牙龈卟啉菌基因文库的建立

目的 通过构建牙龈卟啉菌47A－1的基因文库,为进一步深入研究牙龈卟菌的基因结构鉴定基础。方法 选择Sau3AI对牙龈卟啉菌47A－1染色体DNA作酶切,获得的DNA片段与BamBI酶解的质粒pUC18作体外连续并转化大肠杆菌JM109,在含有IPTG、X-gal和氨苄青霉素的LB琼脂平板上,用蓝、白筛选出选出含重组质粒的大肠杆菌扩增并分析。结果 得到的重组质粒经酶切、电泳分析,证实包含牙龈卟啉菌47A－1的插入片段。结论 牙龈卟啉菌47A－1的基因文库构建成功。     

牙龈卟啉单胞菌蛋白酶及疫苗的研究进展

牙龈卟啉单胞菌 (P g) ,革兰阴性厌氧菌 ,是人类牙周炎的主要致病菌[1] 。动物实验表明它在小鼠、大鼠和灵长类动物的龈下定植与牙周炎的发生和进展相关。P g可以调整真核细胞信号转导途径 ,为了满足新陈代谢的需要 ,P g基因表达的调节可以控制在转录水平。证据表明 ,P g的感染会导致严重的全身系统疾病如心血管疾病和分娩早产儿。P g含有大量毒性因子[2 ] ,如菌毛 ,血凝素[3 ] ,脂多糖等 ,其中Arg、Lys样半胱氨酸蛋白酶在牙周致病作用中占据了一个重要地位 ,他们通过激活宿主前体酶 ,例如 :血纤维蛋白酶原 ,或通过暴露细胞隐位及改变血…     

牙龈卟啉菌特异性克隆探针的筛选

目的 从牙龈卟啉菌47A－1的基因文库中筛选出特异性片段,制备成特异性克隆探针,方法 将牙龈卟啉菌47A－1基因文库中的重组质粒大量扩增和纯化,采用地高辛标记法制备成探针,与口腔中14种常见细菌DNA进行杂交鉴定,检测其特异性,从中筛选出对牙龈叶卟啉菌具有特异性的克隆探针。结果 重组质粒pZJ1与牙龈卟啉菌47A－1杂交,而与其它细菌DNA均不杂交,包括牙龈卟啉菌ATCC33277和W83。结论 重组质粒pZJI可制备成高特异笥克隆探针。     

牙龈卟啉菌内毒素的化学组成和SDS—PAGE的特性分析

应用气液色谱法对牙龈卟啉菌脂多糖（Ｐｇ－ＬＰＳ）和大肠杆菌脂多糖（Ｅ－ＬＰＳ）的单糖和脂肪酸进行了分析和比较。Ｐｇ－ＬＰＳ主要含有甘露糖、葡萄糖、氨基葡萄糖、半乳糖和鼠李糖。Ｅ－ＬＰＳ单糖组成与Ｐｇ－ＬＰＳ基本相似,但缺乏鼠李糖。Ｐｇ－ＬＰＳ主要含有羟基十五烷酸和羟基十七烷酸等奇数碳原子脂肪酸,Ｅ－ＬＰＳ则以羟基豆蔻酸、豆蔻酸和月桂酸等偶数碳原子脂肪酸为主。Ｐｇ－ＬＰＳ含有甲基化脂肪酸,Ｅ－ＬＰＳ则缺如。实验结果提示,Ｐｇ－ＬＰＳ和Ｅ－ＬＰＳ化学组成上的差异可能导致二者的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱明显不同。     

牙龈卟啉单胞菌相关致病因子的研究进展

牙龈卟啉单胞菌是一种生长于口腔内的革兰阴性厌氧茵.它能够利用脂多糖、荚膜多糖、菌毛、牙龈蛋白酶等一系列致病因子,侵袭局部牙周组织并逃避宿主的免疫防御机制,是诱发牙周炎的重要因素之一,引起了学者们的广泛关注.因此,探讨牙龈卟啉单胞菌的致病因子对于牙周炎的防治具有重要意义.     

牙龈卟啉菌脂多糖诱生的IL—1,TNF和PGE的骨吸收活性

牙龈卟啉菌脂多糖（Ｐｇ－ＬＰＳ）作用于人外周血单个核细胞或人牙龈组织细胞后,能诱导此等细胞分别产生ＩＬ－１、ＴＮＦ和ＰＧＥ。经原子吸收光谱分析后证实,所诱生的ＩＬ－１、ＴＮＦ和ＰＧＥ均具有使大鼠头盖骨脱钙的作用,消炎痛未能阻断该骨吸收活性。ＰＧＥ的骨吸收活性最强,ＩＬ－１和ＴＮＦ的骨吸收活性相似。Ｐｇ－ＬＰＳ也能直接作用于大鼠头盖骨,使钙离子释放量明显增加,但该活性能被消炎痛所阻断。研究结果表明,Ｐｇ－ＬＰＳ可直接或间接地通过ＩＬ－１、ＴＮＦ和ＰＧＥ等发挥强大的骨吸收作用,故Ｐｇ－ＬＰＳ是牙周炎时牙槽骨吸收的主要因素之一     

健康青少年口腔优势菌对牙龈卟啉单胞菌拮抗作用的实验研究

目的分析健康青少年口腔优势菌（简称S．t2003）与牙龈卟啉单胞菌的相互关系。方法运用定量混合培养技术,以血链球菌标准株和变形链球菌作为对照。结果S．t2003与血链球菌标准株都对牙龈卟啉单胞菌有很强的抑制作用,但S．t2003的抑菌强度强于血链球菌的标准株;另外S．t2003和血链球菌标准株对牙龈卟啉单胞菌的抑制作用随其相对浓度的变化而改变,显示了S．t2003和血链球菌标准株与牙龈卟啉单胞菌的相互拮抗的关系。结论S．t2003对牙龈卟啉单胞菌具有较强的拮抗作用。     

COPD患者口腔和呼吸道内牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体和福赛坦菌的同源性分析

目的分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者口腔和呼吸道内牙龈卟啉单胞菌(Pg)、齿垢密螺旋体(Td)和福赛坦菌(Tf)的同源性,探讨牙周炎与COPD之间的关系。方法收集53例急性加重期COPD患者,采集龈下菌斑及呼吸道分泌物,同时进行牙周指标的检查。通过16S r DNA序列分析,构建患者口腔及呼吸道内Pg、Td和Tf的系统进化树,进行同源性分析。结果 53例患者中,5例患者口腔和呼吸道内Pg具有同源性,6例患者Td具有同源性,3例患者Tf具有同源性。结论 COPD患者口腔和呼吸道内Pg、Td和Tf具有同源性,COPD患者呼吸道内的这3种病原体均来自于口腔。     

多肽内切酶鉴定牙龈卟啉单胞菌血凝素2结合位点

目的利用多肽内切酶分析牙龈卟啉单胞菌凝血素2(Porphyromonas gingivalishemagglutinin-2,PgHA-2)与氯化血红素结合位点的氨基酸序列。方法Endoproteinase Lys-C多肽内切酶水解获得与氯化血红素结合的功能性的多肽片段,质谱技术鉴定多肽片段的氨基酸序列。结果质谱鉴定与氯化血红素结合的多肽片段的氨基酸序列为YAVNDGFPGDHYAVMISK。结论进一步明确了HA-2与氯化血红素结合位点的氨基酸序列,为牙周病的预防和治疗方法的改进奠定基础。     

抗牙龈卟啉单胞菌血凝素2单克隆抗体的制备

目的制备抗牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)血凝素2(hemagglutinin-2,HA-2)的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。方法用重组HA-2(recombinant HA-2,rHA-2)免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞.用ELISA方法测效价。结果获得1株能够高效识别rHA-2的mAb,命名为4F11。此单克隆抗体的免疫球蛋白亚类为IgG1,效价达1?106。结论成功制备了重组牙龈卟啉单胞菌血凝素2的单克隆抗体mAb.将进一步用于牙龈卟啉单胞菌的诊断,并为牙周疾病的治疗研究奠定基础。     

牙龈卟啉单胞菌及其细胞外膜泡多克隆抗体的比较研究

分别制备牙龈卟啉单胞菌４７Ａ－ １ 及其膜泡的多克隆抗体,并用间接免疫荧光法对６７ 个临床标本进行检测。结果经统计学检验,两种抗体显著相关,Ｐ＜ ０．０１ ,符合率为８２．１ ％ ;膜泡抗体的检出率高于菌体抗体,Ｐ＜０．０５ ;膜泡抗体相对于菌体抗体的敏感性为９３．５ ％ 。膜泡抗体与牙龈卟啉单胞菌以外的其他口腔细菌无交叉反应,说明膜泡抗体的特异性较强。     

牙龈毒素的酶动力学变化及其意义

本文采用酶动力学测定法比较了二株牙龈卟啉菌Ｐｇ所独有的毒力成份——牙龈毒素的酶代谢特征以及与其代谢之间的关系。结果显示①牙龈毒素的酶合成在细菌生长早期就已开始,并存在于整个细菌生长周期;②牙龈毒素从菌体内释放到周围微环境中的动态变化基本上与细菌的生长周期同步;③ＰｇＥＶ的形成是存活细菌的一个特征,而不是老化的细菌或非生长期细菌的代谢产物;④ＰｇＥＶ中含有较高活性的牙龈毒素,由于ＥＶ体积小、所含毒力成份多和胞膜完整等的特点,使牙龈毒素更具有扩展细菌毒力作用的范围和强度的能力     

牙龈紫质单胞菌内毒素对成纤维细胞和牙龈组织的侵入及损害

应用免疫组化方法证实５６０％的成年人牙周炎（ＡＰ）患者的牙龈组织的成纤维细胞中存在牙龈紫质单胞菌内毒素（Ｐｇ－ＬＰＳ）,正常的牙龈组织样本无一例阳性。以免疫胶金技术发现Ｐｇ－ＬＰＳ在５ｍｉｎ内即能侵入体外培养的小鼠成纤维细胞,至６０ｍｉｎ时可在细胞核内检出Ｐｇ－ＬＰＳ。Ｐｇ－ＬＰＳ检测阳性的小鼠成纤维细胞和ＡＰ患者牙龈组织的成纤维细胞的可出现相似的内质网扩张、膜旁核糖体颗粒脱落、线粒体的外膜或嵴消失等超微结构病变。实验结果表明,Ｐｇ－ＬＰＳ是ＡＰ的主要致病因子之一。     

RPC技术检测儿童龈炎中的卟啉单胞菌

根据牙龈卟啉单胞菌特异的纤毛亚单位蛋白结构基因,设计一对寡核苷酸引物,采用ＰＣＲ扩增了１３１ｂｐ特异片段,实验证明,ＰＣＲ直接检测临床标本中的牙龈卟啉单胞菌,不仅特异、敏感、而且快速,从而显示了较好的优越性。用该引物,分析牙龈卟啉单胞菌在儿童龈炎中的分布。经ＰＣＲ检测４６例龈下菌斑标本中的牙龈卟啉单胞菌,结果表明：２４例标本ＰＣＲ为阳性;对照组４６例标本中,牙龈卟啉单胞菌仅有５例为阳性,儿童龈炎中牙龈卟啉单胞菌的检出率明显高出正常组（ｐ＞０００５）。提示用ＰＣＲ检测儿童龈炎中的牙龈卟啉单胞菌具有重要意义。     

牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA基因型在牙周病患者中的分布情况

目的：探讨牙龈卟啉单胞菌FimA基因型在牙周患者的分布情况。方法：采用PCR技术对40例牙周患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌及其基因型进行检测。结果：牙龈卟啉单胞菌在牙周患者的牙周袋内检出率为87．5％,牙龈卟啉单胞菌FimA各基因型在牙龈卟啉单胞菌携带者的检出率分别为：I型22．9％,Ⅱ型60．0％,Ⅲ型17．1％,Ⅳ37．1％．V型未检出;基因I型在牙周袋内未单独检出,与基因Ⅱ型混合感染。结论：牙龈卟啉单胞菌FimA基因Ⅱ型和Ⅵ型是牙龈卟啉单胞菌在牙周病损部位的主要定植菌,两基因型可能与牙周病的发生发展有关。     

深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及序列分析

γ-亚麻酸（GLA,C183△     

核酸酶BN及SN基因的克隆和序列分析

分别从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aurcus)中提取染色体DNA,经HindⅢ酶解后PCR扩增获得Barnase(核酸酶BN)基因和Staphylococcal Nuclease(核酸酶SN)基因,并克隆到质粒pGEMTZ-f(+)上。序列分析表明,核酸酶BN的核苷酸序列与已发表的序列有99.3%的同源性,而与据此推测的氨基酸序列完全一致。核酸酶SN基因的核苷酸序列与已发表