NF-kB拮抗剂PDTC对HepG2细胞的抑制及对caspase-3表达的影响

目的：研究NF-kB拮抗剂PDTC诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其对凋亡相关基因caspase-3表达的影响,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。方法：以不同浓度的PDTC处理人肝癌HepG2细胞,利用MTT法检测对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响;利用RT-PCR和Western-blot检测caspase-3mRNA和蛋白的表达。结果：不同浓度PDTC作用人肝癌HepG2细胞不同时间后,能够显著抑制HepG2细胞的生长增殖,存在剂量和时间依赖性（P〈0.05）;PDTC能够上调HepG2细胞中caspase-3mRNA和蛋白的表达。结论：NF-kB拮抗剂PDTC对人肝癌HepG2细胞产生显著抑制,并能上调HepG2细胞中caspase-3mRNA和蛋白的表达。     

紫草素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制及诱导凋亡作用

目的:观察紫草素抑制人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡诱导的作用。方法:用不同浓度的紫草素处理HepG2细胞,MTT检测紫草素对HepG2细胞生长增殖的抑制作用;比色法测定Caspase-3酶活性;Western blot法检测磷酸化Akt蛋白(pAkt)的表达。结果:紫草素能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,并呈浓度、时间依赖性,紫草素与HepG2细胞作用24小时后Caspase-3酶活性显著增强,显示紫草素诱导的调亡作用随时间的延长而增加;同时,紫草素处理HepG2细胞后,随着药物浓度的增加,磷酸化Akt蛋白表达下降。结论:紫草素可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,诱导HepG2细胞凋亡,凋亡机制可能与紫草素抑制PI3K/Akt信号途径有关。     

重组荞麦胰蛋白酶抑制剂对人肝癌细胞的凋亡及半胱氨酸天冬酶活性的影响

先前的研究表明,基因重组荞麦胰蛋白酶抑制剂 (rBTI) 具有诱导不同肿瘤细胞凋亡的作用.为了揭示其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机理,从基因水平上探讨与凋亡有关的分子事件,本研究用不同浓度的 rBTI 体外作用于人肝癌细胞 HepG2 后,采用 MTT 比色法检测抑制剂对epG2 细胞的抑制率,用 DNA 凝胶电泳和细胞核的形态学观察检测 HepG2 细胞的凋亡.结果表明,rBTI 在体外能够明显抑制 HepG2 细胞的增长,并诱导细胞凋亡.另外,细胞凋亡与Bcl-2/Bax mRNA 水平有关.通过 RT-PCR 检测发现,细胞经过rBTI处理后,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA 水平下调,促凋亡基因 Bax mRNA 有所上调,而对照 GAPDH 无变化.对 HepG2细胞中 Fas/Fas 配体及半胱氨酸天冬酶（caspase）的研究证明,细胞经过 rBTI 处理后,对死亡受体 Fas mRNA没有影响; rBTI 可明显激活caspase-3 和 caspase-9 酶活性, 对caspase-8 活性几乎无影响.上述结果表明,rBTI 对HepG2 细胞具有明显的诱导凋亡作用,其诱导细胞凋亡的机制与 caspase-3 依赖性凋亡调节信号通路有关,未涉及 Fas/Fas 配体途径.     

Caspase-3反义寡核苷酸对γ-射线诱导的HL-60细胞中caspase-3表达与细胞凋亡的抑制作用

γ-射线可诱导人髓性白血病细胞株HL-60细胞凋亡,但其机制尚未完全明了。为了观察caspase-3在这种细胞凋亡模型中的作用,本研究设计合成针对caspase-3mRNA5′-非编码区和编码起始区的反义寡核苷酸(ASODNs),即ASODN-1和ASODN-2,以脂质体介导法将不同浓度ASODN-1和ASODN-2转染进入HL-60细胞,γ-射线照射。应用TUNEL法观察凋亡细胞形态学变化及检测凋亡细胞百分率,免疫细胞化学、Westernblotting和RT-PCR技术分别检测caspase-3及其mRNA在引入ASODNs前后的表达水平,并以错配寡核苷酸(MODN)转染及未转染细胞作为对照组。TUNEL法检测发现,当ASODN-1和ASODN-2转染终浓度≥3μmol/L时,γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡率降低,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。免疫细胞化学结果显示,与两对照组相比,转染ASODNs后各组caspase-3阳性细胞率显著下降,阳性细胞染色减弱,其平均灰度值显著增高(P<0.01)。Westernblotting检测显示,转染ASODNs组细胞caspase-3蛋白酶原表达降低,其中ASODN-1组显著低于ASODN-2组。RT-PCR结果显示两对照组细胞caspase-3mRNA均有明显表达,转染ASODNs后caspase-3mRNA表达丰度降低。另外,ASODN-1抑制细胞凋亡和caspase-3表达的作用显著强于ASODN-2(分别为P<0.05和P<0.01)。实验结果表明,caspase-3mRNAASODNs能够抑制γ-射线照射诱导的HL-60细胞凋亡,下调caspase-3蛋白和caspase-3mRNA的表达水平,其抑制作用在一定范围内呈剂量依赖性。     

龙牙百合多糖对人肝癌细胞HepG2凋亡的影响

为研究龙牙百合多糖(LP)对人肝癌HepG2细胞抑制和凋亡的影响,采用MTT法考察了3组LP不同浓度对人肝癌HepG2细胞抑制作用,采用Annexin-V/PI双染法和Western blotting法探究了LP1和LP42个组分对人肝癌HepG2细胞凋亡作用机制。LP对人肝癌HepG2细胞抑制呈剂量依赖关系,LP4组1 mg/mL对HepG2细胞的抑制率达46.36%,效果最佳;LP1组8 mg/mL最高抑制率达43.23%;LP2组4 mg/mL最高抑制率达24.35%;LP1和LP4对HepG2细胞的晚期凋亡率显著高于早期。激活Caspase-3、Bax、蛋白表达显著升高(p0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(p0.05)。研究表明,LP通过激活死亡受体凋亡途径和线粒体途径,诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

四逆散对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨含四逆散药液血清对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法:将人肝癌HepG2细胞分为5组,每组3个复孔。实验组细胞用五氟尿嘧啶(5-FU)或不同浓度的含四逆散药液血清处理48 h后,用倒置显微镜观察含四逆散药液血清处理后人肝癌HepG2细胞形态的变化; MTT法检测含四逆散药液血清对HepG2细胞生长的抑制作用;荧光染色和流式细胞术分别分析含四逆散药液血清对HepG2细胞凋亡的影响。Rho123染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,含四逆散药液血清处理人肝癌HepG2细胞后,细胞数量显著减少(P<0.01),形态发生改变,呈现典型的凋亡细胞形态; G1期细胞数明显增加,而G2期细胞数量显著减少(P<0.05); Bax、Caspase-3、-9和Cyt-c的表达显著升高,而Bcl-2的表达显著降低(P<0.05);随着含四逆散药液血清浓度增大,HepG2细胞线粒体膜电位显著下降(P<0.05)。结论:四逆散可以抑制HepG2细胞增殖,并通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

南方大斑蝥体内结合斑蝥素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

利用水提法从来自罗甸县茂井镇的南方大斑蝥中提取得到结合斑蝥素,作用于人肝癌HepG2细胞后,分别利用Annexin V-FITC/PI双染法检测HepG2细胞的凋亡率,RT-PCR法检测Bax、Bcl-2mRNA相对表达情况,利用Western blot法检测HepG2细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。实验结果表明罗甸县茂井镇产的南方大斑蝥体内结合斑蝥素可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调Bax和下调Bcl-2表达有关。     

华蟾素联合顺铂对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究华蟾素联合顺铂对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡的影响,并探寻联合治疗增敏的可能分子机制。方法:采用不同浓度的华蟾素、顺铂单药和华蟾素联合顺铂处理人骨肉瘤U2OS细胞1-3天,通过CCK-8法检测其对U2OS细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测其对U2OS细胞集落形成能力的影响;流式细胞仪检测其对U2OS细胞凋亡的影响;RT-PCR及Western blotting检测Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9等凋亡相关分子mRNA及蛋白水平的表达。结果:单用华蟾素或顺铂均可以浓度和时间依赖的方式抑制骨肉瘤U2OS细胞的增殖并诱导其凋亡,两药联合应用具有协同效应,并可以上调促凋亡基因Bax下调抑制凋亡基因Bcl-2的表达;联合用药组凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9的表达较单药组明显增加。结论:华蟾素联合顺铂与单一用药相比能够显著抑制人骨肉瘤细胞U2OS细胞的增殖,促进其凋亡,两药联合应用对骨肉瘤细胞的杀伤效应具有一定的协同效应,其机制可能与激活凋亡通路有关。     

反义p73基因诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡

目的：构建表达重组反义p73基因的重组逆转录病毒,观察其对人肝癌细胞HepG2的凋亡诱导活性,并进一步探讨其作用机制。方法：克隆p73基因的反义片段,重组法构成逆转录病毒载体pBabe-p73（pBP73）,以脂质体Lipofectamine2000将其转染293A细胞进行病毒包装;将逆转录病毒感染人肝癌细胞HepG2,用MTT法检测细胞生长抑制情况,Western blotting检测p73的表达;再分别用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡;最后检测p53,caspase-3和bcl-2蛋白的表达变化。结果  重组质粒pBP73经鉴定连接正确,其转染293A细胞后上清液中可得到病毒,滴度达5×107pfu;MTT检测见pBP73病毒组48和72h细胞抑制率高于对照组（45.1% vs. 5.3%,69.5% vs.17.3%,均p<0.05）。琼脂糖凝胶电泳出现典型梯形条带;流式细胞仪检测出现凋亡峰,于转染48h后达最高峰,其凋亡百分率高达20.47%;p73蛋白高表达组p53和caspase-3蛋白的表达亦有显著升高（p<0.05）,但bcl-2蛋白未见表达差异。结论：成功构建了p73逆转录病毒,反义p73基因在体外能够有效地诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡,其可能机制是通过激活caspase-3而发生作用。     

盐酸异丙嗪对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究盐酸异丙嗪对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度(15、23和31μmol/L)的盐酸异丙嗪处理HepG2细胞48 h,应用噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖活性,检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,Hoechst33258染色法检测细胞的凋亡情况。结果:盐酸异丙嗪能以浓度依赖的方式抑制HepG2细胞的增殖,23μmol/L盐酸异丙嗪处理48 h能够显著诱导HepG2细胞凋亡;对照组与处理组之间的LDH活性无显著性差异(P0.05)。结论:盐酸异丙嗪可显著抑制肝癌HepG2细胞增殖,这与其诱导细胞凋亡途径有关。     

紫花牡荆素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的：研究紫花牡荆素（Casticin）对肝癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制。方法：用终浓度为0、0.5、1.0、2.0umol/L的Casticin作用于HepG2细胞,于12、24、48h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342核染色,观察细胞形态学变化;24h后收集各组肝癌HepG2细胞,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-PCR检测survivin mRNA表达。结果：MTT法检测显示,Casticin对肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;Hoechst33342染色后,可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染,与对照组相比,Casticin处理后凋亡细胞比例增加;Casticin作用24h后,细胞被阻滞于G2/M期,随药物质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加;RT-PCR结果显示,Casticin下调肝癌HepG2细胞survivin mRNA表达。结论：Casticin在体外对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断Casticin诱发肝癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关。     

骨形成蛋白7基因诱导人肝癌细胞的凋亡

目的 构建表达重组人骨形成蛋白7 （bone morphogenic protein 7, BMP7）基因的重组逆转录病毒,观察其对人肝癌细胞HepG2的凋亡诱导活性,并探讨其作用机制。方法 克隆BMP7基因,以loxP同源重组法构成逆转录病毒载体pLP-LNCX-BMP7（pLLBMP7）,转染包装细胞PT67进行病毒包装并测定病毒滴度;将逆转录病毒感染人成骨细胞,MTT法检测细胞生长变化,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡;Western blotting检测BMP7,caspase-3和bcl-2蛋白表达。结果 重组逆转录病毒载体pLLBMP7经鉴定连接正确,转染PT67细胞后上清液中可得到病毒,滴度达1×109pfu;MTT检测见pLLBMP7病毒组48和72h细胞抑制率高于对照组（35.1% vs. 5.3%,68.5% vs.18.3%,均p<0.05）,48h可见BMP7蛋白高表达。琼脂糖凝胶电泳出现典型梯形条带;流式细胞仪检测出现凋亡峰,于转染48h后达最高峰,其凋亡百分率高达14.42%;BMP7蛋白高表达时caspase-3蛋白的表达亦有显著升高,但bcl-2蛋白未见表达差异。结论 构建了BMP7逆转录病毒,在体外能够有效地诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡,其可能是通过激活caspase-3而发生作用。     

Berberine induces autophagic cell death and mitochondrial apoptosis in liver cancer cells: The cellular mechanism

Extensive studies have revealed that berberine, a small molecule derived from Coptidis rhizoma (Huanglian in Chinese) and many other plants, has strong anti‐tumor properties. To better understand berberine‐induced cell death and its underlying mechanisms in cancer, we examined autophagy and apoptosis in the human hepatic carcinoma cell lines HepG2 and MHCC97‐L. The results of this study indicate that berberine can induce both autophagy and apoptosis in hepatocellular carcinoma cells. Berberine‐induced cell death in human hepatic carcinoma cells was diminished in the presence of the cell death inhibitor 3‐methyladenine, or following interference with the essential autophagy gene Atg5. Mechanistic studies showed that berberine may activate mitochondrial apoptosis in HepG2 and MHCC97‐L cells by increasing Bax expression, the formation of permeable transition pores, cytochrome C release to cytosol, and subsequent activation of the caspases 3 and 9 execution pathway. Berberine may also induce autophagic cell death in HepG2 and MHCC97‐L cells through activation of Beclin‐1 and inhibition of the mTOR‐signaling pathway by suppressing the activity of Akt and up‐regulating P38 MAPK signaling. This is the first study to describe the role of Beclin‐1 activation and mTOR inhibition in berberine‐induced autophagic cell death. These results further demonstrate the potential of berberine as a therapeutic agent in the emerging list of cancer therapies with novel mechanisms. J. Cell. Biochem. 111: 1426–1436, 2010. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.     

灵芝肽诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

研究了灵芝肽(GLP)在体外对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,并初步探讨了其作用机制。结果显示,透射电镜下可见细胞染色质浓缩、聚集于核边缘成块状,形成典型的凋亡小体;GLP使HepG2细胞阻滞于G0/G1期,随着GLP浓度升高,其G0/G1期的细胞比例随之增加;同时细胞的早期、晚期和总的凋亡率亦均随之增加,存在剂量-效应关系;Western blotting检测结果显示,抑制凋亡基因bcl-2和survivin表达下调,而促凋亡基因p53表达上调,并且都存在剂量依赖性;细胞凋亡的关键蛋白酶caspase-3被激活,并且caspase-3酶活性与GLP浓度亦有剂量依赖性。提示GLP体外可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与bcl-2和survivin表达下调、p53表达上调及Caspase-3被激活有关。     

The anti-proliferative effects of norcantharidin on human HepG2 cells in cell culture

Many lines of evidence have shown that Chinese medicine contains many chemical compounds with anticancer effects. Therefore, we tested whether the active ingredients of blister beetles have a therapeutic effect on hepatoma. The aim of this study was to investigate the inhibitive effects of norcantharidin which is extracted from blister beetles on human hepatoma cells HepG2 in vitro and its anticancer mechanism.MTT assay, agarose gel electrophoresis and flow cytometry were used to evaluate HepG2 cells proliferation and apoptosis. The role of caspase activities were assayed using caspase apoptosis detection kit. Western blot analysis was used to evaluate the level of Bcl-2/Bax expression. Our results indicate that norcantharidin inhibited HepG2 cell growth in a time- and dose-dependent manner by MTT assay. HepG2 cells treated with norcantharidin showed typical characteristics of apoptosis including the DNA fragmentation. The activities of caspase-3, -9 were up-regulated after norcantharidin treatment. By western blot analysis, we found the level of Bcl-2 were down-regulated, whereas, the level of Bcl-2 Up-regulated.so we suggest that up-regulation of mitochondrial Bax expression and down-regulation of Bcl-2 expression participated in the apoptosis induced by NCTD. These results suggest that norcantharidin triggers apoptosis in hepato cancer cell lines via the activation of the caspses, mitochondrial pathways, and that this agent may be useful for developing new therapeutic regimens for the treatment of colorectal carcinoma.     

白藜芦醇对肝癌细胞增殖和凋亡影响及其机制

目的:研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对肝癌细胞LM3周期及凋亡的影响并探讨其可能的分子机制。方法:分别用50、100、150、200μmol/L浓度的Res作用LM3肝癌细胞24、48和72h,CCK-8测定Res对细胞的增殖作用;分别以相同剂量的DMSO及无处理的LM3细胞为随机和空白对照,观察150μmol/L Res作用72小时后对肿瘤细胞周期及凋亡的影响;Real time-PCR及Western blot分析Res对LM3细胞中Bak和Bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响。结果:Res体外能明显抑制肝癌细胞LM3的生长增殖,在一定范围内呈现作用浓度(F=101.183,P<0.001)和时间依赖性(F=192.371,P<0.001);150μmol/L Res作用72小时后能显著减缓肝癌细胞LM3的周期转换(P<0.001),并诱导明显的细胞凋亡效应(P<0.001);进一步的检测发现Res作用LM3细胞后,Bak mRNA(P=0.002,0.007)及蛋白(P=0.004,0.01)表达增强,而Bcl-2 mRNA(P=0.027,0.007)及蛋白(P=0.001,0.001)表达出现显著下降。结论:Res可能通过对Bak及Bcl-2表达的调节来抑制肝癌细胞LM3的增殖,并诱导其细胞凋亡。     

Consumption of hydrogen-rich water alleviates renal injury in spontaneous hypertensive rats

The aim of this study was to investigate the inhibitory effect of a siRNA cocktail targeting Vascular endothelial growth factor (VEGF) and Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) on cell proliferation, induced apoptosis and the expression of VEGF and HER2 in human gastric carcinoma cell. The silencing rate of pre-designed siRNAs that targeted VEGF and HER2 was detected by Real-time Quantitative PCR (RT-QPCR) analysis. Furthermore, the best silencing siRNA that targeted VEGF and HER2 was prepared as a cocktail to co-knockdown VEGF and HER2 expression at both mRNA and protein levels which were detected by RT-QPCR and Western blot analysis. Cell proliferation inhibition rates were determined by CCK8 assay. The effect of siRNA cocktail on cell apoptosis was determined by flow cytometry. The migration inhibition of siRNA cocktail was analyzed by wound-healing assay. The ability of VEGF to induce endothelial cells to proliferate was examined in HUVECs by the method of tube formation assay. The pre-designed siRNAs could inhibit VEGF and HER2 mRNA level. siRNA cocktail, and co-downregulation of VEGF and HER2 result in significant inhibition of gastric cancer growth and migration in vitro. The inhibition of VEGF and HER2 expressions can induce apoptosis of SGC-7901 cells.