用吸胀初期超微弱化学发光的方法快速检测水稻种子活力

用高灵敏度的单光子计数系统探测了不同贮藏年份的水稻 (OryzasativaL .)品种 80 72 2吸胀初期的超微弱化学发光 (ultraweakchemilumines cence,UCL)。观测到水稻种子吸胀初期 ( 0～ 30min)UCL强度与其老化程度呈负相关 ,水稻种子贮藏时间越长 ,萌发率越低 ,UCL的强度越弱 ,水稻种子UCL强度与萌发率呈极显著正相关。用灵敏的能与单线态氧 ( 1 O2 )反应产生化学发光的发光试剂MCLA ( 2 methyl 6 ( p methoxyphenyl) 3,7 dihy droimidazo[1 ,2 a]pyrazin 3 one) ,检测到吸胀初期水稻种子有单线态氧 ( 1 O2 )的生成 ,产生1 O2 的量与其萌发率呈高度正相关。水稻种子吸胀初期单线态氧的生成是超微弱化学发光的重要诱发因素之一。种子吸胀初期UCL的差异有望成为一种快速、定量、无损伤检测水稻种子活力的新方法。     

H2O2对红细胞抗原性与LPO影响的FCM研究

用流式细胞计(flow cytometry,FCM)测定H2O2损伤后的红细胞(RBC)与IgG的结合能力,并直接检测细胞自发荧光的变化,以研究H2O2对RBC抗原性和脂质过氧化(LPO)荧光产物生成的影响.结果表明RBC抗原性和自发荧光变化与H2O2浓度和作用时间有关,抗原性变化对H2O2更敏感,比引起自发荧光明显增强所需H2O2浓度低两个数量级;还发现了RBC抗原性和自发荧光的变化与细胞的散射光有相关性.     

MCLA为化学发光探针测定氧化低密度脂蛋白中维生素C诱导的单线态氧产生

以一种海萤荧光素类似物MCLA〔2 methyl 6 (p methoxyphenyl) 3,7 dihydroimidazo [1,2 a]pyrazin 3 one〕作为高灵敏且有选择性的化学发光探针 ,用化学发光的方法直接观测到了少量Cu2 氧化的低密度脂蛋白 (Ox LDL)中维生素C诱导的单线态氧 (1O2 )的产生。实验中通过叠氮化钠 (NaN3 )对MCLA介导的化学发光的猝灭作用进一步证实了上述体系中1O2的形成。根据实验观察的结果 ,分析了这一体系中1O2 形成的可能途径 ,认为首先是维生素C将Cu2 转变为还原态 ,而自身失去一个电子转变为维生素C自由基 ,从而刺激了过氧自由基和烷氧自由基的形成 ,过氧自由基的双分子反应很可能就是体系内1O2 产生的反应机制     

Rhizobium sp. N613胞外多糖的抗氧化活性

以铁氰化钾和铁离子为检测系统测定了Rhizobium sp.N613胞外多糖(REPS)对氧化物的还原力;H2O2和Fe2+为羟自由基生成系统检测了REPS对羟自由基的清除作用;邻苯三酚自氧化法检测了REPS对超氧阴离子的清除作用;并体外检测了REPS对H2O2引起的氧化溶血现象的抑制作用及对小鼠肝组织脂质过氧化损伤的保护作用。结果显示,REPS对氧化物具有明显的还原力,其对羟自由基的清除作用达到35.46%(多糖浓度为2mg/mL),对超氧阴离子的清除作用达到36.84%(多糖浓度为0.78mg/mL),对H2O2引起的氧化溶血现象的抑制作用达到43.84%(多糖浓度为1.14mg/mL),对小鼠肝组织脂质过氧化的保护作用达到34.46%(多糖浓度为1.14mg/mL),表明REPS具有良好的抗氧化作用,有着重要的应用价值。     

竹节人参皂苷对小鼠低氧／复氧损伤后抗氧化功能的影响

目的:观察竹节人参主要成分竹节人参皂苷对小鼠低氧/复氧损伤后抗氧化功能的影响.方法:将小鼠用药物处理后,建立小鼠低氧/复氧损伤模型,观察小鼠血液中ROS、SOD、MDA、CAT的变化.结果:竹节人参、竹节人参总皂苷均能降低小鼠ROS和MDA值,增强SOD和CAT活性,二者作用强度相似.结论:竹节人参和竹节人参皂苷对小鼠低氧/复氧脂质过氧化损伤均有一定的抗氧化作用.     

库克诺你果汁提取物体外清除自由基及抗氧化活性研究

本文对诺你果汁多糖、乙醇溶出物和乙酸乙酯萃取物体外对超氧阴离子(O2·)、羟自由基(·OH)、DPPH和脂质过氧化(LPO)的抑制作用进行了研究。超氧阴离子(O2·)由邻苯三酚自氧化产生;羟自由基(·OH)由Fenton反应产生;利用Fe2 诱发卵黄脂蛋白产生丙二醛(MDA),TBA法测定。所有测定均为分光光度法。结果表明,与已知抗氧化剂L抗坏血酸相比,乙醇溶出物和乙酸乙酯萃取物均有明显的捕捉自由基和抗氧化能力,而多糖捕捉自由基和抗氧化能力很低,且对O2·没有抑制作用,反而会增加其生成速度。     

超声波提取的当归多糖化学修饰及其抗氧化活性研究

采用超声波辅助法从当归中提取水溶性当归粗多糖(ASP),经过4种化学修饰分别得到硫酸化当归多糖(S-ASP)、磷酸化当归多糖(P-ASP)、乙酰化当归多糖(Ac-ASP)、羧甲基化当归多糖(C-ASP)。通过红外光谱对化学修饰前后ASP的结构进行表征,并进行抗氧化活性和清除自由基能力的测定,以获得一种抗氧化活性较强的当归多糖。结果显示:经化学修饰后的ASP分别具有相应的特征吸收峰,表明当归多糖的4种化学修饰均已成功;经化学修饰的4种当归多糖总还原能力均弱于未修饰多糖,且清除羟基自由基(·OH)的能力无明显变化,但清除1,1-二苯基-2-苦苯肼(DPPH·)自由基和抑制Fe2+诱发的脂质过氧化反应的能力有所增强,其中P-ASP清除超氧阴离子(O2·-)自由基的能力最强;Ac-ASP抑制Fe2+诱发的脂质过氧化反应的能力最强,且均呈现出一定的量效关系。本实验结果为当归多糖的进一步研究与开发利用提供了一定的科学依据。     

UVA对斜纹夜蛾SL细胞损伤研究

目的:研究了不同剂量长波紫外光(UVA)对斜纹夜蛾细胞(Spodoptera litura,SL)活力的影响及其机理。方法:四唑盐比色实验(MTT)法测定UVA对离体培养的SL细胞的细胞毒力;流式细胞术(FCM)检测UVA处理后SL细胞内活性氧水平(ROS)和线粒体膜电位变化;1%琼脂糖凝胶电泳检测UVA处理后SL细胞DNA损伤情况。结果:48 KJ/m2剂量UVA处理细胞后,细胞增殖抑制率明显上升,且增殖抑制率与UVA剂量呈正相关。12 KJ/m2UVA处理后2 h细胞内ROS水平显著升高,且与UVA剂量呈正相关。与2 h相比,相同剂量UVA处理后24 h和48 h的ROS水平有所降低。在144 KJ/m2剂量UVA处理下,细胞线粒体膜电位呈降低-恢复-再降低趋势。DNA琼脂糖凝胶电泳表明,不超过144 KJ/m2剂量UVA对细胞DNA不出现细胞凋亡典型症状的DNA ladder。结论:24 KJ/m2UVA是进行SL细胞光活化研究的最佳实验剂量。     

植物生理学实验教学中H_2O_2可视化检测方法的改进

活性氧（reactive oxygen species,ROS）,如超氧阴离子自由基（O2-·）、羟自由基（·OH）和过氧化氢（H2O2）均是植物尤其是高等植物在有氧代谢过程中产生的,     

鱼藤酮诱导线粒体轻度损伤细胞氧化应激时硫氧还蛋白转录水平降低

观察鱼藤酮诱导的线粒体轻度损伤细胞氧化应激时硫氧还蛋白转录水平的变化,探讨细胞氧化损伤的可能机制。通过荧光素发光法检测ATP生成、细胞内活性氧(ROS)水平的变化,流式细胞术检测线粒体膜电位,了解低剂量鱼藤酮对线粒体功能的影响;继而用H2O2诱导细胞氧化损伤,MTT法检测细胞活性,观察正常及线粒体缺陷细胞氧化应激时,胞内硫氧还蛋白(Trx)mRNA水平的变化。结果表明,鱼藤酮以剂量依赖方式抑制线粒体ATP的产生、降低线粒体膜电位,而细胞内ROS水平增高;当线粒体损伤细胞氧化应激时胞内Trx mRNA水平降低,提示鱼藤酮诱导线粒体轻度损伤细胞抗氧化能力降低与Trx转录受到抑制有关。     

叶绿体光合代谢中活性氧的产生与清除

有氧代谢不可避免产生活性氧(ROS),叶绿体的PSI和PSII反应中心均是ROS产生的主要位点。叶绿体产生的ROS主要有超氧阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(.OH)和单线氧(1O2),其中在PSI产生的O2-将进一步产生H2O2和.OH,而1O2产生在PSII。正常生理代谢条件下,叶绿体内抗氧化系统和光能吸收利用的调节保持活性氧产生和消灭的平衡,不会影响植物的正常生理功能。     

H2O2诱导的线粒体损伤神经元内硫氧还蛋白 mRNA水平的变化

线粒体缺陷和氧化应激参与了神经退行性疾病的发病机制.叠氮钠(NaN3)是线粒体细胞色素C氧化酶(COX)的特异性抑制剂,能诱导线粒体缺陷.本实验通过细胞活性检测(MTT法),形态学观察,分析H2O2对原代培养的正常神经元及NaN3诱导的线粒体缺陷神经元的损伤作用的差异.并通过RT-PCR半定量法检测H2O2损伤后两类神经元内硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)mRNA水平的变化,以阐明细胞内这一重要氧化还原调节蛋白在神经元损伤时的作用机制.实验表明,在正常神经元内,H2O2的损伤对Trx表达量的改变似乎不明显;而线粒体缺陷神经元内Trx的表达量下降,且对于H2O2的损伤具有浓度、时间依赖性.提示在线粒体功能缺陷神经元中,Trx似乎发挥更重要的作用.     

活性氧诱发人类11号染色体基因突变

对体外产生的和内源性刺激产生的活性氧 (ROS)诱发人类 11号染色体 (Hchr 11)基因突变规律及其突变谱进行研究 .体外羟自由基 (·OH)用过氧化氢 (H2 O2 )与Fe2 + 反应产生 ,并用化学发光(CL)进行相对定量分析 ;内源性ROS用佛波醇酯 (PMA)刺激人外周血白细胞产生 ,并用CL和特异性抗氧化物检测和鉴定 ;用包含单条Hchr 11的人 中国仓鼠卵巢细胞 (AL)为靶 ,经CD59表面抗原抗体筛选突变细胞克隆 ,研究ROS诱发的Hchr 11基因突变 ;突变克隆细胞DNA用Hchr 11上 5种标志基因引物进行多重PCR分析 ,结合琼脂糖凝胶电泳绘制基因突变谱 .结果表明 ,体外ROS可诱发Hchr 11基因突变 ,且·OH诱发基因突变的能力明显强于H2 O2 ,两者的突变谱也存在明显差异 ;PMA可刺激人外周血白细胞产生大量的多种ROS ,并诱发Hchr 11基因突变 ,突变谱综合了H2 O2 和·OH的所有特征 ;一些抗氧化物对内源性产生的ROS诱发Hchr 11基因突变有明显抑制作用 .提示体外和内源性ROS可诱发Hchr 11基因突变 ,不同的活性氧分子诱发的基因突变可能具有特异性     

氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞活性氧/活性氮的动力学

探讨不同条件下在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)对U937源巨噬细胞活性氧/活性氮(ROS/RNS)动力学变化的影响。通过观察Ox-LDL急性和慢性作用下细胞内一氧化氮(NO)、超氧阴离子(O2-·)和ROS等动力学变化,发现Ox-LDL都能显著诱导细胞内NO和O2-·的升高,且在急性刺激时NO的升高显著高于O2-·。此外,还观察到12h时ROS显著升高(P<0.01),而在24h时却明显下降,但仍显著高于对照细胞(P<0.01)。由此表明,在早期泡细胞形成的不同时间,调节相应自由基的代谢有助于减轻早期动脉粥样硬化的炎症反应。     

UVA照射通过诱导HO-1的表达对细胞产生保护作用

长波紫外线A(UVA,320～400nm)照射皮肤后可产生活性氧族(reactive oxygen species,ROS),导致细胞损伤或免疫抑制,还能增强UVB的损伤作用。但也有研究表明,UVA照射不会产生免疫抑制,它可通过诱导血红素氧合酶1(HO-1)的表达减轻UVB照射引起的免疫抑制效应,从而对细胞产生保护作用。由于UVA照射引起的损伤或保护作用尚存在很大争议,本文主要结合近年来的相关研究,概括了适量UVA照射引起的免疫改变以及相关研究,总结了UVA照射诱导HO-1表达所发挥的细胞保护作用,尤其是HO-1的抗氧化和免疫保护作用,这将为深入了解UVA照射的反应机制和新型防晒剂的应用提供一定的指导意义。     

超氧阴离子自由基对大鼠脑皮层神经细胞的损伤作用

为了探讨超氧阴离子自由基对神经细胞的影响,以产生超氧阴离子自由基系统（XO/X）作用于原代培养的新生大鼠大脑皮层神经元,分析神经细胞的生长状态、蛋白质被氧化修饰的程度、脂质过氧化程度、核DNA损伤程度、亚细胞结构变化以及Cu/ZnSOD基因表达等变化。结果显示：超氧阴离子自由基可使神经细胞的生长状态不佳,ATP酶活性降低为4.223μmol/(mg.min^-1)(Pr)。细胞总羰基含量增加为295.40μmol/g湿重,LPO含量增加为4.87mol/g(Pr),膜脂流动性下降（P值为0.398),核DNA单链断裂增加（DNA在SCG中的迁移率为7.35mm),亚细胞结构变化（线粒体肿胀和变性等）以及SOD基因表达增强（SOD含量、SOD活性和SODmRNA丰度均增加）。结果说明超氧阴离子自由基可损伤神经细胞的蛋白质、核酸、脂质和亚细胞结构。     

黄鳝清除氧自由基作用的研究

采用化学发光法建立四个活性氧体外模型分析黄鳝粘液、血液、粗多糖清除氧自由基和抑制脂质过氧化作用。结果表明:黄鳝粘液、血液和粗多糖具有清除超氧阴离子自由基(O2·)、羟自由基(·OH)、过氧化氢(H2O2)和抑制脂质过氧化(LPO)作用。清除O2·的IC50分别为5.10±2.68μg/mL、3.62±1.56μg/mL、7.19±1.19μg/mL;清除·OH的IC50分别为5.86±1.54μg/mL、3.36±1.36μg/mL、7.93±0.50μg/mL;清除H2O2的IC50分别为6.91±1.29μg/mL、5.92±0.39μg/mL、8.21±0.61μg/mL;抑制LPO的IC50分别为8.11±0.83μg/mL、6.90±0.51μg/mL、7.62±1.01μg/mL。提示黄鳝血液清除氧自由基作用最明显,粘液次之,最弱为粗多糖。     

金属硫蛋白对缺氧／复氧心肌细胞的保护作用

金属硫蛋白 (ＭＴ)是普遍存在各种生物体内、富含硫基的小分子蛋白 ,在缺血 /再灌注 (Ｉ/Ｒ)损伤中通过清除自由基减轻心肌细胞损伤 ,同时ＭＴ参与预缺血保护 (ＩＰＣ)。目前对ＭＴ在ＩＰＣ中的保护作用机制及功效仍无明确研究 ,本实验以培养的乳鼠心肌细胞缺氧 /复氧模拟缺血 /再灌注损伤 ,检测心肌细胞在ＩＰＣ处理后 2 4ｈＭＴ的含量、脂质过氧化程度及Ｎａ Ｋ ＡＴＰ酶、Ｃａ2 Ｍｇ2 ＡＴＰ酶的活力变化 ,锌诱导产生的ＭＴ作用 ,并比较ＭＴ与抗氧化剂谷胱甘肽 (ＧＳＨ)的保护作用 ,初步探讨ＭＴ的心肌保护作用机制及应用价值。1　…     

脂质过氧化作用和缺血性心肌细胞损伤

缺血性心肌细胞损伤,应称为缺血后或缺血/再灌流损伤,因为大多数损伤不是发生在缺血期间,主要是发生在血供恢复,分子氧重新进入组织时。缺血组织出现一种新的酶活性(黄嘌呤氧化酶)和此酶作用的底物之一(次黄嘌呤)。当分子氧重新进入组织时,又提供了另一底物(O_2),于是大量自由基生成,引发细胞膜脂质过氧化而损伤细胞。     

冬葵果多糖的抗氧化作用研究

研究冬葵果多糖(Fructus Malvae polysaccharides,FMP)对氧自由基的清除作用及对脂质过氧化的抑制作用。采用分光光度法测定FMP清除Fenton体系产生的羟自由基(.OH)、邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2-.)的能力及评价对Fe(Ⅱ)-H2O2体系(.OH)诱导的脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)的抑制作用。结果显示,在化学模拟体系中,冬葵果多糖对.OH具有很强的清除作用,与VC比较达到显著水平(P<0.01),对O2-.的清除能力与VC相当。在体外,多糖浓度达到1.72 mg/mL可明显降低MDA的含量,与空白液比较达到显著水平(P<0.01)。以上结果表明,FMP具有明显的抗氧化活性。