同种异体巩膜瓣移植治疗角膜溃疡

角膜溃疡是眼科的常见病,多发病,可发生于任何年龄,目前临床上多采取保守治疗为主,疗效欠佳。我院从1998年始采用同种异体巩膜瓣移植治疗角膜溃疡52例,疗效满意。现报告如下。     

同种异体移植炎性因子-1：一种多功能的炎性蛋白质

同种异体移植炎性因子-1（allograft inflamuatory factor-1,AIF-1）是由143个氨基酸组成的小分子蛋白质,链内含有一个可与Ca^2＋结合的EF-手形结构域。AIF-1最初发现于同种大鼠的异体移植心脏。AIF-1被证明与机体的免疫应答、血管病变及生殖功能紧密相关,并能调节细胞的增殖及迁移,是一种多功能的炎症蛋白质。     

肿瘤坏死因子的研究进展

<正>肿瘤坏死因子(TNF或TNF-α)的研究进展日新月异,与数年前相比可谓面目一新,当初仅了解TNF的抗肿瘤活性,但后来发现TNF对多种正常细胞具有广泛的生物学活性。其生物学活性不仅与结构类似,结合同一种受体的淋巴毒素(LT或TNF-β)相近,且与结构迥异、结合不同细胞受体的白细胞介素1(IL-1)具有广泛的功能重叠性。 TNF及其分泌调节 TNF由分子量17kd的亚单位构成,依动物种类及分离方法的不同,可为2聚体,3聚体或4聚体,还不清楚多聚体是否为体现生物学活性所必需。人TNF为非糖基化蛋白,而几乎所有动物的TNF都为糖蛋白。 小鼠TNF分子由156个氨酸残基构成。家兔TNF在N端缺2残基,为154个残基。而人TNF由于在第73位插入一组氨酸,由157个氨酸残基构成。     

同种异体骨移植治疗大段骨缺损的研究进展

同种异体骨已成为临床上治疗创伤、感染、先天性骨病及肿瘤切除所致的大段骨缺损的重要材料.本文主要从同种异体骨愈合机制、制备保存、临床应用效果、排斥反应及预防方法四个方面就同种异体骨移植治疗大段骨缺损的研究进展作一综述,为临床骨缺损治疗提供理论支持.     

同种异体半关节移植治疗下肢关节端骨肿瘤

目的:探讨分析同种异体半关节移植治疗下肢关节端骨肿瘤的疗效.方法:对23例下肢累及关节端骨肿瘤,术前根据X线、CT或MRI测量肿瘤的长短和范围,选取匹配的异体半关节及固定材料,行关节端骨肿瘤切除及同种异体半关节移植修复骨缺损术,术后X线评定骨愈合,并评估其功能恢复情况.结果:手术后6～9个月在X线片显示移植骨与正常骨组织结合部间隙消失,或间隙模糊且有足够骨痂形成,可放弃支具独立行走;术后约10～12月取出内固定材料,约14月后功能活动逐渐恢复正常.结论:同种异体半关节移植治疗下肢关节端骨肿瘤切除后骨缺损是一种切实可行的有效方法.     

肿瘤坏死因子及其抑制剂

寄生虫、细菌以及病毒感染和肿瘤疾患均严重影响患者的新陈代谢,损害患者体内自动调节机制。这种由外界刺激引起的体内生化反应,大多是受寄主分泌的细胞因子调控的。细胞因子是一类具有多种生理活性的蛋白质。１．肿瘤坏死因子及其作用肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）是一类重要...     

利用带有原核增强子样序列的新型载体在大肠杆菌中高效表达人α肿瘤坏死因子

将去除信号肽的人肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)cDNA插入到带有原核增强子样序列Px的新型表达载体pBV320中,使TNF cDNA 5′端直接置于大肠杆菌trp启动子下游,采用37℃恒温培养,使TNF在大肠杆菌中获得了高效表达,表达活性达1.35(±0.17)×10~6U/L菌液。表达的TNF-α对L929细胞的毒性作用可被抗人肿瘤坏死因子-α的单克隆抗体所中和。表达菌裂解液作SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,显示有一条分子量与TNF分子量吻合、约为17000道尔顿的蛋白带。利用DEAE-Sepharose阴离子交换层析及Sephacryl S-200凝胶过滤对上述重组人TNF-α进行纯化,获得电泳纯产品,比活性为1.48×10~6U/mg。     

以杆状病毒为载体表达可溶性55kD人肿瘤坏死因子受体

从培养的HeLa细胞中提取总RNA,通过反转录PCR技术, 从该总RNA中扩增了约530 bp的shTNFR55基因的cDNA,将cDNA克隆至转移载体pAcGp67B的多角 体蛋白基因启动子的下游与转移载体构建成重组转移质粒pAcTNFR。pAcTNFR与杆状病毒AcNP V的DNA共转染昆虫细胞sf9,通过同源重组形成含有shTNFR55基因的重组病毒。经空斑分析 和DNA斑点杂交获得了纯化的重组病毒AcNPVTNFR。采用肿瘤坏死因子(TNF)敏感的L929细 胞检测表达产物的生物学活性。结果表明表达产物可以中和TNF对L929的细胞毒性。蛋白配 基印迹(Ligand blot)分析表明表达产物分子量约在20～25kD之间,有三条带。     

肿瘤坏死因子介导病理性氧供应依赖性的实验研究

本研究采用抗肿瘤坏死因子单克隆抗体预先保护实验动物,用ＥＬＩＳＡ法测定血浆中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）浓度,藉以考察ＴＮＦ在内毒素诱导病理性氧供应依赖性（ＰＯＳＤ）模型中是否起介导作用。结果表明,（１）ＴＮＦ浓度内毒素组显著高于对照组,抗体保护组显著低于无关抗体组（Ｐ＜０．０１）。（２）在Ｖｏ＿２－Ｄｏ＿２关系中,抗体保护组可清楚地分为依赖段和非依赖段两部分,其临界氧运输量和合并氧提取率分别为１０．８０±３２１ｍｌ·ｍｉｎ￣（－１）·ｋｇ￣（－１）和０．６９０,而无关抗体组则只有依赖段,合并氧提取率为０．４０８,显著低于抗体保护组。从而证明,ＴＮＦ在内毒素所致的ＰＯＳＤ现象中起介导作用。     

磷脂酶A2介导肿瘤坏死因子诱发的中性粒细胞趋化和粘附增强

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对外周中性粒细胞（ＰＭＮ）具有重要调节作用。本文采用生化及放射免疫技术,观察体外重组ＴＮＦ对ＰＭＮ趋化、粘附及血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）和前列环素（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ）释放的改变。ＴＮＦ（１００ｍｇ／ｍｌ）处理６０ｍｉｎ后,ＰＭＭ对白细胞趋化因子（ＦＭＬＰ）趋化和玻璃珠粘附性均显著增加,同时伴有ＴＸＢ２释放增多,６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ不变。这提示ＴＮＦ体外促ＰＭＭ趋化和粘     

SENSITIVITY OF DAUDI CELLS TO TUMOR NECROSIS FACTOR ALPHA: EARLY CHANGES IN POLYPHOSPHOINOSITIDE METABOLISM

The effects of recombinant Tumor Necrosis Factor α (r-TNF α) on polyphosphoinositide metabolism were examined in a Burkitt Lymphoma cell line (Daudi cells). After 1h of in vitro treatment with r-TNF α, the incorporation of³²Pi into phosphatidylinositol 4,5-phosphate (PtdInsP₂), phosphatidylinositol 4-phosphate (PtdInsP) and phosphatidylinositol (PtdIns) was reduced compared with controls, confirming previous findings observed in other cell lines of a specific PtdIns breakdown following r-TNF α treatment. The novelty of this study is therefore the demonstration of early changes in polyphosphoinositide metabolism during the antiproliferative response elicited by this cytokine in Daudi cells.     

细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞(bovine aortic endothelial cells, BAECs)凋亡的影响.方法在原代培养的BAECs中,分别转染构建在腺相关病毒载体内的细胞色素P450表氧化酶基因2J2,2C11,F87V两周后,用肿瘤坏死因子(TNF-α)(10ng/ml)和放线菌素D(ActD)(5ng/ml)诱导内皮细胞凋亡,通过细胞形态学和流式细胞计数观察其凋亡变化,同时采用Western blot分析检测Bcl-2和P38和丝裂原激动蛋白激酶ERK的表达水平.结果与对照相比,转染细胞色素P450表氧化酶基因后BAECs 凋亡细胞数减少,Bcl-2表达增加, P38表达减低, ERK的磷酸化水平增加.结论细胞色素P450表氧化酶能明显的抑制肿瘤坏死因子诱导的BAECs凋亡,并可能通过上调Bcl-2、下调P38的表达水平和通过增加ERK的磷酸化水平发挥抗凋亡作用.     

东北七鳃鳗TRAF6基因克隆、表达分析及亚细胞定位研究

为研究TRAF6在TLR信号介导的先天免疫中的调控作用, 研究通过克隆技术获得了东北七鳃鳗(Lethenteron morii)TRAF6基因的cDNA全长, 命名为LmTRAF6。利用实时荧光定量方法(qPCR)分析了LmTRAF6在幼鱼和成鱼中各组织的表达情况以及在铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)感染后脂肪体、鳃、肠和肾组织在不同时间点的表达量变化。利用双酶切技术构建pEGFP-TRAF6重组质粒并转染HEK293T细胞, 48h后进行荧光观察并拍照。结果表明, LmTRAF6的cDNA全长为2751 bp, 开放阅读框(ORF)为1785 bp, 编码594个氨基酸。其蛋白结构域高度保守, 具有RING结构、两个锌指结构、环-环(Coiled-coil)α螺旋结构域和MATH结构域。通过系统进化树分析, 发现LmTRAF6与哺乳类以及鱼类TRAF6的亲缘关系较近, 与果蝇、中国对虾TRAF6的亲缘关系较远。qPCR结果显示, LmTRAF6在各组织中均有表达, 在幼鱼的心脏、皮肤、鳃、肝中的表达量相对较高, 而在肠中表达量相对较低。在成鱼的肾、鳃、肌肉中的表达量相对较高, 而在心脏中表达量相对较低。成鱼LmTRAF6在铜绿假单胞菌感染后, 鳃、肠和肾的表达量在24h达到峰值。细胞定位显示, LmTRAF6在HEK293T的细胞质和细胞核中均有表达。以上结果为进一步探究七鳃鳗中TRAF6在TLR信号通路中的作用奠定了理论基础。     

肿瘤坏死因子相关凋亡受体(TRAIL)cDNA的克隆及高效表达

为了得到人TRAILcDNA并克隆到pGEM-Tvector。利用PCR技术获得目的基因片段 ,通过原核表载体pBV220构建人TRAIL表达质粒。将所得表达质粒转化宿主菌DH5α ,培养至OD60 0 值到达 0 6时 42℃诱导表达 ,并通过SDS PAGE分析表达结果。经凝胶薄层扫描 ,对pBV TRAILD DH5α工程菌热诱导 5h ,TRAIL衍生物蛋白的表达量最高约占菌体可溶性总蛋白的 31 %。人TRAIL基因 ,通过pBV2 2 0原核表达载体可在大肠杆菌中获得高效表达。     

冷冻对视网膜色素上皮细胞分泌肝细胞生长因子的影响

本研究观察冷冻处理后的人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium cells,hRPE)在体外培养和体内玻璃体环境中分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)水平的变化,调查变化后的玻璃体对正常RPE细胞的促增生作用。体外培养的RPE细胞在-80℃下进行冷冻,冷冻时间分为0s、15s和60s,随后继续体外培养和注入正常兔眼玻璃体,冷冻后的第3d和6d收集细胞培养液和玻璃体样本,ELISA法测定hHGF含量;进一步,用MTT法测定正常RPE细胞加入玻璃体样本后的生长状态。结果显示冷冻刺激RPE细胞hHGF的分泌增多,并可促进RPE细胞增生。     

不同转移潜能肿瘤细胞肝素酶的表达

目的研究肝素酶(Heparanase,Hpa)表达水平与人类肿瘤转移的相关性。方法利用半定量RT-PCR、免疫组织化学(S-P法)和Westernblot检测2组4种不同转移潜能的人类肿瘤细胞系中HpamRNA和蛋白的表达水平。结果HpamRNA和蛋白相对表达量在高转移潜能人类肺癌细胞(0·757±0·033,0·670±0·020)、乳腺癌细胞(0·617±0·024,0·661±0·013)中明显高于相应的低转移潜能肺癌细胞(0·518±0·012,0·406±0·012)、乳腺癌细胞(0·170±0·016,0·227±0·011)。结论在所研究的人类肿瘤中,HpamRNA和蛋白的表达水平与肿瘤的转移能力呈正相关。