普通饲料(CONV组),取第0周和第8周的小鼠新鲜粪便,用PCR-DGGE分析3组小鼠的肠道菌群的相似性和多样性.结果 3组小鼠在第0周时肠道菌群多样性的相似度达到79％～87％,与人的肠道菌群相似性达到39％,说明构建HFA小鼠模型成功,第8周时,3组之间的均匀度(E)和Shannon指数差异无统计学意义(P＞0.05),而丰富度(S)在高脂组(CK)与普通饲料组(CONV)和抗性淀粉组(RS)之间差异都有统计学意义(P＜0.05),说明高脂饮食引起肠道菌群多样性增加,而抗性淀粉则能降低这种多样性.结论 抗性淀粉可以显著影响HFA小鼠的肠道菌群多样性.     

婴儿喂养方式的改变对肠道菌群多样性的影响

目的分析婴儿喂养方式的改变对肠道菌群的影响。方法招募45名(月龄1~3个月)志愿者,随机分为三组(母乳组:母乳喂养;对照组:干预后市售普通配方奶粉喂养;产品组:干预后试验配方奶粉喂养),利用平板计数和PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)技术分析婴儿干预前和干预后其肠道菌群的变化。结果饮食干预后,婴儿肠道内双歧杆菌的数量,母乳组和产品组比较差异无统计学意义(t=0.510,P=0.614),产品组和对照组比较差异存在统计学意义(t=2.541,P=0.016);婴儿肠道内微生物的多样性指数,母乳组和产品组都显著增高(P≤0.05)。结论产品组配方奶粉是一款利于婴幼儿肠道有益菌增殖的产品。     

急性心肌梗死患者肠道菌群多样性分析

目的 初步探究急性心肌梗死患者肠道菌群的多样性。方法 选择2015年6月至2016年3月于大连大学附属中山医院住院治疗的急性心肌梗死患者作为观察组,年龄51~70岁。选择同期经冠脉造影排除冠心病的住院患者为对照组,年龄51~70岁。排除近1个月内发生感染、炎性肠病及应用抗生素的患者。所有患者按性别与年龄分为A、B、C、D组。直接从患者粪便标本中提取细菌总DNA,PCR扩增后进行梯度凝胶电泳（DGGE）分析。结果 DGGE分析显示急性心梗患者肠道菌群丰度均较对照组下降。A组中观察组与对照组患者电泳条带数为(33.71±4.39) vs (38.71±2.56),t=－2.058,P=0.040;C组患者为(31.14±2.67) vs (35.29±3.55),t=－2.005,P=0.045;差异均具有统计学意义。B与D组中心梗患者肠道菌群丰度亦有下降趋势,但与对照组比差异无统计学意义。UPGAM法聚类分析显示除D组外,各组中观察组与对照组患者肠道菌群呈现分离现象;急性心梗患者肠道菌群有较高相似性,与非冠心病患者肠道菌群差异明显。结论 急性心梗与非冠心病患者肠道菌群存在差异,急性心梗患者肠道菌群多样性较低。肠道菌群改变可能与急性心肌梗死存在一定相关性。     

小檗碱对大鼠肠道菌群结构的体外影响

目的研究小檗碱在体外对高脂饮食诱导的肥胖、胰岛素抵抗大鼠(HFD)肠道菌群和正常饮食对照大鼠(NCD)肠道菌群结构的体外影响。方法采用体外厌氧培养、PCR-DGGE和454焦磷酸测序技术研究小檗碱对肠道菌群结构和多样性的影响。结果 DGGE指纹图谱和454焦磷酸测序结果都表明,小檗碱可以改变肠道菌群的结构,高剂量的小檗碱可以减少肠道微生物的多样性。应用偏最小二乘法判别模型分析(PLS-DA)挑选与小檗碱相关的细菌类群(OTU),在HFD组中挑选了55个关键OTUs,其中53个被明显抑制或消除,剩余2个分别属于Proteus和Escherichia/Shigella属的OTUs则被小檗碱富集。在NCD组中挑选的51个关键OTUs中,32个被小檗碱抑制,17个被小檗碱富集。被富集的除了属于Klebsielal属的OTU外,还包括可以产生短链脂肪酸的Lactobacillus、Blautia属的OTUs。结论小檗碱可以直接调节肠道菌群的结构,对不同结构的肠道菌群其作用也不相同,不同浓度的小檗碱对肠道菌群的影响有较大差异。高浓度的小檗碱可以抑制大部分细菌的生长(其中有很多为肠道条件致病菌),减少肠道微生物的多样性,富集Enterobacteriaceae科的细菌(Proteus、Escherichia/Shigella、Klebsielal)。相较于HFD组,小檗碱可以显著富集NCD组大鼠肠道菌群中的短链脂肪酸产生菌。     

西芹提取液对高脂小鼠肠道菌群平衡的影响

目的应用PCR-DGGE技术评价西芹对昆明小鼠肠道菌群平衡的影响。方法给予小鼠高脂饲料,复制高脂模型,模型复制成功后,每日给予小鼠西芹提取液灌胃,连续28 d。分别在实验的0、14和42 d,收集每只小鼠粪便,提取基因组DNA,应用PCR-DGGE(聚合酶链式反应——变性梯度凝胶电泳)技术获得肠道菌群分子指纹图谱,针对相似性、多样性分析及优势条带的序列进行分析。结果高脂饲料喂养后肠道益生菌约氏乳杆菌等趋近消失,出现了特异菌真杆菌,而西芹灌胃组和食用基础饲料组真杆菌数量显著减少,且西芹灌胃组作用大于食用基础饲料自然恢复组。结论西芹对高脂小鼠肠道菌群的平衡有显著的恢复作用。     

大肠手术前肠道准备对肠道菌群的影响

通过对２６例大肠手术术前肠道准备病人的观察,术前肠道准备能明显减少肠道细菌的数量,同时肠道菌群也随之发生不同程度的变化,它提示大肠术前肠道准备可减少大肠手术合并症,同时对肠道菌群造成一定的影响。     

Identification of plasmalogen in the gut of silkworm (Bombyx mori)

Herbivorous insect species are constantly challenged with endogenous and exogenous oxidative stress. Consequently, they possess an array of antioxidant enzymes and small molecular weight antioxidants. Lipid-soluble small molecular antioxidants, such as tocopherols, have not been well studied in insects but may play important antioxidant roles. In this study, we identified plasmalogen phosphatidylethanolamines (pPEs) as well as α-, β/γ-, δ-tocopherol in the larvae of the silkworm Bombyx mori by LCMS analyses and examined their distribution. Plasmalogen are reported to inhibit the metal ion induced oxidation. The composition of tocopherols was the same among gut contents, gut tissues, and the other tissues. However, plasmalogens, a unique class of glycerophospholipids rich in polyunsaturated fatty acids and containing a vinyl ether bond at the sn-1 position, were mainly distributed in gut tissues. Plasmalogens might protect gut tissues from oxidation stress.     

F污染桑叶对家蚕繁殖力的影响

对不同抗Ｆ性蚕品种的幼虫短期添食梯度浓度ＮａＦ研究Ｆ对桑蚕生殖的影响,结果表明,只要个体能正常羽化产卵,Ｆ对怀卵数、产卵数、产卵率和孵化率都无明显影响,低浓度的Ｆ对强抗Ｆ性品种蚕的生殖似有促进作用;但５龄期添食高浓度的Ｆ可引起怀卵数、产卵数和孵化率下降;Ｆ主要港集在马氏管、中肠等组织中,蚕卵中Ｆ的含量极低     

Patchwork-structure serpins from silkworm (Bombyx mori) larval hemolymph.

A new serpin (serine proteinase inhibitor), having antichymotryptic activity, was isolated from silkworm, Bombyx mori, larval hemolymph and was named silkworm antichymotrypsin II (sw-AchyII). Amino-acid-sequence analysis of sw-AchyII revealed that it consisted of 375 amino acids without cysteine or glycosylated residues. sw-AchyII formed an SDS-undissociable complex with alpha-chymotrypsin, but this complex was broken down at pH 12.5 into alpha-chymotrypsin and sw-AchyII in which the reactive site was cleaved. Amino-acid-sequence analysis after cleavage identified in P1-P1' residue at the reactive site of sw-AchyII as Phe340-Met341. The amino acid sequence from the amino terminus to residue 336 was completely identical to the corresponding region of sw-AT [Takagi, H., Narumi, H., Nakamura, K. & Sasaki, T. (1990) J. Biochem. (Tokyo) 108, 372-378]. The degree of similarity between sw-AchyII and silkworm antitrypsin (sw-AT) from residue 337 to the carboxy terminus was only 46%. Reactive sites of both serpins were in the variable regions.     

家蚕氨酰-tRNA合成酶基因分析

为了探讨家蚕氨酰-tRNA合成酶(BmaaRS)基因的数目、种类、结构及起源, 利用家蚕基因组数据和EST数据进行了BmaaRS基因的电子克隆, 结果表明, 家蚕核基因组中含有2套不同的aaRS核基因, 分别编码线粒体和细胞质BmaaRS, 但编码线粒体BmSerRS的基因有2个, 可能缺少编码细胞质的BmHisRS基因和编码线粒体的BmGlnRS、BmLysRS、BmGlyRS和BmThrRS基因, 这些基因的功能可能由具有相似功能的其他蛋白完成, 或通过某个BmaaRS基因的可变剪接分别形成不同功能的BmaaRS。EST证据表明, BmaaRS基因存在不同形式的可变剪接; BmaaRS氨基酸序列的相似性及二、三级结构分析表明部分BmaaRS存在结构域的扩增, 有些不同的BmaaRS具有相同结构域, 相同功能的BmaaRS具有相似的三级结构; 进化分析表明, BmaaRS为2套不同来源的BmaaRS基因编码, 细胞质和线粒体BmaaRS的起源不同。     

Characterization of a novel silkworm (Bombyx mori) phenol UDP-glucosyltransferase.

Sugar conjugation is a major pathway for the inactivation and excretion of both endogenous and exogenous compounds. We report here the molecular cloning and functional characterization of a phenol UDP-glucosyltransferase (UGT) from the silkworm, Bombyx mori, which was named BmUGT1. The complete cDNA clone is 1.6 kb, and the gene is expressed in several tissues of fifth-instar larvae, including fat body, midgut, integument, testis, silk gland and haemocytes. The predicted protein comprises 520 amino acids and has approximately 30% overall amino-acid identity with other members of the UGT family. The most conserved region of the protein is the C-terminal half, which has been implicated in binding the UDP-sugar. BmUGT1 was expressed in insect cells using the baculovirus expression system, and a range of compounds belonging to diverse chemical groups were assessed as potential substrates for the enzyme. The expressed enzyme had a wide substrate specificity, showing activity with flavonoids, coumarins, terpenoids and simple phenols. These results support a role for the enzyme in detoxication processes, such as minimizing the harmful effects of ingested plant allelochemicals. This work represents the first instance where an insect ugt gene has been associated with a specific enzyme activity.     

家蚕AFLP连锁框架图谱的构建

利用改进的AFLP分子标记方法,对家蚕Bombyx mori回交一代BC1群体进行连锁图谱的构建。经17组AFLP引物的选择性扩增,共得到430个多态位点,卡方检验后有253个为有效位点。利用Mapmaker/Exp (Version 3.0b)软件作连锁分析,其中163个标记分属28个连锁群,连锁群标记数变化范围是2～28个,平均每个连锁群标记数为5.8个,该图覆盖的基因组长度为2.998.9cM(图距单位),连锁群长度变化范围为4.5～652.8 cM,连锁群的平均长度为107.1 cM,平均图距为4.5～36.7 cM。     

Effect of temperature and relative humidity on spinning behaviour of silkworm (Bombyx mori.L)

The rate of spinning of silkworm larva (Bombyx mori.L) was slow at 22 degrees C and fast at 38 degrees C. The time taken for completion of cocoon was longest at 98 +/- 2% and least at 40 +/- 2% RH. However, good quality cocoons were spun at 22 degrees C and 65 +/- 5% RH, hence it would be advantageous to maintain this temperature and relative humidity at the time of cocoon spinning in the case of CB race of silkworm.