酶工程

900695 节杆菌青霉素-G-酰基转移酶基因在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的表达[英]/Ohashi, H. …∥ Appl. Environ. Microbiol. -1989, 55(6).-1351-1356[译自DBA,1989,8(15),89-09222] 将节杆菌Arthrobacter viscosus 8895GU克隆的青霉素-酰胺酶基因亚克隆到载体中。描述了重组体质粒pHYM-2、pHYM-3、pHYM-4、pHYM-8和     

Marc-145细胞源DDX6基因的克隆及生物信息学分析

[目的]克隆并生物信息学分析Marc-145细胞源DDX6基因。[方法]根据Gen Bank预测的猴源DDX6基因序列(XM_008021118)设计合成特异性引物,通过RT-PCR从Marc-145细胞中扩增DDX6基因CDS区并进行克隆和生物信息学分析。[结果]Marc-145细胞源DDX6基因CDS全长1 452 bp,编码483个氨基酸。DDX6蛋白有4个基序,含有DEAD-like解旋酶超家族结构域和C端结构域。二级结构主要以α-螺旋(37. 27%)和无规则卷曲(36. 44%)为主。同源性及系统进化树分析结果表明Marc-145细胞源与人DDX6核苷酸同源性最高,亲缘关系最近。[结论]DDX6分子在同种属之间具有高度保守性,提示Marc-145细胞源DDX6可能与人源DDX6分子具有相似的功能和作用。     

抗生素和干扰素

950112 由产黄,I『一生产青霉素的生物化学和分子遗传学[会,英2/Martin,J.F.I Ann.N.Y.Acad.s01.-1991,646.-132~201[译自DBA,1992,儿(13),92-07338_'] 将产黄青霉AS-P-78酰基辅酶A;6一氨基青霉烷酸一酰基转移酶纯化至均质并鉴定之。用含粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)PY r4基因和产贝菏霉pyrG基因的质粒载体作选择标记,可获得产黄青霉的高频转化。克隆、表达并测序了产黄青霉AS-P-78的异青霉素-N-合酶基因,还克隆及测序了该菌的酰基辅酶A t 6一氨基青霉烷酸一酰基转移酶和ACV-合成酶基因。产黄青霉DNA的噬菌体EMBL3基因文库…     

疫苗

910844 用甲基营养的多形汉森酵母合成和分泌乙型肝炎中表面抗原[英]/Shen,s.H.…// Gene.-1989,84(2).-303～309[译自DBA,1990,9(15),90-08731]应用甲基营养的多形汉森酵母(Hansenula polymorpa)作生产和分泌异源蛋白的寄主,克隆了乙肝病毒中表面抗原(preS2-HBsAg)基因,该基因在甲醇氧化酶基因的甲醇调节启动子控制下表达.     

文摘

010 0 51炭疽杆菌水肿因子基因的克隆与序列测定 [中 ]/袁斌… / /生物技术通讯 .- 2 0 0 0 ,11( 4 ) .- 2 4 9～ 2 51采用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)从炭疽芽孢杆菌减毒株Ｙｂ1中扩增其水肿因子 (ＥＦ)的编码区基因 ,将其克隆至ｐＧＥＭ -Ｔ载体中 ,并分步测定其序列。序列测定表明 ,该基因长 2 30 1ｂｐ ,编码 2 67个氨基酸 ,与已报道的Ｓｔｅｒｎｅ标准株的ＥＦ基因完全一致。 (紫玉 )0 10 0 52人骨形态发生蛋白 - 7全长ｃＤＮＡ的克隆及序列测定 [中 ]/饶亚兰… / /生物技术通讯 .- 2 0 0 0 ,11( 4 ).- 2 52～ 2 53从人胎儿肾中提取总ＲＮＡ…     

基因工程

<正> 853411 枯草芽孢杆菌精氨酸基因以开始不稳定的杂合质粒形式被克隆到大肠杆菌后的转录分析[英]/Mann,N.H.…∥Mol.Gen.Genet.-1984,197(1).-75～81[译自 DBA,1984,3(25),84-11993]用鸟枪法在大肠杆菌中将枯草芽孢杆菌染色体 DNA 的 EcoR Ⅰ片段克隆到 pBR322     

根据R基因保守区分离小麦R基因类似序列

用根据核苷酸结合位点(nucleotide binding site, NBS)和丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶域设计的2对简并性引物,以小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系的cDNA为模板进行PCR扩增.扩增产物克隆到pGEM-T载体中,经测序,共获得具有NBS结构域特征的片段克隆9个和具有丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶域特征的片段的克隆1个.将克隆之间核苷酸序列同源性高于90%的克隆归为一类,把9个NBS片段分为6类.这6类抗病基因类似序列(resistance gene analogs, RGA)均具有阅读框,并与已克隆的小麦抗条锈病基因Yr10、大麦抗白粉病基因Mla1和Mla6、拟南芥的抗病基因RPS2以及其他一些抗病基因在NBS保守区内具有高度的同源性.用小麦中国春缺体-四体初步将它们分别定位于小麦第一、第二和第五部分同源群上.进一步用5′-RACE技术获得RGA N5的5′-端,发现其编码产物的N端还具有6个亮氨酸拉链(leucine zipper, LZ),与RPS2的N-端有较高同源性.     

金色链霉菌DM-1全基因组序列测定及去甲金霉素合成基因簇分析

金色链霉菌Streptomyces aureofaciens DM-1是去甲基金霉素的高产菌株。通过Genome Sequencer FLX系统进行测序,得到一条完整的线性基因组序列,长度为6 824 334 bp,GC含量为72.6%。结合软件glimmer 3.02、Genemark和Z-Curve program进行基因预测,最终在其基因组中鉴定出6 431个基因。应用AntiSMASH软件预测其基因组中存在28个次级代谢生物合成基因簇,其中包含了去甲基金霉素生物合成基因簇。其中甲基转移酶CtcK因移码突变提前终止翻译,很可能是去甲基金霉素相对金霉素 (CTC) 缺失一个甲基的根本原因。研究结果为S. aureofaciens DM-1的功能基因组学和去甲基金霉素高产菌株育种提供了研究基础。     

原核表达载体pET30a/ATRX-C_(2193-2492)的构建与诱导表达

[目的]构建大鼠ATRX抗原端氨基酸序列的原核表达载体,为进一步制备ATRX多克隆抗体以及探讨ATRX蛋白在HPV16致宫颈癌中的作用奠定基础。[方法]以IF-GFP-ATRX质粒为模板,PCR扩增获得ATRX-C_(2193-2492)基因片段,并克隆至p ET30a(+)空载体上,转化E.coli BL21感受态细胞,构建原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),经PCR、双酶切以及测序鉴定。将构建好的质粒p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)转化,经IPTG诱导表达,利用镍离子亲和层析法纯化6His-ATRX-C_(2193-2492)蛋白。[结果]成功获得900 bp的ATRX-C_(2193-2492)基因片段并构建了原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),且该载体能在E.coli中诱导表达分子量约34 k Da蛋白产物。[结论]原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)能成功诱导表达分子量约34 k Da的ATRX-C_(2193-2492)蛋白,该蛋白纯化产物能为后续ATRX多克隆抗体的制备提供实验基础。     

水稻EPSP合酶基因的克隆、结构分析和定位

5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶是芳香族氨基酸合成途径中的一个关键酶, 该基因在植物抗除草剂基因工程中具有重要的应用价值. 根据水稻EPSP合酶基因的EST序列设计探针, 在水稻TAC基因组文库中筛选到16个阳性克隆. 对阳性克隆E11进行亚克隆, 由此获得了由3661核苷酸组成的水稻EPSP合酶基因全序列. 序列分析和同源性比较揭示, 该基因由8个外显子和7个内含子组成. 以窄叶青8号/京系17组合构建的DH群体和分子图谱将水稻EPSP合酶基因定位于水稻第6条染色体的上端.     

拟南芥AST基因的精细作图

拟南芥(Arabidopsis thaliana(L.)Heynh.)ast(anthocyanin spottedtesta)突变体是由碳离子辐射诱导产生的与花青苷生物合成有关的基因突变体,受单隐性核基因控制.根据拟南芥数据库中的SNPs(single nucleotide polv-mophisms)序列和插入/缺失多态性(insertion/deletion polymorphisms)序列,设计了一系列分子标记.采用图位克隆策略,应用这些分子标记完成了对拟南芥AST基因的精细作图,成功地将AST基因定位到BAC克隆T13M11上,初步认为该BAC克隆中的基因T13M11.8可能是AST基因.该基因的DNA序列长1432bp,含有6个外显子和5个内含子,编码的蛋白与花青苷生物合成途径中的二氢黄酮醇-4-还原酶有较高的同源性.将进一步通过功能互补实验验证图位克隆的结果.     

文摘

010 0 93人可溶性肿瘤坏死因子受体Ｉ型基因在黑曲霉中的表达[中 ]/李敏… / /科学通报 .- 2 0 0 1,4 6( 1) .- 5 7～ 60将人可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ型 (ｓＴＮＦＲＩ)基因插入黑曲霉 (Ａ .ｎｉｇｅｒ)融合蛋白基因的表达质粒 ｐＩＧＦ中 ,融合之处设计类胰蛋白酶 (ＫＥＸ2 )加工位点 ,构建融合表达载体ｐＨＢＣ。以 ｐＨＢＣ转化黑曲霉胞外蛋白酶缺失株Ａ .ｎｉｇｅｒ3 .795 - 1- 2 3 ,通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定阳性克隆Ａ .ｎｉｇｅｒ3 .795 - 1- 2 3重组菌株的蛋白电泳显示有特异表达带 ,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ证实该分泌…     

医药其它

901306白细胞介素一6/B一细胞刺激因子一2及其受体的cDNA的分子克隆〔会,英]/Hirano,T.…1/ Ann.N.Y.Acad.Sei一1989,557一167一180[译自DBA,1989,8(19),89一11320】 在大肠杆菌内克隆了人白细胞介素一6基因.从构建自T一淋巴细胞TCL一Nal细胞培养物的poly一A RNA的基因库分离到一个克隆.使用重组质粒pBF2.38转染COS一7细胞培养物.通过使用多克隆抗体的亲和层析法纯化产自这些细胞的白细胞介素一6.该插人物的DNA序列含有一个大开读框.白细胞介素一6被合成为一个212个氨基酸的前体(含有单一肚序列).人白细胞介素一6受体基因被克…     

植物遗传工程

961449 葡萄多酚氧化酶的分子分析及PPO表达的反义介导抑制的研究[英]/Martinez,M.V.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1995,209Meet.,Pt.1.-AGF022[译自DBA,1995,14(22),95-13271] 降低多酚氧化酶(PPO)表达的新方法是通过导入反义PPO基因构建物产生葡萄转基因植株。克隆并测序的红色葡萄品种中的PPO基因,并利用葡萄     

牙菌斑培养菌群宏基因组文库构建及抗生素耐药基因筛选

[目的]构建牙菌斑培养菌群宏基因组文库,筛选牙菌斑生物膜中细菌的抗生素耐药基因.[方法]采集20例无龋健康人的集合牙菌斑并进行厌氧培养.提取牙菌斑培养菌群宏基因组构建Fosmid文库.用卡那霉素、四环素及氨苄西林对文库进行筛选,并对筛选到的抗性Fosmid克隆进行末端测序、亚克隆构建、亚克隆测序和序列分析.[结果]构建了牙菌斑培养菌群宏基因组Fosmid文库,插入片段长度在36-48 kb间约有15 120个克隆,插入片段长度小于36 kb的约有3 360个克隆.筛选获得一个氨基糖苷类双功能修饰酶AacA-AphD基因、一个核糖体保护蛋白型四环素耐药基因tet (M)及一个C家族β-内酰胺酶基因.[结论]证实了可以通过构建宏基因组文库的方法来筛选牙菌斑培养菌群中的抗生素耐药基因.     

生物防治

931716苏云金芽孢杆■6一内毒素片段的基因扩■槭达[英]/Roy,P./Biochem.Biophys.Res.Commun.-1992,187(2).-641--,64T[译自D:l}A,1992,11(23),92-13064] 用两种合成的寡核苷酸作为扩增晶体蛋白CryIA(b)基因N一端部分聚合酶链反应的楱板,这两种合成的寡核苷酸分别对苏云金芽孢杆菌HD一1变种kurstaki~体蛋白基因5,端和630氯基陵区有特异性。蛋白的N。端部分负责蛋白的昆虫特异性和毒性。用整个细菌作模板,得到一个1.9kb的DNA,r段,将之克隆到质粒pUCl9中。枉大肠杆菌DH一5口转化体中没有测到免疫活性晶体蛋白的表达。将扩增的基因转…     

一个小麦丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶基因的克隆和分析

用mRNA差异显示技术在含有抗白粉病基因Pm21的小麦(Tri ticum aestivum L.) -簇毛麦(Haynaldia villosa) 6VS /6AL易位系92R137中分离与抗白粉病相关的基因,获得一个命名为TaPK1的全长cDNA克隆.序列分析表明,它与大豆(Glycine max (L.) Merr.)蛋白激酶基因GmPK6高度同源.经推测,TaPK1 编码416个氨基酸的多肽,属丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶家族,并具酪氨酸激酶特性.TaPK1是从小麦中分离的新基因.     

抗Ⅰ型马立克氏病毒sorf2蛋白的多克隆抗体制备及其特异性鉴定

[目的]制备高效价鼠和兔抗Ⅰ型马立克氏病毒(Marek's disease virus,MDV) sorf2蛋白的多克隆抗体并对其特异性进行鉴定.[方法]以Ⅰ型MDV GX0101为模板,利用PCR扩增sorf2基因,分别克隆进原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21 (Rosetta),经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导后进行融合蛋白的表达和纯化.用纯化的融合目的蛋白常规免疫6-8周龄Balb/c小鼠和成年新西兰大白兔,制备抗sorf2蛋白的多克隆抗体.用Western blot和间接免疫荧光试验鉴定多克隆抗体的特异性.[结果]Ⅰ型MDV的sorf2基因在原核表达载体中能够正确表达,免疫小鼠和兔后能获得与sorf2蛋白发生特异性反应的高效价的多克隆抗体.[结论]制备的抗sorf2蛋白的多克隆抗体能够特异的鉴定MDV sorf2基因缺失株,有效的区分MDV疫苗株HVT(FC-126)与Ⅰ型MDV毒株,用于临床MDV野毒的分离鉴定.