聚丙烯酰胺凝胶中DNA的银染方法

聚丙烯酰胶凝胶电泳具有极高的分辨率,用于DNA分析时,长度仅差0.2％（即对500bp样品中的1bp长度差异）也可以凝胶上分开,因此被广泛用于对DNA需要进行高分辨率分析的程序之中,直到目前为止它仍是DNA测序工作中DNA片段长度检测的主要手段。由于聚丙烯酰胺凝胶对荧光染料溴化乙锭的荧光有熄灭作用,EB染色法很难检测到少于10纳克的DNA条带,因此在传统的DNA测序工作中经常采用放射性同位素自显影方法来检测DNA带的位置,不但增加了实验成本,而且使操作本来就较为繁琐的聚丙烯酸胶凝胶电泳变得更加麻烦;利用荧光标记的方法虽然…     

一种简便的凝胶干燥法

SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)已成为分析蛋白质核酸等样品的一种常用方法。为使染色后的凝胶长期保存,需制成干胶。下面介绍一种比已报道的更为简便易行的凝胶干燥方法。取一块如电泳用大小的玻璃扳,将二张略大于玻璃板的玻璃纸浸于脱色液中。先取一张玻璃纸平铺于玻璃板上,从一端向另一端平铺,抚平去气泡,涂一层50%甘油。将凝胶放其上,在凝胶面上也涂一层50%甘油。将另一张玻璃纸覆盖在凝胶上从一端开始慢慢平铺,抚平赶尽气泡,将大于玻璃板的玻璃纸向玻璃板     

聚丙烯酰胺凝胶快速、高效银染方法的建立

摘要: 聚丙烯酰胺凝胶电泳目前已经广泛应用在SSR标记、SNP标记以及遗传图谱的构建等过程中, 但是一直以来凝胶银染方法由于染色时间长、染色步骤繁琐, 使得对于开展大批量的实验研究极为不利。文章通过对常规方法的改良, 建立了一个银染步骤只需要10 min, 整个染胶过程只需约20 min的快速、高效的银染方法。     

一种简易的聚丙烯酰胺凝胶干胶制作法

在聚丙烯酰胺凝胶电泳中经常遇到凝胶干胶制作不好的问题,即使在有干胶机的实验室也常发生凝胶裂开、皱缩、电泳条带扩散、干胶质量不理想的情况,一些文献介绍的方法也常发生类似问题。我们在干胶的方法上作了一些摸索和改进,总结出一种简易的、     

聚丙烯酰胺凝胶固定核酸方法及其应用

固相核酸已被广泛用于DNA/cDNA微阵列、固相PCR及其它核酸与生物分子检测的传感技术中.和硬质玻璃载片相比,三维聚丙烯酰胺凝胶作为固定核酸的载体具有结合核酸容量高、利于反应的类似液相环境和较少的空间效应等优点.综述了丙烯酰胺凝胶作为固定核酸载体的发展历史.着重介绍了丙烯酰胺修饰核酸直接聚合固定的方法以及在DNA芯片、焦测序、固相PCR(克隆)、及全基因组测序等核酸分析中的应用.     

蛋白质组学实验中聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色

在蛋白质组学实验中,蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳后的染色是一个十分重要的环节。鉴于其良好的质谱兼容性和操作上的便捷,考马斯亮蓝染色是目前众多实验室中最常用的染色方法。本文介绍了四种各具特色的考马斯亮蓝染色方法。     

一种新的制备酸性聚丙烯酰胺凝胶的引发系统

一种新的制备酸性聚丙烯酰胺凝胶的引发系统孙新立＊孙海虹王友爱（河北师范大学生物系,石家庄０５００１６）关键词引发系统;转化率;聚合;酸性凝胶;成胶时间碱性聚丙烯酰胺凝胶电泳已经广泛应用于生化分析的各个领域。但酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳、过硫酸铵（ＡＰ）－...     

从非变性聚丙烯酰胺凝胶回收纯化DNA样本

介绍一种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收和纯化目标DNA片段的方法,经比较回收纯化前后PCR产物的电泳结果,表明该方法具有简单快捷和效率高的优点。     

六种疫霉菌体可溶性蛋白质和酯酶的聚丙烯酰胺凝胶平板电泳研究

本文对槐生疫霉、掘氏疫霉、樟疫霉、烟草疫霉、棕榈疫霉及辣椒疫霉等６种疫霉８１株菌菌体可溶性蛋白质和酯酶进行了聚丙烯酰胺凝胶平板电泳研究。结果指出,种间蛋白质图谱差异明显,种内菌株间基本一致。就酯酶图谱来说,种内菌株间存在一定差异,但种间差异更为显著。因此,本试验进一步支持槐生疫霉新种的建立。同时表明,菌体可溶性蛋白质电泳图谱在疫霉种的鉴定和分类上具有重要意义,而酯酶电泳图谱在一定程度上也有助于疫霉     

应用终末荧光产物的发光效应检测聚丙烯酰胺凝胶上的β-内酰胺酶

本文利用β-内酰胺抗生素经β-内酰胺酶水解后,产生终末荧光产物具有发光效应的原理,首次建立了一种检测聚丙烯酰胺凝胶电泳或等电聚焦电泳后凝胶上β-内酰胺酶的方法。该法快速、简便、灵敏、经济,便于推广,实验证明这种方法可以代替传统的Nitrocefin染色法。     

疫毒蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳

对北京、河北、青海、山东、湖北、广东等地不同寄主上收集的,属于Phytophthora capsici, P. colocasiae, P. heveae, P. infestans, P. melonis P. nicotianae var. nicotianae和P.nicotianae var.parasitica 7个种和变种的17株菌的蛋白质,进行了聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的分析和比较,经多批次试验,7个种和变种各自恒定地呈现典型的蛋白质图谱,显示出种间的差异。其中P.infestans占11株,它们虽采自不同地区和寄主,又分属5个生理小种,经多次电泳,电泳图谱基本相同,但不同菌株存在一些差异。同一株菌,培养条件对电泳图谱影响不大,不论是培养在含苹果酸盼培养基上,还是培养在延胡索酸培养基上,电泳图谱基本一致,只是电泳材料必须新鲜。     

疫霉蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳

对北京,河北、青海、山东、湖北、广东等地不周寄主上收集的,属于 Phytophthoracapsici,P．Colocasiae,P．Heveac,P．Infestans, P．Melonis P．Nicotianac var. nicotianae 和 P．Nicotianae var. parasitica 7个种和变种的17株菌的蛋白质,进行了聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的分析和比较,经多批次试验,7个种和变种各自恒定地呈现典型的蚤白质图谱,显示出种间的差异。其中 P. infestans 占11株,它们虽采自不同地区和寄主,又分属5个生理小种,经多次电泳,电泳图谱基本相同,但不同菌株存在一些差异。同一株菌,培养条件对电泳图谱影响不大,不论是培养在含苹果酸的培养基上,还是培养在延胡索酸培养基上,电泳图谱基本一致,只是电泳材料必须新鲜。     

聚丙烯酰胺凝胶碎块吸收洗脱法浓缩病毒的实验研究及应用

本文报告聚丙烯酰胺凝胶(PAG)碎块吸收洗脱法在浓缩新城鸡瘟病毒(NDV)和人轮状病毒(HRV)方面的实验研究及应用。我们通过一次和二次浓缩,分别将NDV感染的鸡胚尿液稀释液浓缩了12.1倍和90.2倍,血凝滴度相应增高,总病毒回收率分别达到90.2％84.9％。用二次浓缩后的含HRV粪便上清液进行RNA PAGE银染色检测,获得了HRV RNA电泳型检测阳性稀释度提高32倍左右的结果。据此,采用这一方法,对临床RNA PAGE检测阴性的33例婴幼儿腹泻粪便进行PAG浓缩处理后再检测,发现有12例转为阳性,阳转率为36.4％。从而,使HRV总检出率由67％增至79％。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的快速脱色方法

以牛血清白蛋白为材料进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),凝胶固定后,用考马斯亮蓝R-250染色后比较传统脱色液(冰乙酸-甲醇溶液)和不同盐溶液(NACL、KCL、CUCL2)的脱色效果的结果表明:PAGE和SDS-PAGE胶,0.25和0.5MOL·L-1NACL,在70℃(PAGE)、50℃(SDS-PAGE)下脱色,约2￣4H,效果好,灵敏度高,背景低。     

聚丙烯酰胺防治水土流失的效果

辽宁省是水土流失比较严重的省份之一。全省共有坡耕地 1 758× 10 6 ｈａ ,1 2 91× 10 6 ｈａ存在着不同程度的水土流失 ,占坡耕地面积的 73 5%。其中中度侵蚀面积约 5 2 33× 10 5ｈａ ,强度侵蚀面积约1 193× 10 5ｈａ[1] 。水土流失带走了大量的表土和水分养分 ,降低了耕地质量 ,破坏了生态环境 ,致使作物产量低而不稳。情况严重的可造成切沟断垄 ,被迫弃耕 ,特别是遇到丰水年 ,沟壁不断扩张 ,沟壑越来越深 ,面积越来越大 ,致使大部分坡耕地遭到严重破坏 ,制约了山区经济的发展。工程措施、生物措施、农业措施等治理水土流失的传统方法…     

角蛋白/海藻酸钠/聚丙烯酰胺水凝胶皮肤敷料的制备及创口修复研究

为了获得更为理想的皮肤创口修复敷料,在海藻酸钠(SA)和聚丙烯酰胺(PAM)水凝胶的基础上复合人发角蛋白(KTN),制得KTN/SA/PAM水凝胶皮肤敷料.用电子万能测试机、扫描电子显微镜等对其进行表征,结果显示,KTN/SA/PAM水凝胶皮肤敷料拉伸强度为42.41 kPa,弹性模量11.19 kPa,接近人体皮肤组...     

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳中的问题及其解决方法

0’Farred”位立的双向聚丙烯酸胺凝胶电泳（简称双向电泳）方法,已被广泛地应用于动物、植物和微生物蛋白质的分析和制备。双向电泳中的第一向等电聚焦和第二向聚丙烯酸胺凝胶电泳均是复杂的化学和物理学的变化过程。目前虽能用两性电解质、胶的孔径和电场变化解释上述部分过程＊,”,但仍有许多细节不清楚,在实验中,常会遇到一些实际问题。Duncan等［’增讨论了第一向的电极缓冲液对双向电泳结果的影响。XIWkwootl等［’j简单讨论了蛋白质样品液中的核酸、盐和脂等杂质对蛋白质电泳行为的影响。但至今尚没有系统地讨论在双向电泳实…     

检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的3种染色方法比较

用考马斯亮蓝染色、银染色、铜染色等 3种方法对同一种蛋白质染色的灵敏度、快速性进行比较 ,得出 3种蛋白质染色方法的优缺点 ,为蛋白质电泳染色合理选用不同方法提供依据     

聚丙烯酰胺微生物降解研究进展

聚丙烯酰胺是一类重要的水溶性高分子聚合物,已广泛应用到工农业生产的各个领域和人们的日常生活中。由于具有良好的理化特性,一直被认为是安全、无毒和稳定的,所以有关其在自然界中的降解及其可能产生毒性的研究在很长一段时期内被忽视。事实上,聚丙烯酰胺在环境中的残留、迁移、降解对环境具有潜在危害性。目前,其应用范围和规模正呈现快速增长趋势,而其研究多集中在其合成和应用方面,对聚丙烯酰胺的降解尤其是生物降解研究极少。