牡丹试管苗玻璃化的研究

以MS为基本培养基,研究品种、琼脂、6-BA、大量元素、蔗糖、光照等因素对牡丹试管苗玻璃化的影响。结果显示：不同品种的牡丹试管苗在组织培养的过程中,出现不同程度的玻璃化,增加培养基中琼脂浓度、降低细胞分裂素6-BA的浓度、降低大量元素的浓度和增加光照强度或采用自然光照均可以有效地降低试管苗玻璃化。     

满天星组织培养中克服玻璃化现象的初探

通过在培养基中加入不同浓度的糖分、琼脂、细胞分裂素（ＢＡ和ＫＴ）、聚乙烯醇（ＰＶＡ）进行试验研究,发现满天星玻璃苗的数量随着糖分及琼脂浓度增加而减少,但细胞分裂素对玻璃化现象无影响,而聚乙烯醇对满天星玻璃化现象有明显的抑制作用,其最适浓度为２０ｇ／Ｌ。     

试管苗玻璃化现象的生理生化和机理探讨

试管苗玻璃化现象的生理生化和机理探讨梁海曼,周菊华（杭州大学生物系杭州３１００１２）关键词试管苗,玻璃化现象,生理生化特点,机理ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＩＣＡＬ,ＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＳＴＩＣＳＡＮＤＭＥＣＨＡＮＩＳＭＥＸＰＬＯＲＡＴＩ...     

培养条件对澳蜡花‘舞后’试管苗玻璃化的影响

以澳蜡花‘舞后’的试管苗为试验材料,研究了培养条件对其试管苗玻璃化的影响。结果表明,当以1/2MS为基本培养基,附加0.2mg·L-16-BA、0.01mg·L-1IBA、4%蔗糖、0.8%琼脂并在以塑料封口膜为封口材料的三角瓶内培养时,试管苗的增殖系数较高,玻璃化率较低。     

不同因素对草莓玻璃化试管苗恢复的影响

旨在探索草莓玻璃化试管苗恢复措施。以‘丰香’草莓玻璃化试管苗为材料,采用正交设计的方法,在继代培养基中添加不同浓度组合的活性炭、聚乙烯醇和钙离子(氯化钙),研究不同组合对草莓玻璃化试管苗恢复的影响,同时比较恢复后的正常试管苗与原来的玻璃化苗及正常苗的生理生化指标。结果表明,正交设计的9种处理间草莓玻璃化苗的恢复率差异显著,恢复率最高的是处理9(1 g/L活性炭+2 g/L聚乙烯醇+166 mg/L钙离子),恢复率为89.07%,其次是处理4(0.5 g/L活性炭+166mg/L钙离子),81.05%、处理8(1 g/L活性炭+1 g/L聚乙烯醇),73.87%。方差分析表明,活性炭、聚乙烯醇、钙离子浓度对草莓玻璃化苗恢复的影响都极为显著,影响大小依次是钙离子>活性炭>聚乙烯醇。恢复苗的各项生理生化指标与玻璃化苗差异显著,与正常苗差异不显著。结合各处理对玻璃化苗的恢复率、生理生化指标及增殖系数,综合考虑认为使草莓玻璃化试管苗恢复的最佳处理为处理9。     

甜瓜试管苗继代培养玻璃化现象的研究

试管苗玻璃化现象是甜瓜组织基因转化过程中试管苗继代培养过程中的一大障碍,采用在培养基中提高糖和琼脂的浓度,添加适当的钙离子,细胞分裂素6-BA含量不超过0.2mg/L,生长素IAA用量控制在0.5mg/L,适当的光,光照强度和温度对克服甜瓜玻璃苗玻璃化现象有明显的效果.     

玻璃化与正常苹果试管苗的叶片和茎的显微结构比较

以苹果品种‘鲁加5号’试管苗为试材,其用石蜡切片和电镜扫描观察方法,比较玻璃化与正常试管苗叶片和茎的显微结构的结果表明：苹果玻璃化试管苗的叶片和茎的显微结构与正常试管苗有显著差异,前者的叶片厚度变大,表皮细胞密度极低;表皮细胞体积膨大,液泡化,栅栏组织厚度减小,海绵组织厚度增加;气孔器的长轴变化不明显,短轴变宽,气孔密度极高;茎的维管组织中有空洞和塌陷,导管管壁多皱褶,筛管中无淀粉粒积累。     

外源ABA对大蒜试管苗玻璃化发生和抗氧化系统的影响

以大蒜品种‘二水早’试管苗为材料,从活性氧代谢的角度研究了外源ABA、H_2O_2和H_2O_2+ABA处理下的试管苗玻璃化率、活性氧积累与组织定位和抗氧化系统的响应特征,探讨ABA缓解试管苗玻璃化过程的机理。结果表明:(1)外源H_2O_2处理可诱导大蒜试管苗玻璃化发生,外源ABA处理下玻璃化率最低,可以缓解H_2O_2诱导的玻璃化的发生。(2)试管苗O_2~产生速率和H_2O_2含量在H_2O_2处理下最高,在ABA处理下最低;在添加H_2O_2的培养基中同时添加ABA能显著减少因外源H_2O_2处理引起的O_2~产生和H_2O_2积累。(3)试管苗CAT、POD和APX活性在外源H_2O_2处理前期(0~8d)均上升并显著高于对照,但其CAT、APX活性在处理后期(8~16d)下降,其同期POD活性也增加缓慢;各抗氧化酶的活性在外源ABA与H_2O_2+ABA处理前期(0~8d)均呈直线上升趋势,而它们在H_2O_2+ABA处理后期(8~16d)均显著高于H_2O_2处理。(4)各处理试管苗抗坏血酸和谷胱甘肽含量随处理时间先升高后降低,并以外源ABA处理下最高,外源H_2O_2处理下最低。(5)试管苗O_2~和H_2O_2产生部位主要在基部和叶尖,且外源ABA处理下组织中ROS的积累最少。(6)在ABA+H_2O_2处理下,大蒜试管苗内丙二醛含量和膜相对透性显著低于对照和H_2O_2处理。研究发现,外源ABA处理可有效降低大蒜试管苗的内源O_2~产生速率和H_2O_2含量,提高抗氧化酶活性和抗氧化物质含量,抑制活性氧在试管苗内的产生和运输,显著降低试管苗玻璃化率;外源ABA可通过增强大蒜试管苗抗氧化能力来抑制玻璃化发生。     

木薯商业品种的指纹图谱构建

利用SSR分子标记技术构建10个木薯商业品种的指纹图谱。通过基因组多态性分析,从已定位于木薯连锁群的44对SSR引物中筛选到22对扩增效果好的引物,经统计分析发现,用其中4对引物ssry-13、ssry-19、ssry-23和ssry-45的组合能够建立该组木薯商业品种的指纹图谱,品种鉴定的置信概率达到99.9985%。     

银翘解毒软胶囊GC指纹图谱分析

目的:建立银翘解毒软胶囊的气相指纹图谱。方法:采用5%二苯基,95%二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱(30mm×0.32 mm×0.25μm,Agilent HP-5),柱温为程序升温,流速1.0 m L.min-1。测定10批银翘解毒软胶囊,建立其气相指纹图谱。结果:指纹图谱中共标记了16个共有峰,10批银翘解毒软胶囊指纹图谱相似度均大于0.99。结论:该方法具有良好的精密度、重复性、稳定性,可用于银翘解毒软胶囊质量的综合评价。     

Effect of Cytokinins and Cytokinin Antagonists on in vitro Cultured Gypsophila paniculata L.

This study deals with the effects of two cytokinins [kinetin (Kin) and N-(2-chloro-4-pyridyl)-N-phenylurea (CPPU)] and cytokinin antagonists [2-chloro-4-cyclobutyl-amino-6-ethylamino-1,3,5-triazine (ACK1) and N-(4-pyridyl)-O-(4-chlorophenyl)carbamate (ACK2)] in concentration of 1 μM on in vitro cultured Gypsophila. The application of Kin and CPPU stimulated bud opening and increased fresh and dry masses. Cytokinin antagonists reduced the number of sprouted buds and bud fresh and dry masses. In plants treated with CPPU the chloroplasts possessed well developed membrane system, which covered almost the entire chloroplasts volume. In ACK2 treated plants, the plastid apparatus in each cell was represented by two types of chloroplast in which the inner membrane system was differently organized. Cell wall adjacent chloroplasts possessed structure similar to the controls. In inner located chloroplasts part of thylakoids were semi-concentrically arranged and partially destructed. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

Adventitious shoot regeneration from leaf explants of Gypsophila paniculata L.

Adventitious shoots were successfully regenerated from leaf explants of Gypsophila paniculata L. The efficiency of shoot regeneration for cv. Arbel was tested on 18 media based on Murashige and Skoog basal medium containing different concentrations of thidiazuron or 6-benzylaminopurine in combination with naphthaleneacetic acid. Both explant age and that of the cuttings used as leaf donors affected the regeneration efficiency. The highest efficiency of adventitious shoot regeneration was obtained with the oldest leaves originating from the youngest cutting analyzed; on thidiazuron-containing medium, shoots regenerated on average from 67% of the leaves, with an average of seven shoots per explant. This regeneration procedure was suitable for all six commercial cultivars studied. Regenerated shoots elongated, rooted and successfully acclimatized to the greenhouse where they were grown to flowering. Received: 25 July 1998 / Revision received: 11 November 1996 / Accepted: 30 November 1996     

In vitro culture of Gypsophila paniculata L. and random amplified polymorphic DNA analysis of the propagated plants

A protocol is established for regeneration of the economically important cut flower plant, Gypsophila paniculata L., using shoot tips explants. Multiple shoots were obtained on Murashige and Skoog medium fortified with 0.5 mg dm⁻³ each of α-naphthaleneacetic acid and 6-benzyladenine. Addition of 10 g dm⁻³ agar promoted shoot proliferation and reduced the degree of shoot vitrification. Transfer to 3 mg dm⁻³ indole⁻³-butyric acid containing medium produced optimum root initiation and development. The produced plants as well as intact plants were subjected to the random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis. Using 9 primers, the total number of amplification products generated by polymerase chain reaction was 142 bands (15.7 bands per primer), of which 7.74 % showed polymorphism. The analysis of bands recorded, showed 92.25 % similarity. The results indicated that very low variation at the DNA level occurred during in vitro culture of Gypsophila.     

鸢尾属植物遗传多样性的 RAPD和ISSR分析

应用RAPD和ISSR标记技术,对来自不同产地的鸢尾属(IrisL.)4个野生种的遗传多样性进行了分析。结果表明,12个RAPD和ISSR引物分别扩增出225和196条带,多态性条带分别为215和196条,多态性条带百分率分别为95.56%和100.00%;种间总基因多样度分别为0.368 9和0.357 5、种内基因多样度分别为0.107 7和0.138 0,表明鸢尾属种间遗传多样性较高,且种间变异大于种内变异。4个野生种中,蝴蝶花(I.japonicaThunb.)的遗传组成较为丰富。此外,种内遗传关系与地理分布和环境差异有一定的相关性。     

幽门螺杆菌随机扩增多态性DNA指纹图谱分析

应用随机扩增多态性DNA指纹法(RandomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)对来自29例消化性溃疡和19例单纯性胃炎病人的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)菌株基因组DNA进行PCR反应,建立Hp的DNA指纹图谱,运用统计分析软件(Statisticanalysissoftware,SAS)对HpDNA指纹图的相似性以及与疾病的相关性进行分析。结果显示,这些菌株按HpDNA指纹图可分为两大类,两种来源的菌株在两大类中的比例有明显差异(P<0.05)。提示可能存在与疾病相关的特异基因型。     

甜樱桃品种及其砧木的RAPD分析

利用RAPD技术,从130个随机引物中筛选出46个引物,对欧洲甜樱桃、欧洲酸樱桃、马哈利樱桃和野生中国樱桃4个类型樱桃种,以及欧洲甜樱桃与中国樱桃的种间杂交种共15个品种的基因组遗传变异进行分析。结果表明,46个随机引物均得到了稳定可重复的RAPD图谱,扩增出的DNA条带大小在100~2625bp之间,多态性位点数517个,多态性位点百分率为98.85%,每个随机引物扩增出的多态性DNA条带数在4~23条。品种间Nei遗传距离在0.166~0.479之间,平均遗传距离0.329;甜樱桃新品种‘秦樱1号’与‘秦岭玛瑙’、‘CDR-1’等10个樱桃砧木之间的遗传距离在0.248~0.376,并且根据遗传距离可以相互区分,所分析的15个樱桃品种均扩增出了特有的DNA条带,每个樱桃特有标记带在2~17个之间,共扩增出149个特有标记,据此可以进行樱桃品种及砧木的RAPD鉴定。研究认为利用RAPD技术可以在分子水平上对甜樱桃品种及其砧木进行快速鉴定。     

国产甘草属植物的RAPD分析及其分类学研究

应用RAPD技术,探讨甘草属(G ly cy rrh iza L.)13种1变种30个植物类群的遗传差异和几个争议种的分类地位。从60个随机引物中筛选出14个多态性好的引物进行RAPD实验,DNA片段的二态数据用U PGM A聚类法构建系统发育树。共扩增出250条带,多态性带204条,约占总数的81.7%。聚类结果显示RAPD分子标记构建的系统发育树与经典分类系统一致。甘草属植物具有丰富的遗传多样性,同种内不同居群间的遗传分化较大。黄甘草、胀果甘草、乌拉尔甘草三者亲缘关系较近,平卧甘草与粗毛甘草存在很大的遗传差异,作为独立种较合理。RAPD标记可为甘草属植物的系统分类研究提供分子生物学依据。     

新疆石榴品种的RAPD分析

利用RAPD技术对23个石榴品种进行亲缘关系鉴定和品种分类研究.从50条10 bp随机引物中筛选出7条扩增效果较好的引物进行扩增,共扩增出88条带,其中多态性带为61条,多态率达69%.根据扩增结果进行UPGMA聚类分析,聚类结果将23个品种分为5大类群,第1类包括库尔勒市甜石榴与喀什市大籽甜石榴等甜石榴品种;第2类是阿图什市酸石榴;第3类包括喀什市阿奇克阿娜尔、叶城酸石榴等酸石榴品种;第4类包括吐鲁番市甜石榴、库车酸甜石榴等种间杂交和来源不详品种;第5类包括皮亚曼石榴和策勒1号等新疆优质石榴品种.研究结果表明:石榴品种间的遗传多态性有明显差异,即使父母本相同的品种也能区别.     

山茶花叶片DNA提取及RAPD反应体系的研究

山茶花（Camellia japonica L.）是我国特产的名贵花卉之一,由于其品种繁多,在系统分类和品种鉴定上存在一定的难度。本研究针对山茶花的DNA提取方法和RAPD扩增体系进行了摸索,旨在为山茶花在DNA水平的分类鉴定和分子生物学方面研究打下一定的基础。实验采用改进的CTAB法提取山茶花叶片DNA,得到的DNA纯度较高,OD₂₆₀/OD₂₃₀值为1.90～2.0,OD₂₆₀/OD₂₈₀值为1.80～1.83,得率也较高,一般在150～200 μg·g^-1左右,片段完整性较好,大于20 kb,符合分子遗传实验的要求;在山茶花RAPD扩增条件的研究中,发现20 μL反应体系中加入100 ng DNA、125 μmol·L^-1 dNTP(each)、1.2 μmol·L^-1 Mg²⁺、1×Buffer、0.5 μmol·L^-1引物、1 U Taq酶最为合适,退火温度一般设为37℃左右,扩增产物的电泳条带数多、清晰、明亮。     

宁夏枸杞遗传多样性的RAPD分析

利用13个经筛选在样品间具多态性的10碱基随机引物,对宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)4个主要栽培品种及3个宁夏野生枸杞的总DNA进行PCR扩增。在样品间共产生123条RAPD标记带,其中多态性带68条,多态性百分比为55.28%;以Ntsyspc2.1软件计算样品间的遗传相似系数,并进行UPGMA聚类分析。结果表明宁夏枸杞栽培品种间遗传关系较近,特别是宁杞1号和宁杞2号,相似性系数达81.82%;而野生枸杞与栽培品种间遗传关系较远。