半裸镰刀菌的超微结构

镰刀菌是玉米、小麦等粮食常见的污染菌。实验证明,某些镰刀菌的培养物有致癌性,如半裸镰刀菌(Fusarium semitectum)培养物可致大鼠淋巴肉瘤和膀胱乳头瘤,是否能引起人类肿瘤尚在研究中.我们对半裸镰刀菌的超微结构进行了研究,现介绍如下: 材料和方法取材将土豆培养基上培养的半裸镰刀菌,用小刀切成5×5mm的小块(连同培养基一起切下),放入1.5％KMnO_4水溶液中固定2小时,再用1％O_sO_4后固定2小时,用系列乙醇     

利用味精生产废液生产饲料酵母

我们以味精生产过程中离子交换工序排出的废液作原料,直接用碱调pH3.5—4后,接入热带假丝酵母(Candida tropicalis),于30—32℃摇瓶培养16小时,可得干菌体8克/升。用50升发酵罐培养时,以半连续法进行酵     

棉铃疫病菌孢子囊产生及游动孢子悬液稀释的方法

本文报道棉铃疫病菌即苎麻疫霉菌(Phytophthora boehmeriae)孢子囊的离体生产及游动孢子悬液的稀释方法。将疫病菌菌饼置于马铃薯葡萄糖培养液(PDL)或菜豆葡萄糖培养液(BDL)中,24C条件下暗培养48—72小时,然后将菌丝块在20-22℃条件下用矿质盐溶液(MSS)更换漂洗(4次)培养10-12小时并辅以光照(日光灯);最后除去MSS,继续光照培养12小时即可得到大量孢子囊。黑暗条件可抑制孢子囊的形成而促进卵孢子的产生。培养液采用BDL优于PDL,除了产孢量更高外,突出的     

培养人胚心肌细胞的透射电镜观察

本文报告5例4个月人胚(因妇产科指征小剖腹娩出)心肌细胞在培养前胰蛋白酶消化后培养1、2、3、4和5日后的透射电镜所见。胰蛋白酶消化对心肌细胞核、肌原纤维等都有明显影响,但培养24小时基本恢复正常。培养1、2和3日的人胚心肌细胞超微结构和培养前的心肌细胞基本相似。培养4和5日的部分心肌细胞出现 Z 线变形、肌节不完全等变性变化,部分心肌细胞仍具较正常结构。用培养的人胚心肌细胞制备病理模型,宜在培养后1、2和3日内进行。     

产生葡萄糖淀粉酶的红曲霉的筛选及其发酵条件的研究

筛选出了红曲霉 AS 3．976(Monascus serorubescens)和 AS 3.978(Monascus sp.)作为液体培养生产葡萄糖淀粉酶的优良菌种,并找出了适合的培养基及培养条件。在含玉米粉3％、豆饼粉1．5％(pH 4．5)的培养基申,于30--35℃培养72小时,每毫升培养液的滤液酶活力可达260单位。酶作用的最适温度为50℃,最适pH为4.5,每克干淀粉用酶量0.5毫升,糖化32％(w／w)的浓淀粉液化液,经40小时,葡萄糖值可达99以上。     

哥伦比亚食道口线虫的离体培养及其幼虫的形态发生和发育过程观察

作者利用倒置显微镜对哥伦比亚食道口线虫(Oesophagostomum columbianum,Curtice,1890)幼虫在离体培养状况下的生长发育和形态发生过程进行了详细的观察。结果表明,几乎在所有培养系中,其生长发育和形态发生过程都是基本一致的,只是在不同的培养系中该过程所需时间不同。在培养系2培养91小时,肠细胞界限完全消失,由幼虫型肠道向成虫型肠道过渡。培养115小时进入中三期,食道由丝状型向成虫型(圆线虫型〕过渡。145小时,进入晚三期,开始形成L_4的暂时性口囊。第三次脱皮(M_3)开始于154小时,接种后160小时出现L_4。培养18天,99％完成M_3,1％虫体进入中四期,长约1800μm。     

兔眼越桔幼苗胚轴、子叶诱导再生植株

植物名称:兔眼越桔(Vaccinium ashei)材料类别:无菌苗胚轴、子叶。无菌苗培养:种子用70％酒精浸泡1分钟后,转移到10％的漂白精片过滤液中灭菌15分钟,再用无菌水冲洗三次,接种于0.5％琼脂上,培养温度为25～28℃,光强为2,000lx,每日光照16小时。培养3～4周后幼苗高约2～3cm,子叶绿色。于无菌条件下取子叶、胚轴(5～7mm)作为外植体进行诱导培养。     

乙醇及6-DMAP对小鼠卵母细胞孤雌激活的研究

实验研究了乙醇、6-DMAP以及二者联合使用时对注射hCG后18小时采集的小鼠卵母细胞孤雌激活的效果。结果证明:(1)用5％的乙醇分别作用5和10分钟及10％的乙醇分别作用5和10分钟,小鼠卵母细胞的孤雌激活率分别为41.3％、63.7％、57.9％和85.6％。说明在一定范围内,随着乙醇浓度和作用时间的增加,小鼠卵母细胞孤雌激活率有上升的趋势。(2)用2mM 6-DMAP作用2、4和6小时,小鼠卵母细胞的孤雌激活率分别为 12.0％、25.0％和40.0％。说明随着6-DMAP作用时间的增加,小鼠卵母细胞的孤雌激活率有所升高。(3)用5％乙醇作用5分钟,再用含有2mmol/L 6-DMAP的培养液培养6小时,小鼠卵母细胞的孤雌激活率可达65.5％,明显高于单独使用5％乙醇作用5分钟或单独使用2mmol/L 6-DMAP作用6小时卵母细胞的孤雌激活率。(4)用10％的乙醇作用5分钟,再用含有2mmol/L 6-DMAP的培养液培养6小时,小鼠卵母细胞的孤雌激活率达到100％,远远高于单独使用10％乙醇作用5分钟或单独使用2mmol/L 6-DMAP作用6小时卵母细胞的孤雌激活率。(5)在单独使用乙醇刺激时,激活卵母细胞中直接卵裂(2-细胞)的比率随乙醇作用强度的增加而增加,最高达62.5％;但6-DMAP则抑制激活卵母细胞的直接卵裂,增加二原核卵的比例。     

穿山甲(Manis Pentadactyla aurita)的核型分析

穿山甲(Manis pentadactyla aurita)的核型尚未见报道过,我们在1982年观察了1只雄性穿山甲核型,现报道如下。 一、材料和方法 进行核型分析的穿山甲获自贵州,空运抵京饲养了数日,抽取其静脉血做淋巴细胞培养。培养液的配制是RPMI-1640和小牛血清按4:1的比例混合,加入适量的谷氨酰胺溶液。PHA选用Difco PHA M型。培养温度为36℃,培养时间为72个小时。与此同时,我们还取其骨髓细胞作体外短期培养,培养温度为室温,培养时间为2小时。无论是淋巴细胞培养还是骨髓细胞短期培养均采用空气干燥法制片。     

用哈栖木霉(Trichoderma harzianum)的细胞壁分解酶从指状青霉(Penicillium digitatum)的菌丝中制备原生质体

用哈栖木霉ATCC48131的细胞溶壁酶从指状青霉的菌丝体中制备原生质体。将指状青霉ATCC10030于27℃培养在马铃薯右旋糖液体培养基中,静止培养24小时,菌丝用Whatman 1号滤纸过滤收集,然后用0.6％的氯化钠冲洗3次。原生质体是从0.8克分子甘露糖醇溶液(pH5.5～6.0)的菌丝悬液(50～100毫克/毫升)中,用5～7％(W/V)对哈栖木霉中得到的细胞壁溶解酶,在每分钟100转的往复式摇床上,30℃下,摇4小时浸提。采用二相梯度离心,从剩余菌丝体碎片中分离出原生质体。1毫升1M硫酸镁同1毫升粗制原生质悬     

乳酸菌D—80葡萄糖异构酶的研究

采用乳酸菌D-80为试验用菌种,经试验找出了适合产葡萄糖异构酶的培养条件。培养基含有：玉米芯水解液还原物1．2—1．4％,米糠饼2一4％,麸皮0.2～0.4％(二者经1398蛋白酶水解)及MnSO．0.05％。微量通风,开罐发酵,35—37℃培养。培养前期6—7小时,用NaoH调节发酵液pH为4．9—5．1。总的发酵时间为10一14小时。成熟醪中的菌体,经分离后,加入30—40％的葡萄糖浆,pH 6．4—6．7,MnSO4的含量10-4M,60—65℃的条件下转化,果糖的转化率为40％左右。经扩大试验后,进行技术鉴定,认为工艺路线基本上是合理的,经济上也是合算的,可进一步扩大试生产。     

Vero细胞培养流行性感冒病毒的研究

探索Vero细胞培养流感病毒和用于研制流感疫苗的可行性。确立Vero细胞培养流感病毒的最适条件,把流感病毒接种于Vero细胞上培养和传代,于不同时间收获病毒液,进行灭活和超滤浓缩实验,检测血凝素滴度(HA)。结果表明胰酶、pH值、残留牛血清是流感病毒在Vero细胞培养的影响因素,最佳收毒时间为72-96小时。Vero细胞上培养流感病毒的4～7代,HA滴度较高。病毒液用0．05％福尔马林4℃,7天即可灭活,用超滤技术能浓缩流感病毒液。Vero细胞可用于流感病毒的培养和疫苗的开发。     

黑麦叶肉原生质体的分离、培养与幼小愈伤组织的形成

黑麦叶肉原生质体系用纤维素酶溶去壁后分离出来的。酶液混合液为:纤维素酶(2％)、果胶酶(0.5％)溶于0.65M的甘露醇中,保温在24～26℃。将生长5—6天的黑麦叶片在酶掖中处理2—3小时后,就可使90％以上的原生质体分离下来。将每毫升含有5×10~4—10~5密度的原生质体培养在液体培养基中(表1),其中附加2,4-D(1毫克/升)、6BA(0.5毫克/升)、CH(1克/升)和0.56M蔗糖。培养条件为光照800—2000米烛光,温度23—26℃。培养48小时后长出新壁。第3天出现第一次分裂,4—7天进行第二、三次分裂,9天后形成细胞团,25天后长成大细咆团。此后,定期加等体积的新鲜培养液,继续培养一个时期后便形成了幼小愈伤组织。     

人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)cDNA的克隆和序列测定

用Ficoll-Paque从正常中国人外周血中分离单个核细胞,在RPMI 1640培养基(含10％小牛血清,2mrnol/L谷氨酰胺)中培养2小时,洗涤去除未贴壁细胞,将贴壁单核细胞用含10μg/mLLPS的培养基继续培养2小时。用异硫氰酸胍-酸酚法提取LPS诱导后的单核细胞总RNA,从中取1μg.总RNA作模板,以oli-go(dt)_(15)为引物,使用Promega公司AMV逆转录酶     

染色体分析用于鉴定大熊猫幼仔性别

我们应用人类外周血微量短期培养技术,对出生2个半月的大熊猫染色体组型进行了分析,并确定了性别。 材料来自福州动物园初生大熊猫“榕榕”,培养基组合:RPMI—1640 4ml,小牛血清1ml,植物血凝素0.2ml混合,pH调至7.4左右。加静脉血0.2ml,37℃下培养72小时。终止培养前6小时,加入秋水仙素,浓度为0.08～0.15微克/ml。将收获的细胞用0.075M氯化钾溶液低渗处理20分钟,低速离心沉淀,用甲醇:冰醋酸(3:1)混合液固定30分钟,重复二次。最后用空气干燥法常规制作标本片。选择30个中期核分裂象计数,观察染色体的数目和形态。     

斯氏狸殖吸虫神经系统的研究

斯氏狸殖吸虫(Pagumogonimus skrj abini Chen,1963)是人兽共患寄生虫之一,对人体健康危害很大。研究斯氏狸殖吸虫的神经结构,既可了解该吸虫的生理、生化及杀虫药物作用机制,又可为研究其它吸虫的神经解剖学提供借鉴。为此,我们应用乙酰胆碱酯酶(AChE)定位技术对斯氏狸殖吸虫的神经系统进行了研究。 斯氏狸殖吸虫经无菌生理盐水37℃培养24小时,用4℃ 10％福尔马林蔗糖液固定1—2小时,自来     

小偃麦原生质体培养及植株再生

硬粒小麦(Triticum durum Desf.AABB)和中间偃麦革[Elytrigia intermedium(Host)Nevski BBEEFF]的杂种 F_1——小偃麦的幼穗诱导的胚性愈伤组织继代培养近两年后,转入修改的 MS 液体培养基建成胚性细胞悬浮系。从此悬浮系分离的原生质体在修改的 KM_(8p)培养基中培养48小时后出现第一次分裂。15天后,在液体浅层培养条件下的细胞分裂频率为2%;而用1.2%琼脂糖固化进行固体平板培养时,细胞的分裂频率则为12.14%。20—30天后,添加渗透压降低的原生质体培养液。当从原生质体再生的愈伤组织长至2—4mm 大小时,逐步转至生长及分化培养基上再生出完整植株。     

花叶艳山姜的组织培养

植物名称:花叶艳山姜(Alpinia zerumbet cv. variegata)。材料类别:幼茎和花轴。培养条件:采自幼茎和花序轴,除去花蕾,将材料切成4～5cm的小段,用75％酒精擦洗,然后将材料放入烧杯中、用水冲洗1小时,再在无菌条件下用0.1％升汞消毒8～10分钟,无菌水冲洗3～5次,     

缺氧培养对大鼠神经干细胞体外增殖影响及其机制的研究

目的：研究应用缺氧对体外培养的大鼠神经干细胞增殖的影响。方法：将细胞分为4小时缺氧组、12小时缺氧组、促红细胞生成素（EPO）中和抗体组、IgG组以及对照组．测定大鼠神经干细胞经缺氧培养后的各组细胞克隆形成率以及EPO的表达变化。结果：单细胞培养条件下,与对照组相比,4小时缺氧组和IgG组克隆形成率明显增高;中和抗体组无明显变化;12小时组克隆形成率降低。但无统计学意义。缺氧4小时后,EPO蛋白在预处理后即刻出现表迭,4h达高峰,8h仍有部分表达。结论：短时间缺氧可以促进神经干细胞增殖．长时间缺氧则作用相反。缺氧对NSCs增殖作用的影响可能是由EPO介导产生。     

不同浓度Ca~(2 )和NH~(4 )下草莓试管苗的分化

试验材料为引种筛选后的日本草莓(Fragaria xananassa)品种“宝交早”,外植体为匍匐茎尖生长点(0.2mm)与分割后的试管丛生芽小块。MS培养基中的NH_4NO_3以(NH_4)_2SO_4代替,以不同Ca~(2 )和NE_4浓度配比培养基与MS对照,各培养基均附加BA0.25mg/L。每瓶培养基接一个茎尖生长点,经不断继代培养,统计每瓶的苗数,比较各处理间一次继代培养的苗分化效果。培养温度25±1℃,每天光照12小时,光照度1500～2000 lx。统计分析用小样本t测。获得结果如下: