脂肪细胞空泡的制备

本文报道使用高渗氯化钠溶液制备脂肪细胞空泡。得到的空泡用Harris苏木素染色不着色,说明空泡中基本上不含细胞核。用苏丹Ⅲ染色呈极浅的橙红色,表明空泡中含少量脂质。细胞标志酶活力测定表明:空泡的碱性磷酸酯酶活力比完整细胞的高3.5倍,琥珀酸脱氢酶活力和还原辅酶Ⅱ-细胞色素c还原酶活力均极低。空泡中DNA含量几乎测不出。以上结果均表明这样得到的空泡,细胞器的含量很低。经测定,空泡对半夏蛋白及胰岛素的结合能力与完整细胞相同。根据组织化学鉴定、细胞器标志酶及细胞膜受体测定说明,用高渗法制备的脂肪细胞空泡主要成分是细胞膜,且保持了膜上受体的活力,适用于膜受体的结构和功能的研究。     

脱辅基细胞色素c定向于线粒体的转运特异性研究

用分离纯化的完整线粒体和部分细胞器组分,初步研究了脱辅基细胞色素c在细胞内转运的特异性。完整线粒体用差速离心和密度梯度离心的方法,从幼龄鸡心肌组织中获得,对胞内几种细胞器标志酶比活力的测量表明,纯化的线粒体单胺氧化酶活力提高25.6倍,腺苷酸激酶活力提高3.59倍,细胞色素c氧化酶活力提高5.48倍,外膜完整性达90%以上,呼吸控制率大于20。以上数据表明该纯化的线粒体受胞内其它囊泡成分污染少,外膜完整并具有较高的氧化磷酸化偶联效率;在纯化线粒体的同时,得到另两种细胞器组分-内质网和溶酶体囊泡。体外转录翻译的apo.c与上述几个组分的结合实验表明,完整线粒体与apo.c的结合能力明显高于其它组分。     

人胃癌细胞在丁酸钠的诱导下膜分子运动与膜相关骨架的关系

体外培养的人胃癌细胞,用丁酸钠处理后,显示细胞表面FN及细胞胞质微丝的变化,同时用荧光漂白恢复方法对细胞膜ConA受体复合物侧向扩散运动进行测定。结果表明,经丁酸钠处理后的细胞,胞质微丝及细胞膜表面FN均较对照组增加,而细胞膜分子侧向扩散运动减慢,说明与细胞膜相连的细胞骨架的变化对膜分子侧位运动具有牵制作用。     

血液透析患者红细胞膜流动性观察

脂质是细胞膜的重要组成部分,正常情况下,膜脂处于流动状态,以便维持细胞的正常生理功能,膜流动性的改变不仅影响细胞膜的变形能力和脆性,而且影响物质通过膜的转运及膜上结合酶的活力。为了探讨慢性肾功能衰竭(CRF)患者细胞膜的流动状态,作者用荧光偏振技术测定了接受血透的患者红     

磷脂酰肌醇－4－激酶的的免疫分析

在纯化猪肝微粒体磷脂酰肌醇－４－激酶（ＰＩ－４－Ｋ）的基础上,制备该酶的免疫血清、提纯ＩｇＧ,并建立了ＰＩ４－Ｋ的ＥＬＩＳＡ,进行不同组织中ＰＩ４－Ｋ的免疫沉淀分析和免疫定量。结果证明：猪肝微粒体ＰＩ４－Ｋ的抗血清或抗体ＩｇＧ可沉淀猪肾和猪肺的微粒体膜、猪肝细胞膜和人中性粒细胞细胞膜ＴｒｉｔｏｎＸ－１００增溶液（ＴＸＳＭ）中的ＰＩ４－Ｋ,表明不同组织、不同亚细胞器和不同种属的ＰＩ４－Ｋ有相似的抗原性。猪肝、肾、肺、胃、小肠和大肠ＴＸＳＭ中ＰＩ４－Ｋ的活力和酶蛋白含量相仿,急性中性粒细胞白血病患者的中性粒细胞膜上ＰＩ４－Ｋ的含量和活力都增加３．５倍左右．加上ＰＩ４－Ｋ抗体沉淀各组织ＰＩ４－Ｋ活力和酶蛋白的百分率基本相同,支持文献报道组织中微粒体或细胞膜中的ＰＩＫ主要是ＰＩ４－Ｋ,而免疫性不同的ＰＩ３－Ｋ含量极少的观点．     

烟草叶片液泡内氨基酸成份研究

液泡是植物细胞中特有的大型细胞器,具有重要的生理功能。本文报导了用双酶直接酶解法从烟草叶肉细胞中分离原生质体和完整液泡。在最适保存条件下,原生质体和液泡分别在３６和１２小时后,尚有一半保持活力。液泡内含有大量游离氨基酸,液泡膜ＡＴＰａｓｅ的最适ｐＨ为７．０,受Ｃｌ－激活,受ＮＯ３－抑制。     

牛精细胞表面凝集素受体的研究

外源凝集素能与细胞表面相应的受体特异性的结合,并导致细胞凝集,因而外源凝集素可用作细胞膜结构的探针,用来研究细胞膜的结构与功能。近年应用外源凝集素对精细胞膜上糖蛋白和凝集素受体的数目与功能状态的研究已取得很大进展,采用异硫氰基荧光素(FITC)或辣根过氧化物酶等标记凝集素来测定膜上凝集素受体的定位与分布,研究认为精细胞膜上受体与受精作用有密切关系。本文报道用具有血型专一性或无血型专一性或FITC标记的凝集素研究牛精细胞膜上凝集素受体的分布结果。     

花生种子劣变中超微结构的研究

在贮藏中或在人工加速老化处理下花生种子发生劣变,劣变种子的活力指数与发芽率下降。高活力种子的细胞超微结构良好,膜系统完整,各种细胞器能清楚辨认。种子一旦发生严重劣变,细胞器及膜系统出现损伤,其中线粒体的反应较敏感,核及内质网也易受损伤。失去活力的种子,圆球体溶合成团,占据细胞大部分,细胞结构难以辨认。从不同程度的劣变种子中,可以看到超微结构的不同程度解体情况。     

Na+K+-ATP酶抑制引起的细胞凋亡和杂合性细胞死亡

Na^ -K^ -ATP酶也称Na^ 泵或Na^ -K^ 泵,是哺乳类细胞膜进行离子转运的跨膜载体蛋白。其基本作用是维持细胞膜内外Na^ -K^ 电化学梯度的平衡。近来研究表明,Na^ -K^ -ATP酶在细胞死亡中起重要作用,细胞K 缺失导致凋亡,在某些类型的细胞中,同一细胞兼具细胞肿胀、细胞器溶解等坏死特征和染色质凝集、DNA梯带、caspase级联反应等凋亡特征,呈现一种特殊的细胞死亡形式,即杂合性细胞死亡。     

腺苷酸环化酶活力测定

腺苷酸环化酶(AC;E.C.4.6.1.1)是位于细胞膜上的一种复杂的酶系统,它通过鸟苷酸调节蛋白,与膜表面激素受体相偶联,催化细胞内ATP生成cAMP,介导外部信息的跨膜传递。测定AC活力对于研究生物膜的结构与功能,研究激素,神经递质及药物对细胞代谢的调控,以及细胞增殖分化,肿瘤发生等具有重要意义。作者以Krishna等人(1968)建立的方法为基础,综合有关改进方法,建立了一种简便的AC放射分析法,并对cAMP的分离效果及影响酶活力的若干因素进行了探讨。     

介绍一种制备细胞膜的简易方法

为进行细胞膜的生物化学分析,必先分离出纯净的细胞膜.选用哺乳动物红细胞制备细胞膜是目前常用的方法,一般多在一步溶血法的基础上,用高速离心分离制备.由于高速离心机设备目前国内尚不普及,我们尝试在低速离心(4℃,1,200×g,离心45分钟)条件下,进行人红细胞影泡制备.所谓“影泡”,即哺乳动物红细胞溶血去除血红蛋白后,分离到的细胞质膜.成熟的哺乳动物红细胞中没有通常真核细胞所含的任何细胞器.经制备,容易得到纯净的细胞膜,并且材料来源方便,故红细胞影泡是目前研究细胞膜结构功能时常用的一种膜制剂.     

ATP敏感钾通道参与大鼠前脂肪细胞增殖和分化

为了探讨ATP敏感钾通道在前脂肪细胞增殖分化中作用,本实验用逆转录实时定量PCR方法检测大鼠前脂肪细胞和诱导5d获得的脂肪细胞中该通道磺脲类受体2（sulphonylurea receptor2,SUR2）mRNA表达,探讨该通道阻滞剂格列本脲和激动剂二氮嗪对前脂肪细胞中SUR2mRNA表达的影响;MTT检测前脂肪细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;油红O染色法检测细胞内脂质含量;Image-Pro Plus5．0软件测量细胞直径;逆转录PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferator-activatedreceptor-γ PPAR-γ）mRNA表达。结果显示：前脂肪细胞及诱导5d获得的脂肪细胞均有SUR2mRNA表达,且后者明显高于前者;格列本脲抑制前脂肪细胞SUR2mRNA表达,剂量依赖性地促进前脂肪细胞增殖,增加G2／M＋S期细胞百分比,增加细胞脂质含量,使脂肪细胞直径增大,增加PPAR-γ mRNA的表达;二氮嗪在这些方面的作用与格列本脲相反。以上结果提示,ATP敏感钾通道在前脂肪细胞增殖和分化中可能起调节作用,PPAR-γ可能参与这些作用。     

Leptin介导AMPK信号通路对猪皮下前脂肪细胞脂类代谢调控的研究

以体外培养的猪原代皮下脂肪细胞为研究材料,检测Leptin介导AMPK信号通路中基因表达水平,旨在阐明Leptin介导AMPK信号通路对脂肪代谢调控的分子机制。用0和100 ng/m L Leptin分别处理脂肪细胞48 h,油红O染色鉴定脂肪细胞,试剂盒测定细胞中甘油三酯和游离脂肪酸含量,Real-time PCR方法检测皮下前脂肪细胞中AMPK信号通路中基因表达水平。研究结果表明,皮下前脂肪细胞中,Leptin组甘油三酯含量均显著低于对照组(P0.05),表明Leptin可以降低细胞中甘油三酯和游离脂肪酸含量。Leptin组中AMPK信号通路中的基因lep R、AMPK、CPT-1基因的表达量均显著高于对照组(P0.05),ACC基因表达量显著低于对照组(P0.05),表明Leptin通过调控AMPK信号通路中基因表达,启动AMPK信号通路的信号传递。皮下前脂肪细胞中,lep R、AMPK和CPT-1基因表达量均与甘油三酯和游离脂肪酸含量呈显著负相关(P0.05);ACC基因表达量与甘油三酯和游离脂肪酸含量呈显著正相关(P0.05)。结果表明,Leptin通过激活AMPK信号通路,降低ACC基因的表达量,提高CPT-1基因表达水平,促进甘油三酯分解及脂肪酸的氧化,降低细胞中甘油三酯和游离脂肪酸的含量。     

表面活性剂Tween-20对离体小麦根钾离子运转的影响

低浓度的Tween-20不仅抑制小麦离体根的K~ 吸收,而且还引起K~ 的外流。抑制K~ 吸收和促进K~ 外流的程度随着Tween-20浓度的提高,处理时间的延长而加深。Tween-20对K~ 运转的抑制作用,可以用去离子水洗去。Twen-20浓度在0.01～0.01％范围内促进小麦根细胞膜上KCl刺激的ATP酶活力,但它的浓度在0.05％以上时则抑制这种ATP酶的活力。延长Twen-20预处理膜-ATP酶的时间,Tween-20抑制膜-ATP酶活力的作用增强。Tween-20抑制 K~ -ATP酶活力的程度大于Mg~(2 )-ATP酶。Tween-20的分子透入细胞膜之后,可能暂时引起膜类脂双分子层分子结构的改变,影响了膜对K~ 的透性;还可能变动膜-ATP酶周围的脂肪环境,当膜-ATP酶的脂肪环境受到Tween-20轻微影响时,酶活力被促进;当脂肪环境的变动加大时,酶活力被抑制。Tween-20对膜-ATP酶活力的影响可能是它影响小麦根细胞K~ 主动吸收的原因。     

盘基网柄菌细胞分化和凋亡的形态特征

本文用透射电镜和DAPI荧光染色法研究了盘基网柄菌(Dictyosteliumdiscoideum)细胞分化和柄细胞的凋亡特征,结果显示:细胞丘中绝大部分细胞的线粒体内出现一小空泡,随着发育进程,空泡逐渐增大,线粒体的嵴随之变少,直至线粒体完全空泡化,最后形成单层膜的空泡。据此我们推测前孢子细胞特有的空泡来源于线粒体,并且这种细胞器水平上的内自噬现象与前孢子细胞分化密切相关。在前柄细胞分化阶段,前柄细胞中出现数个自噬泡,最初吞噬的线粒体嵴结构完整;随着前柄细胞进一步分化,部分线粒体内出现类似于前孢子细胞中的内自噬现象,并且自噬泡只吞噬这种线粒体。在凋亡后期,细胞核内核仁消失,染色体固缩形成高电子密度斑块,自噬泡采用与细胞核膜融合的方式来完成核的清除,最后柄细胞完全空泡化且包被一层纤维素壁。作者认为前柄细胞凋亡过程实质上是一种分化过程,所以有其鲜明特点:细胞出现自噬泡,标志着凋亡开始,用自噬而不是凋亡小体来清除胞内各种细胞器,直到分化最后阶段才清除细胞核和形成纤维素壁。这些特点不仅是前柄细胞凋亡的形态学指标,也和细胞发育和分化相关。     

干旱对玉米叶片细胞透性及膜脂的影响

叶片相对含水量随聚乙二醇(PEG)处理浓度的增加而依次降低,复水后它能恢复到对照水平;叶片质膜透性随PEG处理浓度的增加而依次增大,复水后它能不同程度地恢复;PEG处理时叶片膜脂的饱和脂肪酸含量增加,不饱和脂肪酸含量降低。复水后膜脂脂肪酸配比与复水前相似。干旱条件下叶片细胞的各类细胞器膜脂脂肪酸配比的变化与叶片总膜脂的变化相似;在轻度干旱条件下的叶绿体Mg~(++)-ATP酶活力低于对照,复水后能迅速恢复到对照水平,中度干旱条件下Mg~(++)-ATP酶活力明显高于对照,但复水后均有不周程度的恢复。     

层粘连蛋白与膜受体结合下膜受体构象与膜脂有序性的研究

配体蛋白与细胞膜受体蛋白结合后,可引起膜受体的构象与膜脂的有序性变化.本文研究外源性层粘连蛋白与腹水肝癌细胞膜受体结合后膜热量变化,膜序参数改变和膜电荷及细胞迁移率的变更.就膜蛋白构象与膜脂有序性以及膜电荷等方面改变的生理意义与层粘连蛋白抗癌细胞脱落转移寻找理论关系.本文应用微量量热法、顺磁共振和细胞电泳等技术,得知层粘连蛋白与癌细胞膜作用后细胞膜有放热效应,膜流动性增大,细胞电泳动变慢.癌细胞膜的这些变化对于限制癌的恶性生长与脱落均起重要作用.     

猪前体脂肪细胞的分离培养

在比较组织块法和消化法分离培养猪前体脂肪细胞的基础上,通过对前体脂肪细胞增殖与分化过程中细胞的形态学变化、生长曲线、油红O染色以及脂肪细胞特异性标志基因脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase,LPL）和过氧化物体增殖剂活化受体γ（peroxisome proliferators-activated receptor γ,PPARγ）表达的研究,证明用消化法可从猪的脂肪组织中分离获得大量的前体脂肪细胞,其生长旺盛,可见自发充脂;传代细胞经诱导培养后,充脂率大幅度提高,脂肪特异性标志基因表达增强。这为深入研究脂肪细胞增殖与分化以及猪体脂肪沉积提供了一个较好的模型。     

颈双缘姬蜂寄生引起小菜蛾蛹脂肪体形态和超微结构的变化

采用光学和电子显微镜观察了颈双缘姬蜂Diadromus collaris（膜翅目： 姬蜂科）寄生后小菜蛾Plutella xylostella（鳞翅目：菜蛾科）蛹脂肪体形态、超微结构和脂肪细胞的变化。结果表明： 被寄生72 h后小菜蛾蛹脂肪体结构松散,细胞游离,细胞膜破裂;细胞内营养物质开始被动地消耗;细胞器数量减少,细胞核内染色质状态发生变化。这些现象说明寄生对寄主的脂肪体结构及脂肪细胞产生了明显的影响,这有利于为幼蜂的发育提供营养。     

大鼠心肌肌浆网的纯化及其性质研究

 用超声波破碎心肌细胞,差速离心法纯化大鼠心肌肌浆网(CSR)。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得Ca~(2+)-ATPase分子量为98kD;电镜观察膜制备为完整的CSR微囊;标志酶哇巴因敏感型Na~(+),K~(+)-ATPase和叠氮化钠敏感型Mg~(2+)-ATPase活性表明膜制备中肌膜含量很低,但仍有线粒体污染。 用~(45)Ca~(2+)示踪微孔滤膜法研究Ca~(2+)跨膜转运,CSRCa~(2+)蓄集最大值为57nmol/mg蛋白。CSR Ca~(2+)-ATPase在4℃—21℃和21℃—49℃两区间反应活化能不同,前者大于后者。酶的最适pH为7.4。以ATP为底物,该酶有两个表观Km值:Km_1为3.7μmol/LKm_2为713μmol/L。