白藜芦醇对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的：研究白藜芦醇体外活性,确定它的植物雌激素作用。方法：采用MTT法观察不同浓度白藜芦醇对MCF-7细胞增殖作用的影响。采用DNA ladder法和荧光显微镜观察高浓度白藜芦醇对细胞的影响。免疫组化法观察低浓度白藜芦醇对核增殖抗原PCNA表达的影响。结果：MTT结果显示白藜芦醇高浓度抑制MCF-7细胞增殖,IC50为8.70×10-5mol/L;低浓度（10-7~10-6mol/L）则对细胞有促增殖作用,最高促增殖浓度为1.0×10-7mol/L。DNA ladder和荧光显微镜可观察到高浓度白藜芦醇作用后细胞典型的凋亡形态。免疫组化结果显示低浓度白藜芦醇作用后,细胞核内PCNA表达明显增加（P〈0.05）。结论：高、低浓度的白藜芦醇对MCF-7细胞分别表现为诱导凋亡和促增殖作用,呈现出植物雌激素对MCF-7细胞典型的双向调节作用。     

色胺酮对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨色胺酮(Tryptanthrin,Try)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法:利用MTT方法检测Try(1.56-100μmol/L)对细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞的形态学改变;流式细胞术检测细胞周期、凋亡情况及线粒体跨膜电位等指标。结果:MTT结果显示,Try在12.5-100μmol/L浓度范围内能明显抑制MCF-7细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性;透射电镜下可见Try作用48h后,MCF-7细胞有典型的凋亡样改变。Annexin V-FITC与PI双染,流式细胞仪检测结果显示:50、100μmol/LTry作用后,细胞的凋亡情况明显,与对照组相比差异显著;且影响了MCF-7的细胞周期分布,将细胞阻滞于G1期,抑制其DNA的合成;并导致细胞线粒体跨膜电位下降。结论:色胺酮能明显抑制MCF-7细胞增殖并具有诱导细胞发生凋亡的作用。     

槟榔碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察槟榔碱对人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度（0、10、30、50、100、300、500μmol/L）槟榔碱对MCF-7细胞增殖的影响,Hoechst 33342染色和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax,Bcl-2和P53蛋白表达。结果：低浓度（0、10、30、50μmol/L）槟榔碱不影响细胞的增殖和凋亡;而高浓度（100、300、500 μmol/L）槟榔碱呈浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖、诱导MCF-7细胞凋亡、提高P53和Bax蛋白表达、降低Bcl-2蛋白表达。结论：高浓度槟榔碱抑制MCF-7细胞增殖、诱导凋亡,其机制可能与提高P53和Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达有关。     

二甲基胂酸抑制胃癌细胞增殖的研究

目的:探讨二甲基胂酸(DMAA)对SGC7901胃癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制.方法:依次用5,10,15,20,25,30mmol/L二甲基胂酸处理培养的SGC7901胃癌细胞24 hrs,在5 mmol/L和10 mmol/L的浓度下分别处理6,12,18.24,30,36,42,48hrs,用MTT计数法测定DMAA对肿瘤细胞增殖的抑制率,用激光共聚焦显微镜检测细胞形态变化以及用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡.结果:DMAA在不同浓度下对肿瘤细胞的抑制作用呈现典型的双曲线,即随着浓度的增加DMAA对胃癌细胞的抑制率不断增加并逐渐趋于稳定;在形态学上DMAA在低浓度下引起胃癌细胞的胞膜出泡、核固缩、染色体断裂和凋亡小体等典型的细胞凋亡的变化,而在高浓度下主要引起细胞坏死;DNA凝胶电泳结果显示,在低浓度DMAA作用下胃癌细胞DNA呈现细胞凋亡的梯状带型,而在高浓度下梯状带型则消失.结论:DMAA抑制胃癌细胞的增殖,其在低浓度时能有效诱导胃癌SGC 7901细胞凋亡,而在高浓度时使胃癌细胞坏死而死亡.     

氯化钴对小鼠NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察氯化钴(Cocl2)对体外培养的小鼠NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响.方法:首先利用MTT法和流式细胞术检测不同浓度Cocl2对小鼠NIH3T3细胞增殖及凋亡的影响.然后利用免疫印迹检测HIF-1α和凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达.结果:(1)MTT结果显示,低于250μ mol/L的Cocl2作用NIH3T3细胞24 h对细胞的增殖活力影响不大,当浓度增加到500μ mol/L以上时会明显抑制细胞的增殖活力.(2)流式细胞仪检测结果显示低浓度Cocl2(≤ 250μ mol/L)并不会引起NIH3T3细胞明显的凋亡和坏死,增加浓度(≥500μmol/L)会导致细胞早期凋亡和坏死增加.3)不同浓度Cocl2作用NIH3T3细胞24 h均可诱导细胞中HIF-1α表达上调,同时Bax/Bcl-2的比值增高.结论:高浓度Cocl2可以抑制小鼠NIH3T3细胞增殖,促进凋亡发生.     

Surfactin对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及细胞骨架的影响

以体外培养的人乳腺癌细胞株MCF-7为研究对象,探讨surfactin对肿瘤细胞增殖、凋亡及细胞骨架的影响。MTT实验表明,surfactin能抑制MCF-7的增殖,并且呈现出浓度和时间的依赖关系,作用48h时的IC50是27.3μmol/L。AO/EB荧光染色法及流式细胞术检测发现,surfactin可诱导MCF-7发生典型的凋亡形态学改变和G2/M期阻滞。免疫荧光和免疫印迹结果表明,surfactin显著抑制了细胞内vimentin的表达,诱导了α-tubulin的解聚和重排,使细胞的骨架系统发生了剧烈的变化。可见,surfactin具有抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞骨架蛋白的表达水平有关。     

板栗总苞总黄酮对三种不同肿瘤细胞的抑制作用

探讨板栗总苞总黄酮对MG-63、MCF-7、SMMC-7721三种不同肿瘤细胞的抑制作用。分别培养人骨肉瘤MG-63细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌SMMC-7721细胞,加入不同浓度板栗总苞总黄酮,并分别设置不含药物的对照组。采用倒置相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法测定药物对细胞增殖的影响,荧光显微镜观察细胞凋亡状态,RT-PCR检测Bcl-2、Caspase-3、P21 mRNA表达。结果提示,三种肿瘤细胞在药物作用后,增殖均受明显抑制,并呈现凋亡形态改变;其24 h后半数抑制浓度(IC50)分别305.58、739.22、4499.44μg/m L,48 h的IC50分别为:147.18、254.42、488.40μg/m L;荧光显微镜观察染色后细胞呈现不同程度的凋亡,并以晚期凋亡为主;RT-PCR结果提示各细胞实验组Caspase-3和P21 mRNA表达明显上调、Bcl-2表达明显下调。上述改变中,MG-63细胞改变最明显,其次为MCF-7细胞,改变最弱的为SMMC-7721。板栗总苞总黄酮能明显抑制MG-63、MCF-7、SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,其药效作用为MG-63MCF-7SMMC-7721。     

腺病毒载体AdING4 对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制及化疗增敏作用

目的:研究腺病毒载体AdING4对人MCF-7乳腺癌细胞的生长抑制及化疗增敏作用。方法:将搭载有ING-4基因的重组腺病毒载体AdING4感染人MCF-7乳腺癌细胞,用荧光显微镜观察感染后的MCF-7细胞形态学变化;RT-PCR和Western-Blot法检测ING-4基因在MCF-7细胞中的转录和表达;RT-PCR法检测凋亡相关基因在MCF-7细胞中的表达;CCK法测定Ad-ING4感染MCF-7乳腺癌细胞后所发挥的细胞增殖抑制作用。流式细胞技术检测ING-4对MCF-7乳腺癌细胞的促凋亡作用。CCK-8法分别测定病毒感染前后的MCF-7乳腺癌细胞的药物半数抑制浓度IC50,并观察Ad-ING4与化疗药物合用后对MCF-7细胞增殖抑制和化疗增敏现象。结果:MCF-7细胞在转染ING-4基因后,明显出现变圆、脱落、皱缩、聚集等现象;外源性ING-4基因在MCF-7细胞中获得成功表达;外源性ING-4基因作用下MCF-7细胞的增殖受到了明显抑制,凋亡率有所升高,凋亡相关基因Bax的表达水平明显上调,Bcl-2、Survivin的表达水平明显下调。ING-4基因感染MCF-7细胞后,使MCF-7细胞对相关化疗药物的敏感度更高;ING-4基因与化疗药物合用后对MCF-7细胞的增殖抑制作用,较之单用化疗药物更为明显。结论:MCF-7细胞在转染ING4基因后其增殖受到了明显抑制并更易凋亡,该现象可能是通过改变Bax,Bcl-2及Survivin表达水平来实现的,且对化疗药物的敏感性更高。     

烟管头草粗提物体外抗前列腺增生活性及机制研究

研究民族药烟管头草粗提物对体外前列腺增生(BPH1)细胞增殖的影响及对前列腺增生细胞生长的调控机制。荧光倒置显微镜观察实验组细胞数量与状态明显改变,且有凋亡小体出现现象; MTT法检测烟管头草粗提物对前列腺增殖细胞增殖作用实验表明,粗提物对BPH1细胞有很好抑制作用; Transwell侵袭实验表明细胞侵袭潜能随药物浓度增大而降低;细胞凋亡-Heston染色试剂检测粗提物对细胞凋亡的影响,表明粗提物与诱导细胞凋亡相关;细胞凋亡-DNA ladder抽提试剂盒检测DNA变化实验证实细胞经药物作用呈现典型的梯状条带;分子生物学实验进一步证明,细胞凋亡可能与Wnt信号通路的基因表达有关。     

大豆异黄酮激活PPARγ抑制人乳腺癌MCF-7 细胞增殖

目的:探讨两种大豆异黄酮主要成分染料木黄酮(genistein,GEN)和大豆苷元(daidzein,DAI)抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用与过氧化物酶体增殖激活物受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)信号途径的关系。方法:采用免疫细胞化学染色方法观察MCF-7细胞的PPARγ表达情况,PPARγ介导的荧光素酶报告基因检测大豆异黄酮和PPARγ配体罗格列酮(rosiglitazone,ROS)对MCF-7细胞PPARγ的激活作用,MCF-7细胞分别经8×10-5mol/L GEN、DAI和1×10-5mol/L的ROS单独或联合1×10-5mol/L的PPARγ特异性抑制剂GW9662联合处理24、48和72 h后,用CCK-8法检测细胞增殖。结果:MCF-7细胞存在有PPARγ表达,GEN、DAI呈剂量依赖性增强报告基因荧光素酶活性,且这种作用可被GW9662明显阻断;GEN、DAI和ROS呈时间依赖性明显抑制MCF-7细胞增殖(P<0.05),而GW9662可以显著削弱GEN、DAI和ROS对MCF-7细胞的增殖抑制作用(P<0.05)。结论:大豆异黄酮可通过激活乳腺癌MCF-7细胞的PPARγ信号途径抑制其增殖。     

MDM2反义寡核苷酸联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞株的作用

目的:探讨靶向MDM2反义寡核苷酸(ASON)联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞株的影响。方法:合成一段与MDM2 mRNA特异性结合的反义寡核苷酸和与反义寡核苷酸有4个碱基不同的的错义寡核苷酸(MON),脂质体2000介导不同浓度的MDM2ASON转染MCF-7乳腺癌细胞系,转染的乳腺癌细胞通过1μmol/L紫杉醇药物处理后,采用RT-PCR和Western Blot方法检测MDM2 ASON联合紫杉醇的协同作用及对乳腺癌MCF-7细胞株的抑制效率,MTT观察给药后MCF-7细胞的增殖能力和药物敏感性。结果:MDM2反义寡核苷酸联合紫杉醇明显下调MDM2 mRNA及MDM2蛋白表达水平,抑制MCF-7细胞的生长,随着MDM2 ASON浓度的增加,MDM2表达越来越低,协同作用越来越强,呈剂量依赖关系,A500联合紫杉醇的协同作用最明显,MTT显示紫杉醇处理的转染MCF-7细胞增殖抑制率明显增高,A500抑制增殖作用最明显,抑制率达(13.0±0.84)%。结论:不同浓度MDM2 ASON转染后的乳腺癌MCF-7细胞,等浓度紫杉醇处理后,乳腺癌MCF-7细胞MDM2表达明显降低,细胞凋亡增加,,MDM2 ASON联合紫杉醇对MCF-7细胞有协同作用,提高了乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇的药物敏感性。     

Sprouty2蛋白与人乳腺癌MCF-7细胞增殖与迁徙的关系

目的：探讨Sprouty2蛋白与人乳腺癌MCF-7细胞增殖与迁徙的关系。方法：通过siRNA技术干扰MCF-7细胞sprouty2基因的表达,通过qPCR,细胞免疫荧光和westernblotting检测sprouty2基因的干扰效果,MTT检测细胞增殖活力,划痕实验观察细胞迁徙能力,westernblotting检测MMP-2,MMP-9和MMP-13的表达。结果：qPCR,细胞免疫荧光和westernblotting检测sprouty2基因,发现sprouty2基因的下调很明显,MTT实验发现siRNASprouty2基因后的MCF-7细胞比对照组细胞活力明显提高,沉默组细胞的迁徙能力也明显强于对照组,且沉默sprouty2基因的MCF-7细胞,MMP-2,MMP-9和MMP-13蛋白相对对照组均上调。结论：sprouty2基因下调后,MCF-7细胞的细胞活力和迁徙能力明显提高。     

RNA结合蛋白QKI-5对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响研究

目的:检测RNA结合蛋白QKI-5在乳腺癌细胞中的表达水平以及对癌细胞增殖能力的抑制作用。方法:通过免疫印迹实验检测QKI-5在不同乳腺癌细胞株中的表达水平,通过慢病毒感染构建能够稳定过表达QKI-5基因的细胞株,使用MTT,流式细胞仪检测细胞周期来观察过表达QKI-5对细胞增殖能力及周期的影响。结果:MCF-7细胞在三株乳腺癌细胞中QKI-5表达水平相对最低,MTT实验结果显示与对照相比,过表达QKI-5的MCF-7细胞增殖能力出现显著降低P0.05,同时细胞周期检测显示过表达QKI-5的MCF-7细胞组出现了明显的G1期阻滞,进入S期G2/M期细胞减少。结论:在乳腺癌中QKI-5的高表达可能通过抑制癌细胞周期致使细胞增殖变缓,从而导致肿瘤生长受限。     

RNA干扰NUP88基因对人乳腺癌MCF-7细胞生长及侵袭力的影响

目的： 构建重组慢病毒介导的NUP88-shRNA载体,通过RNAi技术分别观察沉默NUP88后对MCF-7增殖,粘附,侵袭和转移情况的影响,为乳腺癌的临床基因治疗寻找新的靶点。方法： 构建NUP88重组慢病毒表达载体,包装后检测滴度,以最佳复感染指数转染乳腺癌MCF-7细胞,利用RT-PCR和Western blot检测各组MCF-7细胞中mRNA和蛋白的表达效率;MTT法和流式细胞仪检测法,检测NUP88基因被干扰后对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响;细胞侵袭实验检测NUP88基因被干扰后对MCF-7侵袭力的影响。结果 四组病毒及一组阴性对照均构建成功,滴度均为4E+8TU/ml;RT-PCR和Western blot检测,结果表明：经NUP88-shRNA转染的MCF-7细胞组NUP88 mRNA和蛋白质的表达与经阴性转染组和空白MCF-7细胞组相比,差异明显具有统计学意义（P<0.01）;测定NUP88-shRNA1组沉默效率最高,沉默率可达到86%;MTT法结果表明：实验组经NUP88-shRNA1慢病毒转染后细胞增殖程度显著减少,与空白组和对照组相比有显著性差异（P<0.05）。流式细胞仪检测三组MCF-7细胞凋亡结果表明：实验组经慢病毒转染后细胞凋亡率显著增加,与对照组和空白组相比有显著性差异（P<0.05）;细胞侵袭实验表明：在肿瘤细胞常规培养24h后,实验组与空白组和阴性对照组比较,穿膜细胞数量明显减少,具有显著性差异（P<0.05） 结论： NUP88重组慢病毒可以通过RNAi成功抑制MCF-7中NUP88基因的表达,并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。     

条斑紫菜多糖的分离纯化与抗肿瘤活性的初探

目的：本文主要应用生化提纯技术从条斑紫菜（ Porphyra yezoensis ）中提取不同纯度的多糖,并观察各多糖组分对人乳腺癌细胞 MCF-7 生长的影响。方法：通过 DEAE-52 柱层析和 Sephadex G-200 柱层析,对条斑紫菜粗多糖热水提取物进行纯化;经HPLC,紫外和红外光谱对多糖各组分的纯度及结构进行初步鉴定;并用 MTT 法和流式细胞仪检测多糖对人乳腺癌细胞 MCF-7 生长的影响。结果：分离纯化出的各组分条斑紫菜粗多糖对人乳腺癌细胞 MCF-7生长均有不同程度的抑制作用,其中PY-D2可诱导MCF-7细胞凋亡。结论：条斑紫菜多糖具有杀伤肿瘤细胞MCF-7的作用。     

Glargine promotes proliferation of breast adenocarcinoma cell line MCF-7 via AKT activation

Glargine is widely used as a long-acting insulin analogue in the treatment of diabetes mellitus. However, this insulin analogue has been recently suspected to be associated with an increased risk of cancer. The aim of this study was to investigate the influence of glargine on proliferation of breast adenocarcinoma cell line (MCF-7) and its possible mechanism. Effects of glargine and regular human insulin on the cell proliferation were tested in ER-positive MCF-7 cells by MTT assay. Apoptosis in MCF-7 cells was measured by flow cytometry. The protein levels of p-AKT, Bcl-2, and Bax were also determined by Western blotting and immunohistochemistry, respectively. The result showed that glargine (100, 200?nmol/l) stimulated proliferation of ER-positive MCF-7 cells compared with regular human insulin. At the same time, glargine decreased the percentage of early apoptosis in MCF-7 cells. Otherwise, glargine (100?nmol/l) stimulated the p-AKT in a time-dependent manner in MCF-7 cells. Furthermore, we found that glargine downregulated the level of Bax protein and upregulated that of Bcl-2 (p <0.05). These data show that glargine promote the proliferation of breast adenocarcinoma cells in vitro, probably by preventing apoptosis.     

长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移与侵袭的影响 *

目的:探讨长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移与侵袭的影响。方法:构建SNHG3过表达质粒,实验分别设置阴性对照组(pcDNA-3.1+)与SNHG3基因过表达组(pcDNA-3.1+/SNHG3)。将MCF-7细胞转染对照组质粒和SNHG3过表达质粒,采用实时定量PCR 方法检测 SNHG3 mRNA 转录水平,Western blot 检测MMP9及EMT相关蛋白质水平;集落形成实验检测MCF-7细胞增殖能力;划痕愈合实验检测MCF-7细胞横向迁移能力; Transwell 小室实验检测MCF-7细胞纵向迁移能力及侵袭能力。结果:过表达SNHG3后,MCF-7细胞中SNHG3的mRNA水平显著增高(P<0.001);MCF-7细胞的体外增殖能力明显增加(P<0.01),迁移(P<0.01)与侵袭能力(P<0.001)也显著增强,实时定量PCR, Western blot 结果显示SNHG3可激活EMT相关通路。结论:过表达SNHG3可能通过激活EMT通路促进乳腺癌MCF-7细胞的增殖,迁移与侵袭。     

下调CENP-E对乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的:探讨有丝分裂检查点蛋白着丝粒蛋白-E(CENP-E)基因在肿瘤发生发展中的作用。方法:利用shRNA下调CENP-E基因的表达,分别用巢式PCR和Western blot检测CENP-E mRNA和蛋白的表达;MTT检测CENP-E下调后MCF-7细胞的增殖变化;流式细胞术检测CENP-E下调后对MCF-7细胞凋亡的影响;Transwell试验检测MCF-7细胞的迁移和侵袭能力变化;间接免疫荧光检测细胞内CENP-E蛋白和有丝分裂情况。结果:shRNA能有效抑制CENP-E mRNA和蛋白的表达。MTT结果显示CENP-E下调后MCF-7细胞的增殖能力减弱(P<0.05);流式细胞术显示下调CENP-E后能促进MCF-7细胞的凋亡;间接荧光结果显示CENP-E干扰后MCF-7细胞内CENP-E蛋白减少并伴有核分裂异常;Transwell试验显示CENP-E干扰组细胞的迁移和侵袭能力增强(P<0.05)。结论:下调部分CENP-E的表达能抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞的凋亡,增强MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。